Отправить статью по E-mail ЛОКАЛИЗАЦИЯ И АКТИВНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНОГО СТРЕПТАВИДИНА В КЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЯХ E. Сoli
- Авторы: Зотова ДВ1, Грудинина НА1, Антимонова ОИ1, Шавловский ММ1,2, Поляков ДС1
-
Учреждения:
- ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»
- ФГБНУ «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова»
- Выпуск: Том 18, № 3 (2018)
- Страницы: 69-76
- Раздел: Статьи
- Статья опубликована: 15.09.2018
- URL: https://journals.eco-vector.com/MAJ/article/view/10935
- DOI: https://doi.org/10.17816/MAJ18369-76
- ID: 10935
Цитировать
Полный текст
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Доступ платный или только для подписчиков
Аннотация
Предложена генетическая конструкция, позволяющая получать рекомбинантный стрептавидин (SA) дикого типа в биологически активной форме с высоким выходом. Показано, что путем введения в белок дополнительного лидерного пептида и олигогистидиновой последовательности можно выделить растворимый SA из культуральной среды и из клеточных фракций. Выявлено, что температура индукции синтеза белка оказывает существенное влияние на характер распределения SA по фракциям. Получаемый продукт не загрязнен эндогенным биотином (BT). Способ дает возможность избежать стадий денатурации и ренатурации, которые необходимы при технологии получения целевого продукта из телец включения и в значительной степени снижают выход. Таким образом, предлагаемый подход обеспечивает повышение выхода биологически высокоактивного стрепативидина (способного связывать BT и биотинсодержащие соединения), который может быть использован для различных практических целей.
Полный текст
Об авторах
Д В Зотова
ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»
Н А Грудинина
ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»
О И Антимонова
ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»
М М Шавловский
ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»; ФГБНУ «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова»
Д С Поляков
ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»
Список литературы
- Zhang M, Shao J, Xiao J, et al. A novel approach to make homogeneous protease-stable monovalent streptavidin. Biochem Biophys Res Commun. 2015;463(4):1059-1063. doi: 10.1016/j.bbrc.2015.06.058.
- Green NM. Avidin and streptavidin. Methods Enzymol. 1990;184:51-67. doi: 10.1016/0076-6879(90)84259-j.
- Syrkina MS, Shirokov DA, Rubtsov MA, et al. Preparation and functional evaluation of RGD-modified streptavidin targeting to integrin-expressing melanoma cells. Protein Eng Des Sel. 2013;26(2):143-150. doi: 10.1093/protein/gzs076.
- Hofmann K, Wood SW, Brinton CC, et al. Iminobiotin affinity columns and their application to retrieval of streptavidin. Proc Natl Acad Sci U S A. 1980;77(8):4666-4668. doi: 10.1073/pnas.77.8.4666.
- Поляков Д.С., Грудинина Н.А., Соловьев К.В., и др. Бета2-микроглобулиновый амилоидоз: фибриллогенез природного и рекомбинантных бета2-микроглобулинов человека // Медицинский академический журнал. - 2010. - Т. 10. - № 2. - С. 40-49. [Polyakov DS, Grudinina NA, Solov’ev KV, et al. Bela2-microglobuline amyloidosis: Fibrillogenesis of natural and recombinant human beta2-microglobulines. Medical academic journal. 2010;10(2);40-49 (In Russ.)]
- Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, et al. Current Protocols in Molecular Biology. New York: John Wiley & Sons; 1989.
- Поляков Д.С., Грудинина Н.А., Соловьев К.В., и др. Получение рекомбинантного β2-микроглобулина человека и его фибриллогенез при низких и нейтральных значениях рН // Молекулярная медицина. - 2011. - № 2. - C. 36-39. [Polyakov DS, Grudinina NA, Solov’ev KV, et al. Production of recombinant human β2-microglobulin and its amyloid fibril formation at acidic and neutral pH. Molekuliarnaia meditsina. 2011;(2);36-39. (In Russ.)]
- Solovyov KV, Polyakov DS, Grudinina NA, et al. Expression in E. coli and purification of the fibrillogenic fusion proteins TTR-sfGFP and beta2M-sfGFP. Prep Biochem Biotechnol. 2011;41(4):337-349. doi: 10.1080/10826068.2010.548433.
- Поляков Д.С., Антимонова О.И., Сахабеев Р.Г., и др. Влияние наночастиц из полимолочной кислоты на иммуногенность связанного с ним белка // Инфекция и иммунитет. - 2017. - Т. 7. - № 2. - С. 123-129. [Polyakov DS, Antimonova OI, Sakhabeev RG, et al. Polylactic acid nanoparticles influence on immunogenicity of the protein bound with them. Russian Journal of Infection and Immunity. 2017;7(2):123-129. (In Russ.)] doi: 10.15789/2220-7619-2017-2-123-129.
- Solovyov KV, Kern АM, Grudinina NA, et al. Genetic structures and conditions of their expression, which allow receiving native recombinant proteins with high output. International Journal of biomedicine. 2012;2(1):45-49.
- Антимонова О.И., Грудинина Н.А., Егоров В.В., и др. Взаимодействие красителя конго красный с фибриллами лизоцима, бета2-микроглобулина и транстиретина // Цитология. - 2016. - Т. 58. - № 2. - С. 156-163. [Antimonova OI, Grudinina NA, Egorov VV, et al. Interaction of the dye congo red with fibrils of lysozyme, beta2-microglobultn and transthyretin. Cell and tissue biology. 2016;58(2):156-163. (In Russ.)]
- Поляков Д.С., Сахабеев Р.Г., Шавловский М.М. Частичная денатурация рекомбинантного белка для его аффинного выделения // Прикладная биохимия и микробиология. - 2016. - Т. 52. - № 1. - С. 122-127. [Polyakov DS, Sakhabeev RG, Shavlovskiy MM. Polylactic acid nanoparticles influence on immunogenicity of the protein bound with them. Applied biochemistry and microbiology. 2016;52(1):122-127. (In Russ.)]. doi: 10.7868/S0555109916010104.
Дополнительные файлы
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).