Том 18, № 3 (2018)

Нами проведен обзор имеющихся данных по патогенезу наследственной моторно-сенсорной полиневропатии Шарко - Мари - Тута. Вопрос о роли в нем воспалительных изменений не до конца изучен. Известна важность процессов перекисного окисления липидов, воспалительных нарушений и увеличения или уменьшения гуморальных факторов воспаления, в том числе цитокинов. Описан ряд случаев сочетания наследственных, острых и хронических воспалительных полиневропатий. Данные патогенетические особенности в случае быстрого ухудшения состояния больных с болезнью Шарко - Мари - Тута позволяют предположить активацию воспалительных процессов, развивается болевой синдром, что нехарактерно для данного заболевания. В этом случае следует рассматривать вопрос о применении у пациентов противовоспалительной терапии.

Данная работа посвящена исследованию особенностей методики внутрипортального введения мононуклеарных клеток (МНК) аутологичного костного мозга человека у пациентов из листа ожидания трансплантации печени. В исследование были включены 8 пациентов. Показатель печеночной недостаточности по шкале MELD превышал 10 баллов (от 12 до 22 баллов), а по критерию Child-Turcotte-Pugh тяжесть печеночной недостаточности соответствовала классам B и С. Методом билатеральной трепан-аспирации из заднего гребня подвздошной кости получали от 224 до 320 мл аспирата аутологичного костного мозга, объем фракции МНК составил от 47,1 до 58,3 мл (медиана - 47 мл). Абсолютное количество полученных жизнеспособных МНК равнялось 1,24 · 109-5,84 · 109, а CD34+-клеток - 2,54 · 106-48,20 · 106. После катетеризации портальной вены и прямой портографии во всех случаях отмечено наличие венозных коллатералей. Для определения оптимальной скорости селективной перфузии сегментарных ветвей портальной вены выполняли портофлоуметрию. Инфузию в портальную вену осуществляли со скоростью 0,3-1,5 мл/с. Во время процедуры получения костного мозга и введения МНК серьезных нежелательных явлений отмечено не было. У всех пациентов в период 3 мес. наблюдения после введения МНК зафиксирована стабилизация цирроза печени - отсутствие ухудшения исходного статуса по данным показателей MELD и Child-Turcotte-Pugh. Наблюдалось улучшение соматического статуса по опроснику SF-36. В исследовании доказана безопасность внутрипортальной терапии МНК у пациентов в листе ожидания трансплантации печени, продемонстрирована методика таргетной доставки МНК аутологичного костного мозга в печень, позволяющая минимизировать их потерю при внутрипортальном способе введения. Для оценки эффективности воздействия мононуклеарных клеток аутологичного костного мозга требуется увеличение выборки пациентов, сроков наблюдения и дальнейшее усовершенствование данной методики.

Цель настоящего исследования состояла в разработке метода одновременной иммуногистохимической детекции нейронов и астроцитов с использованием пероксидазной метки с последующим анализом при помощи микроскопии в проходящем свете. Для этого была выбрана пара антигенов, каждый из которых специфически выявляет либо только нейроны, либо астроциты (в качестве маркеров были использованы ядерный белок нервных клеток (NeuN) и глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP) соответственно). Данная методика дает возможность не только идентифицировать исследуемые клетки, но и оценивать их функциональное состояние как в норме, так и при патологических воздействиях. Предложенный протокол окраски позволяет значительно упростить и оптимизировать процесс обнаружения одновременно двух антигенов на препарате и способствует повышению качества получаемых препаратов.

Цель исследования - в эксперименте in vivo изучить особенности течения репаративной регенерации роговицы при индуцированной эндотелиально-эпителиальной дистрофии (ЭЭД) после введения суспензии аутологичных мононуклеарных лейкоцитов в заднюю треть стромы роговой оболочки. Материалы и методы. Эксперимент выполнен на 27 кроликах породы Шиншилла (27 глаз). На первом этапе эксперимента всем животным воспроизводили модель ЭЭД роговицы путем механического повреждения и удаления ее эндотелиального слоя. На втором этапе через 2 нед. после развития заболевания животных разделяли в зависимости от планируемого лечения на две группы: основную, 12 животным которой однократно в заднюю треть стромы роговицы вводили суспензию аутологичных мононуклеарных лейкоцитов; сравнения, 12 животным которой проводили консервативное лечение ЭЭД роговицы. Результаты. Воспроизведение in vivo ЭЭД роговицы путем механического повреждения и удаления ее эндотелиального слоя сопровождается быстрым (в течение 2 нед.) развитием заболевания с диффузной гидропической дистрофией переднего эпителия, выраженным отеком стромы с расслоением коллагеновых волокон. На экспериментальной модели ЭЭД роговой оболочки установлено, что введение суспензии аутологичных мононуклеарных лейкоцитов в заднюю треть стромы роговицы при лечении заболевания обеспечивает быструю (в 1,5 раза) дегидратацию стромы, уменьшает в 1,2 раза число дистрофических клеток в переднем эпителии по сравнению с консервативным лечением. Срок восстановления нормальной толщины среза роговицы у животных основной группы сокращается в 1,4 раза. Заключение. Введение суспензии аутологичных мононуклеарных лейкоцитов в заднюю треть стромы роговицы при лечении экспериментальной ЭЭД роговой оболочки индуцирует репаративную регенерацию, ускоряя восстановление поврежденных структур роговицы и препятствуя ее неоваскуляризации.

Предложена генетическая конструкция, позволяющая получать рекомбинантный стрептавидин (SA) дикого типа в биологически активной форме с высоким выходом. Показано, что путем введения в белок дополнительного лидерного пептида и олигогистидиновой последовательности можно выделить растворимый SA из культуральной среды и из клеточных фракций. Выявлено, что температура индукции синтеза белка оказывает существенное влияние на характер распределения SA по фракциям. Получаемый продукт не загрязнен эндогенным биотином (BT). Способ дает возможность избежать стадий денатурации и ренатурации, которые необходимы при технологии получения целевого продукта из телец включения и в значительной степени снижают выход. Таким образом, предлагаемый подход обеспечивает повышение выхода биологически высокоактивного стрепативидина (способного связывать BT и биотинсодержащие соединения), который может быть использован для различных практических целей.

Цель исследования - определить серотиповую принадлежность и факторы вирулентности штаммов E. coli серогруппы О26, выделенных от детей с диарейным синдромом. Материалы и методы. Изучены 53 штамма E. coli О26, выделенные в 2014-2016 гг. из испражнений детей с клиническими проявлениями острой кишечной инфекции (ОКИ) в Санкт-Петербурге. Использовали фенотипические (определяли ферментативные и антигенные свойства, продукцию шига-токсинов) и молекулярно-генетические (ПЦР) методы: проводили детекцию генов вирулентности, характерных для энтеропатогенных (EPEC) и энтерогеморрагических (ЕНЕС) E. coli (eae, bfp, hlyA и eae, stx1, stx2, ehxA соответственно), генов, кодирующих О- и Н-антигены (rfb и fliC), генов, определяющих филогенетическую группу (chuA, yjaA и TspE). Определяли филогенетическую группу и продукцию шига-токсинов. Результаты исследований. Все штаммы E. coli были идентичны по антигенной характеристике - относились к серотипу О26:Н11 и принадлежали к филогенетической группе В1. По набору генов вирулентности относились к двум патогруппам: а-ЕРЕС (64,2 %) и ЕНЕС (35,8 %). Штаммы ЕНЕС продуцировали шига-токсин 1, кодируемый геном stx1. Различия в ферментативной активности между штаммами E. coli О26:Н11 ЕРЕС и ЕНЕС выявлены не были. Заключение. В данной работе показано, что в популяции E. coli О26:Н11, вызывавших ОКИ у детей в Санкт-Петербурге, более 30 % штаммов принадлежали к группе ЕНЕС. Молекулярно-генетические методы позволяют достоверно определять высоковирулентные штаммы возбудителей эшерихиозов.