Cellular-molecular mechanisms of atherosclerosis development (Scientific legacy of academician RAMS V. A. Nagornev)

Abstract


The article present the main stages of the scientific search of the prominent Russian medical academician RAMS V. A. Nagornev. Creative and organization activity of academician RAMSV. A. Nagornev allowed collective under his management was carry out investigation complex directed upon to discover cellular-molecular mechanisms for atherosclerosis development, to exploit and to inculcate of new diagnostic methods, to fight with disease, named today "Humanity Killer №1". It is established, that atherosclerosis pathogenesis connected both low density modify lipoproteins and reactions, which developed into vessel wall. As a result of fundamental studying of disease aspects V. A. Nagornev at colleagues have formulated and proved the autoimmune theory of atherosclerosis pathogenesis. Analysis of inflammation reactions into vessel wall showed, that elements of vessel immune answer may launch not only atherogenesis but modulate and check it. The last academician's RAMS V. A. Nagornev creative planes was penetrated idea to exploit atheroprotective vaccine. Conducted experiments allow to hope today, that a suppression of proatherogenic or activation of antiatherogenic immune response may provide new approaches of prevention and treatment this heavy disease.

Ведущее место в сосудистой патологии занимает атеросклероз. Данное заболевание рассматривают как основную причину развития ишемической болезни сердца, инсульта, поражений артерий нижних конечностей и различных органов. Высокий процент осложнений атеросклероза, нередко заканчивающихся летальным исходом, ставит эту проблему в число наиболее актуальных. Атеросклероз - тяжелая ноша или крест, который несет человечество в расплату за цивилизацию. Клинические проявления атеросклероза во многом зависят от того, где в сосудистом дереве локализовано поражение. Анализ секционного материала показывает, что иногда достаточно присутствия в коронарной артерии сердца одной атеросклероти-ческой бляшки с определенной локализацией, чтобы вызвать обширный трансмуральный инфаркт. Сложность лечения атеросклероза во многом объясняется трудностью диагностики ранней стадии заболевания, когда эффективность проводимой терапии наиболее высока. При лечении запущенных форм атеросклероза, которые, как правило, диагностируются уже по осложнениям основного заболевания, получение благоприятного клинического эффекта маловероятно. Вся научная и творческая жизнь академика РАМН В. А. Нагорнева была посвящена глубокому и всестороннему изучению морфо- и патогенеза атеросклероза. Он считал, что все вопросы морфо- и патогенеза атеросклероза нельзя рассматривать в отрыве от биохимических, иммунологических и патофизиологических данных, оценивающих состояние организма в целом. Академик РАМН В. А. Нагорнев определял атеросклероз как результат взаимодействия модифицированных апоВ-содержащих липоп-ротеинов низкой плотности (мЛПНП) с клетками внутренних органов и тканей, и прежде всего сосудистой стенки. Он всегда настаивал на положении, что без раскрытия внутренних условий, обеспечивающих гомеостаз липопротеинов низкой плотности, являющихся основными носителями холестерина, невозможно понять процессы, которые протекают при атеросклерозе на клеточном и молекулярном уровнях. АУТОИММУННАЯ ТЕОРИЯ ПАТОГЕНЕЗА АТЕРОСКЛЕРОЗА Уже в начале своего научного пути В. А. Нагорнев свернул с проторенной дороги традиционных исследований и осуществил комплексную работу по изучению роли иммунологических факторов в ате-рогенезе. При моделировании экспериментального атеросклероза у кроликов были детально изучены иммунологические факторы, связанные с развитием сенсибилизации к атерогенным апоВ-содержащим липопротеинам, включая анализ образования аутоан-тител и иммунных комплексов, содержащих ЛПНП в качестве антигена. Результаты этих экспериментальных исследований позволили рассматривать поражения артерий как проявление аутоиммунного процесса. Сформулированная в дальнейшем аутоиммунная теория патогенеза атеросклероза (была зарегистрирована в качестве открытия в 1982 г.) предусматривает развитие в организме последовательной цепи событий: 1) модификация апопротеинВ-содержащих липопротеинов; 2) появление у модифицированных липопротеинов аутоантигенных свойств; 3) образование антител против указанных липопротеинов; 4) формирование циркулирующего в крови модифицированного аутоиммунного комплекса липопроте-ин-антитело; 5) фиксация комплекса на поверхности артериальной стенки и нарушение целостности эндо-телиального покрова, способствующее проникновению как самого иммунного комплекса, так и свободных ЛПНП в интиму артерий; 6) неконтролируемый захват макрофагами артериальной стенки иммунного комплекса липопротеин-антитело, накопление в них холестерина и трансформация макрофагальных клеток в пенистые клетки; 7) развитие очагового атеро-склеротического повреждения артериальной стенки с разрушением клеток и волокон и удаление продуктов распада по ходу оттока лимфы в регионарные к сосудам лимфатические узлы; 8) образование антител к сосудистым антигенам, их фиксация на измененных сосудистых структурах и дальнейшее усугубление атеросклеротического процесса. Академик РАМН В. А. Нагорнев понимал, что как бы ни были убедительны данные, полученные на животных, необходимо провести изучение роли иммунных факторов при развитии атеросклероза у человека. В результате проведенной работы в крови у больных атеросклерозом были обнаружены антитела к модифицированным ЛПНП и аутоиммунные комплексы, включающие мЛПНП в качестве антигена. Важно, что концентрация аутоиммунного комплекса у больных ИБС была значительно выше, чем у здоровых лиц. Следует отметить, что присутствие в крови у большинства больных ИБС указанных комплексов сопровождалось, наряду с развитием сенсибилизации лимфоцитов к аутологичным апоВ-содержащим липопротеинам, нарушениями в Т-клеточном звене иммунитета. Эти нарушения проявлялись, главным образом, в дисбалансе супрессорно-хелперной системы, а именно: количество Т-хелперов и их активность значительно увеличивались, активность Т-супрессоров, напротив, снижалась по сравнению со здоровыми людьми. В дальнейших исследованиях, выполненных под руководством академиков РАМН В. А. Нагорнева, А. Н. Климова и профессора А. Д. Денисенко, было показано, что комплексы липопротеин-антитело обладают выраженной цитотоксичностью. Инкубация мышиных перитониальных макрофагов с такими комплексами, выделенными из плазмы крови человека, приводила к гибели большей части клеток в течение первых 4 ч опыта. Продолжая исследования в этом направлении, В. А. Нагорнев убедительно доказал, что перекисно-модифицированные ЛПНП и иммунные комплексы, их включающие, вызывают как апоптоз, так и некроз клеток, в зависимости от степени модификации ЛПНП. На основании проведенных исследований В. А. Нагорнев предложил оригинальную идею о влиянии иммунного комплекса липопротеин-антитело на проникновение меченных (йодированных) ЛПНП в сонную артерию кролика при ее перфузии in situ. Гипотеза нашла убедительное подтверждение в эксперименте. Было показано, что перфузия сонной артерии аутологичной кровью, содержащей иммунный комплекс, вызывает выраженные повреждения плазматических мембран эндотелиальных клеток и резкое увеличение поступления в интиму меченных ЛПНП. При перфузии сонной артерии аутологичной кровью, содержащей соответствующее количество нативных липопротеинов и неспецифического иммуноглобулина, подобных повреждений эндотели-альных клеток не обнаруживалось, а проникновение ЛПНП в стенку артерии было незначительным. Таким образом, была показана возможность повреждения эндотелиальных клеток иммунным комплексом липопротеин-антитело, что приводило к увеличению поступления в интиму самих комплексов и атерогенных липопротеинов. Эти данные были обобщены в коллективной монографии «Иммуноре-активность и атеросклероз». КЛЕТОЧНО-МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РАЗВИТИЯ ИММУННОГО ВОСПАЛЕНИЯ В СОСУДИСТОЙ СТЕНКЕ ПРИ АТЕРОГЕНЕЗЕ В начале 90-х гг. академик РАМН В. А. Нагорнев одним из первых приступил к изучению имму-новоспалительных процессов, возникающих при атерогенезе в стенке артерий человека. Сотрудниками лаборатории атеросклероза им. Н. Н. Аничкова под руководством В. А. Нагорнева было показано, что начало развития иммунного воспаления связано с увеличением экспрессии на эндотелии хемоадге-зивных молекул и хемоаттрактантов. К этому, в частности, приводит экспрессия эндотелиальными клетками низкомолекулярного белка CD40 и его лиганда CD40L, а также IL-lp\ Параллельный анализ аорты и коронарных артерий с использованием сканирующей и трансмиссионной микроскопии показал, что именно в этих зонах происходит адгезия негранулярных лейкоцитов (моноциты, лимфоциты) на неповрежденном эндотелии. Данная реакция оказалась универсальной и с одинаковой степенью выраженности наблюдалась на самых ранних стадиях атерогенеза как у человека, так и у животных при моделировании экспериментальной гиперхолестеринемии. Важно, что моноциты, фиксированные на эндотелии в данных зонах и мигрирующие в интиму артерий, интенсивно экспрессируют фактор некроза опухоли-альфа (TNF-d). Именно эти клеточные реакции характеризуют начало формирования атеросклеротических поражений. Таким образом, полученные данные показывают, что развитие иммунного воспаления при атерогенезе осуществляется через экспрессию и включение адгезивных молекул в клеточные взаимодействия, которые необходимы для миграции клеток крови в сосудистую стенку и дальнейшего прогрес-сирования атеросклеротических поражений. В. А. Нагорнев и его сотрудники провели углубленное исследование клеточной кинетики в динамике атеросклероза у человека. Было установлено, что клетки крови, мигрирующие в интиму, вступают в контакт с клетками сосудистой стенки и не оставляют без внимания как окружающие их мЛПНП, так и прочие компоненты ткани, представляющие антигенную ценность. Выяснилось, что избирательное накопление макрофагов и Т-лимфоцитов в интиме артерий может вносить существенный вклад в имму-новоспалительные реакции при атерогенезе у человека. В этих исследованиях впервые описана фенотипи-ческая дифференцировка макрофагов при атерогенезе. В настоящее время удалось выделить три фенотипа макрофагов, выполняющих различные функции в атеросклеротических поражениях артерий. Первый фенотип представлен макрофагами, которые мигрируют в интиму в зону скопления мЛПНП, захватывают мЛПНП и иммунные комплексы с помощью скевенджер- и Fc-рецепторов и трансформируются в пенистые клетки. Второй фенотип представлен популяцией макрофагов, которые локализованы в поверхностных и глубоких отделах атеросклеротических поражений и не трансформируются в пенистые клетки, хотя и находятся в окружении последних. Эти клетки, в отличие от макрофагов первого фенотипа, интенсивно продуцируют IL-ip и в меньшем количестве IL-la. Выраженная экспрессия этих же цитокинов наблюдается и в гладкомышечных клетках, мигрирующих в зону отложения мЛПНП из глубины интимы или из средней оболочки. Можно предполагать, что глад-комышечные клетки тоже включаются в иммунное воспаление, развивающееся в атеросклеротических поражениях. Третий фенотип представлен популяцией клеток, которые так же не трансформируются в пенистые клетки. Они продуцируют только TNF-d и обычно локализуются в глубине бляшек среди кристаллов моногидрата холестерина и распадающихся пенистых клеток. По-видимому, источником второго и третьего типов макрофагов являются клетки, пролифе-рирующие в субэндотелиальном слое, находящиеся в контакте с Т-лимфоцитами. До последнего времени оставалось неясным, что является источником макрофагов в интиме артерий человека: только ли моноциты, проникающие из тока крови, или же и клетки, пролиферирующие in situ. Для ответа на этот вопрос был осуществлен количественный анализ популяции пролиферирую-щих клеток в стенке артерий человека с различной степенью выраженности атеросклеротических поражений. Пролиферирующие мононуклеарные клетки были обнаружены как в поверхностных, так и в глубоких отделах липидных пятен и липидно-фиброз-ных бляшек, часто они выявлялись среди распадающихся пенистых клеток. Было установлено, что в атеросклеротических бляшках индекс пролиферации (процент PCNA+ клеток от общего числа клеток) составляет 30%. При этом из пролиферирующих клеток в липидных пятнах 78% приходится на мононуклеа-ры, а фиброзных бляшках - 52%. Полученные результаты оказались неожиданными. В литературе считается, что в атеросклеротических поражениях преимущественно делятся только веретенообразно-вытянутые клетки: гладкомышеч-ные, фибробласты и, возможно, звездчатые или дендритные клетки. И, действительно, макрофаги - это высокодифференцированные клетки, и, чтобы вызвать их пролиферацию в сосудистой стенке, нужны особые условия. Точная комбинация факторов, которые стимулируют моноциты/макрофаги к делению в атеросклеротических поражениях, пока не определена. Мы полагаем, что к таким факторам относятся мЛПНП и иммунные комплексы, включающие последние, а также MCP-I и M-CSF, экспрессируе-мые активированными клетками уже на начальных стадиях атерогенеза. Таким образом, удалось получить важные данные, свидетельствующие о том, что в атеросклеротических поражениях увеличение числа мононук-леарных клеток происходит не только за счет их миграции из тока крови, но и за счет пролиферации in situ. Не меньшую роль, чем макрофаги, уже в начальных стадиях атерогенеза играют и лимфоциты. Иммуногистохимический анализ атеросклеротических поражений аорты у людей показал, что в зоне начальных поражений Т-лимфоциты преобладают над макрофагами. Т-лимфоциты могут составлять до 20% клеточной популяции в липидных пятнах, а в зоне атеросклеротических бляшек вместе с макрофагами, особенно в атероматозном ядре, - около 90%. С целью раскрытия характерных особенностей иммунного воспаления при атерогенезе у человека было осуществлено морфометрическое исследование клеток иммунорегуляторного и эффекторно-го звеньев иммунитета в аорте и парааортальных лимфатических узлах. На начальной и выраженной стадиях атерогенеза выявлен сочетанный характер изменений в лимфатических узлах и в контролируемых ими участках сосудистой стенки. В Т-зоне узлов обнаружено резкое увеличение содержания CD-4+ Т-лимфоцитов при одновременном росте численности активированных мононуклеарных клеток, экспрессирующих HLA-DR-антиген. Указанные изменения происходили на фоне резкого усиления в Т-зоне узлов рециркуляционной и миграционной активности лимфоидных клеток, в В-зоне наблюдалось увеличение числа IgG и IgM продуцирующих клеток. Одновременно в интиме и адвентиции аорты в зоне атеросклеротических поражений обнаружено увеличение численности CD4+ Т-клеток, активированных мононуклеаров, экспрессирующих HLA-DR и IgG синтезирующих В-лимфоцитов, при неизменном содержании CD8+ Т-клеток. Как в аорте, так и в парааортальных лимфатических узлах в наибольшей степени иммуноморфологические перестройки были выражены в возрастной группе 31-60 лет. До сих пор было не ясно, где конкретно происходит активация СП4+Т-клеток и где образуется IgG синтезирующие В-лимфоциты при атерогенезе. Полученные в лаборатории результаты позволили сформулировать оригинальную гипотезу: после контакта с антигеном активация Т-клеток, прежде всего С04+Т-лимфоцитов, происходит в Т-зоне парааортальных лимфатических узлов. Учитывая высокую рециргсуляционную активность этих узлов на начальной и выраженных стадиях атерогенеза, вполне вероятно, что активированные С04+Т-клетки из Т-зоны, а также IgG продуцирующие В-лимфоциты из В-зоны мигрируют в соответствующие участки сосудистой стенки. Следует подчеркнуть, что, хотя количество В-клеток в зоне атеросклеротических поражений не велико и обычно не превышает 1% общей популяции клеток, роль их чрезвычайно высока, поскольку обеспечивает возможность связывания. мЛПНП с аутоантителами, синтезированными in situ, и образование иммунных комплексов непосредственно в сосудистой стенке. Таким образом, отложение или образование в субэндотелиальном слое интимы артерий мЛПНП, приобретающих аутоантигенные свойства, стимулирует продукцию эндотелиальными клетками про-воспалительных цитокинов и адгезионных молекул, связывающихся с лигандами моноцитов и лимфоцитов. Активированные моноциты и Т-лимфоциты, проникающие в интиму уже на самых ранних стадиях атерогенеза, с помощью цитокинов запускают каскад воспалительных реакций, в которые вовлекаются все клетки интимы. Не остается сомнений, что рассмотренные выше клеточные реакции в регионарных лимфатических узлах тесно связаны с развитием хронического иммунного воспаления в липидных и атеросклеротических бляшках при атерогенезе у человека. На протяжении ряда лет в отделе общей и частной морфологии под руководством академика В. А. Нагорнева анализировалась потенциальная роль инфекционных агентов вирусной и бактериальной природы при оценке факторов, обеспечивающих развитие иммунного воспаления в атерогенезе. Из облигатных паразитов, играющих роль в атерогенезе, наиболее доступной для патоморфологического анализа является хламидиальная инфекция (ХЛП). Суммируя данные сероэпидемиологических исследований, выполненных в разных странах, была доказана позитивная связь между титром антиХЛП-антител (IgG) и ангиографически диагностируемым атеросклерозом коронарных артерий. Установлено, что при титре в крови антител к ХЛП 1:256-1:512 риск обострения ИБС и развития острого инфаркта миокарда весьма высок. Собственное исследование показало, что в 76% изученных сегментов аорты и сонных артерий колонии ХЛП обнаруживались как в липидных пятнах, так и в атеросклеротических бляшках. Скопления хламидий обнаруживали в трех популяциях клеток: эндотелиоцитах, макрофагах и гладкомышечных клетках. По мере прогрессирования атеросклероза инфицированные мононуклеарные клетки выявляются не только в поверхностных слоях интимы, но и в адвентиции артерий, куда они проникают через систему vasa vasorum. Часто наблюдается заполнение хламидиями всей цитоплазмы макрофагов с их последующим разрушением и выходом паразитов в экстрацеллюлярное пространство. В местах экстра-целлюлярной локализации колоний ХЛП обнаруживаются отек и разрушение эндотелиального монослоя с образованием в этой зоне головки тромба. Причем среди тромботических масс также выявляются колонии ХЛП. Анализ секционного материала в целом показал, что, когда хламидиальная инфекция находится в стадии обострения (деление паразитов и разрушение клеток), течение ИБС особенно неблагоприятное. Собственные наблюдения и данные литературы свидетельствуют об общности клеточного ответа в стенке артерий на мЛПНП и ХЛП. В частности, как мЛПНП, откладывающиеся в стенке артерий, так и ХЛП вызывают экспрессию эндотелием одних и тех же молекул межклеточной адгезии, способствуя миграции клеток воспаления в интиму артерий. Кроме того, и те и другие вызывают продукцию одинаковых провоспалительных цитокинов в зоне формирования бляшек: IL-lp\ IL-6, IL-8, TNF-a, INF-y. В обоих случаях происходит активация клеток воспаления, мигрирующих в стенку артерий. Каскад сходных клеточных реакций с экспрессией медиаторов воспаления оказывает цитотоксическое влияние на клетки интимы, вызывает лизис волокнистых структур, в результате чего происходит разрушение покрышки бляшки с частым образованием в этой зоне тромбов. Синергизм действия мЛПНП и хламидиальной инфекции может придавать атеросклеротическому процессу «злокачественное» течение. Таким образом, ХЛП следует рассматривать как один из ведущих этиопатогенетических факторов атеросклероза, наряду с гиперхолестеренемией и гипертензией. Академик РАМН В. А. Нагорнев предполагал, что изменения артериальной стенки, приводящие к развитию атеросклероза, могут быть связаны не только с клеточными перестройками в интиме, но и с нарушением иннервации сосудистого русла адвентиции. Поэтому он выступил инициатором фундаментальных исследований, направленных на изучение иннервации магистральных и внутриорганных кровеносных сосудов при распространенном атеросклерозе и различных заболеваниях поджелудочной железы. Исследование проводилось совместно с сотрудниками лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы и ведущими специалистами в области ангиохирургии и абдоминальной хирургии (член-кор. РАМН И. П. Дуданов и член-кор. РАМН Н. А. Майстренко). Эксперименты показали, что на различных стадиях атеросклероза, при сахарном диабете в адвентиции стенки аорты, подвздошной и сонной артерий наблюдаются дегенеративно-дистрофические процессы со стороны вегетативных ганглиев, нервных сплетений и рецепторов. Было установлено, что эти изменения касались прежде всего иннервации vasa vasorum. Обнаружено, что количество синаптофизинположитель-ных терминалей вегетативных нервных волокон и афферентных миелинизированных волокон больных атеросклерозом и сахарным диабетом существенно уменьшается. В результате этого наблюдается глубокая перестройка не только сосудов, расположенных в адвентиции, но и сосудов, проникающих в среднюю оболочку магистральной артерии. Эти изменения обычно сопровождались воспалительной реакцией. Исследование, проведенное на биопсийном материале поджелудочной железы, показало, что при хроническом панкреатите и при опухолевых перерождениях, наряду с характерными изменениями экзо- и эндокринных отделов, обнаружены и выраженные изменения со стороны нервных аппаратов микроциркуляторного русла. Выявлена дегенерация нервных стволов и пучков, демиелинизация, зернистый распад аксонов, гибель периневральных футляров, проникновение воспалительных элементов в эндоневрий. Описаны также дистрофические изменения нейронов интрамуральных ганглиев железы. Отмечено уменьшение или полное отсутствие синап-тофизинположительных терминалей вокруг сосудов междольковой и внутридольковой соединительной ткани. Полученные результаты показывают, что при данной патологии первичным может являться нарушение иннервации стенок сосудов микроциркуляторного русла. ВАКЦИНА ПРОТИВ АТЕРОСКЛЕРОЗА - МИФ ИЛИ РЕАЛЬНОСТЬ? После того, как была доказана роль иммунного воспаления в становлении и развитии атеросклеротических поражений артерий, возникла идея направленного воздействия на этот процесс. В настоящее время в ряде стран проводятся интенсивные исследования с целью получения вакцины против атеросклероза. W. Palinski и соавт. были первыми, кто показал, что иммунизация кроликов Ватанабэ с малондиаль-дегид-модифицированными ЛПНП (MDA-ЛПНП) приводит к подавлению прогрессирования атеросклероза. Эти данные были подтверждены и в других исследованиях. Иммунизация MDA-ЛПНП приводит к увеличению антител не только против данного типа антигена, но и против других оксигенных неоэпито-пов, которые могут присутствовать в мЛПНП, таких, как оксидативные фосфолипиды, оксидативный хо-лестерол, оксидизированный холестерол-линолеат и оксидизированный кардиолипин. Данные антитела связывают циркулирующие в крови мЛПНП и удаляют их из тока крови - в этом проявление протек-тивного эффекта активной иммунизации, которая отличается от аутосенсибилизации к мЛПНП при атеросклерозе. Модуляция иммунного ответа, включающегося в атерогенез, используя вакцины, пассивную иммунизацию введением антител, и индукция толерантности представляют новое направление в изучении патогенеза атеросклероза, связанное с предупреждением его развития и лечением. В основе его лежит перевод процесса из ТЫ -ответа, сопровождающегося экспрессией провоспалительных цитокинов, в ТЪ2-ответ, обеспечивающий экспрессию противовоспалительных цитокинов. Эффект вакцинации был изучен на мышах с нокаутом по рецептору к ЛПНП. Результаты исследования показали, что развитие атеросклероза в аорте уменьшается на 68,5% по сравнению с мышами без вакцинации. Более того, в тех поражениях артерий, которые были все же обнаружены, у вакцинированных мышей отсутствовали IFN-y-позитивные клетки, в 2,8 раза увеличивалось содержание коллагена и в 4,2 раза - а-актина по сравнению с невакцинирован-ными мышами. Иммунизация апоЕ'А-мышей основным белком мЛПНП, апоВ-100, приводит к заметному увеличению уровня IgG и вызывает незначительное увеличение уровня IgM. При этом наблюдается предупреждение или регрессия атеросклеротических поражений, причем продукция IgG меняется от IgG2a к IgG,, демонстрируя активацию ТЪ2-ответа. Пассивная иммунизация с использованием моноклональных антител к одному из атеропротективных пептидных эпитопов также показывает редукцию атеросклероза у гиперхолестеринемических мышей. Эти наблюдения позволяют надеяться, что атеропротективная вакцинная стратегия, основанная на использовании специфических апоВ-100 пептидных эпитопов, вполне возможна. При этом важно отметить, что атероп-ротективный эффект наблюдается при повышенном уровне холестерола в крови, т. е. не зависит от липидных показателей.

V A Nagornev

Scientific Research Institute for Experimental Medicine, St. Petersburg

P V Pigarevsky

Scientific Research Institute for Experimental Medicine, St. Petersburg

Views

Abstract - 29

Cited-By


Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2009 Nagornev V.A., Pigarevsky P.V.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies