COMPARATIVE ANTI-INFLAMMATORY AND ERGOTROPIC ACTIVITY OF METAPROT, TREKREZAN AND POLYOXIDONIUM AND THEIR COMBINATIONS IN BRONCHOPULMONARY INFLAMMATION IN RATS

Abstract


In the paper, the anti-inflammatory and energy stabilizing (ergotropic) actions of antihypoxants with immune modulating properties metaprot (25 mg/kg), trekrezan (25 mg/kg) and polyoxidonium (0,75 mg/kg) were compared in rats with bronchopulmonary inflammation. In bronchopulmonary inflammation due to administration of turpentine into trachea of rats, all three drugs after course administration (5 days) possessed energy stabilizing effect that performed in the decrease of lactate and ATP-ADP and AMP products level as well as the increase of pyruvate and ATP in both blood lymphocytes and the lung tissue. The energy stabilizing action of polyoxidonium was more expressed in the lung tissue, the action was the same as after trekrezan administration in direction but was less powerful. The monotherapy of experimental bronchopulmonary inflammation revealed the following regularity in energy stabilizing (ergotropic) action of drugs: polyoxidonium
Введение. Эффективность лечения острых бронхолегочных заболеваний, в частности пневмоний, определяется не только назначением средств антибактериальной терапии, но во многом и течением МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 3 49 вторичных иммунодефицитных состояний, как правило, их сопровождающих [1]. Следует отметить, что традиционные средства антибактериальной терапии, особенно антибиотики, становятся все менее эффективными в отношении широкого спектра возбудителей пневмоний, что приводит к увеличению частоты затяжного характера течения заболевания и его хро-низации [2]. Попытки выделить какой-то один ведущий механизм развития острой пневмонии не увенчались успехом [3, 4]. Однако наиболее специфические различия, обусловленные этиологическим фактором, на клеточном уровне теряют свою специфику вследствие общности механизмов клеточных повреждений. Таким универсальным процессом при острых бронхолегочных заболеваниях является, прежде всего, нарушение кислородного режима (развитие хронической гипоксии) и изменение иммунного ответа. Это послужило основанием исследования новых антигипоксан-тов и иммунотропных препаратов метапрота, трекре-зана и полиоксидония, обладающих антигипоксант-ными, энергостабилизирующими (эрготропными) и иммунокорригирующими свойствами, при моделировании бронхолегочного воспаления у крыс. В каскаде метаболических изменений при кисло -родной недостаточности центральным звеном является энергетический обмен. В условиях кислородного дефицита возникает так называемая биоэнергетическая гипоксия [5]. Митохондрии чувствительны к дефициту кислорода и повреждаются одними из первых среди внутриклеточных структур. В основе биоэнергетической гипоксии лежат последовательные изменения свойств митохондриального ферментного комплекса, приводящие к нарушениям энергосинтезирующей функции дыхательной цепи [17, 18]. Все стадии биоэнергетической гипоксии коррелируют с изменениями содержания АТФ и ведущих энергозависимых процессов в клетках. Возможности образования митохондриальной АТФ - наиболее эффективной формы аккумуляции энергии и в физиологических условиях преобладающей над другими способами образования аденозинтрифосфа-та,- при кислородной недостаточности ограничены. При гипоксии нарушаются все кислородзависимые пути образования энергии. Поддержание жизнеспособности и функциональной активности клеток при гипоксии осуществляется за счет анаэробных процессов энергообразования. Учитывая комплексный характер нарушений, которые возникают в организме при пневмонии, связь их с механизмами неспецифической резистентности, системой снабжения организма кислородом, процессами перекисного окисления липидов, состоянием антиоксидантной и иммунной систем, пред ставляется целесообразным использовать в комплексной терапии острых пневмоний лечебные средства с широким спектром фармакологической активности, способные воздействовать на базальные клеточные процессы и стимулировать адаптационные возможности организма. В значительной степени этим требованиям отвечают препараты, являющиеся представителями фармакологического класса адаптогенов и антигипоксан-тов. Типичным представителем антигипоксантов является метапрот (2-этилтиобензимидазола гидробромид; бемитил), хорошо изученный препарат, широко применяющийся при острой и хронической гипоксии, для повышения работоспособности, для активации иммунитета, прежде всего клеточного и фагоцитарного звена [6]. Другим представителем этого класса является трекрезан (триэтаноламмоние-вая соль 2-метилфеноксиуксусной кислоты) - высокоэффективное фармакологическое средство с широким спектром адаптогенного, иммуностимулирующего и терапевтического действия [7, 8]. Трекрезан относится к малотоксичным соединениям (ЛД50 для крыс >3700 мг/кг при внутрибрюшин-ном и >6500 мг/кг при пероральном введении препарата), оказывает стресспротекторное действие на моделях иммобилизационного и болевого гиподи-намического стресса, обладает способностью ускорять репарацию поврежденных тканей (печень, миокард, мышцы), защищает внутренние органы от повреждающего действия токсинов, СВЧ-облу-чения, инфекционного фактора. Препарат обладает выраженной антиоксидантной активностью и иммуностимулирующими свойствами [9]. Одним из перспективных адаптогенов и иммунокорректоров является новый препарат полиоксидо-ний [10]. Препарат оказывает активирующее действие на неспецифическую резистентность организма, фагоцитоз, гуморальный и клеточный иммунитет. Одним из основных биологических свойств полиоксидония является способность стимулировать антиинфекционную резистентность организма. Полиоксидоний действует на все звенья фагоцитарного процесса: активирует миграцию фагоцитов, усиливает клиренс чужеродных частиц из кровотока, повышает поглотительную и бактерицидную активность фагоцитов. Известно, что бактерицидность фагоцитов обусловлена кислороднезависимыми и кислородзависимыми механизмами. Оказалось, что полиоксидоний подавляет спонтанное образование внеклеточных, но стимулирует образование внутриклеточных активных форм кислорода. В отношении индукции синтеза цитокинов полиоксидоний выступает как истинный иммуномодулятор, стимули- 50 МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 3 руя спонтанный и индуцированный синтез. Наряду с иммуномодулирующими свойствами полиоксидо -ния следует выделить антитоксический, антиокси-дантный и мембраностабилизирующие эффекты [11]. Следует отметить, что энергостабилизирующие эффекты полиоксидония неизвестны. Цель исследования: изучение противовоспалительного и энергостабилизирующего (эрготропного) действия метапрота, трекрезана и полиоксидония, а также их комбинаций при экспериментальном бронхолегочном воспалении у крыс. Материалы и методы исследования. Эксперименты выполнены на 119 крысах самцах Вистар массой 200-250 г, полученных из питомника «Рапполово» (Ленинградская область). Животных содержали в виварии в стандартных условиях освещения и питания. Исследования осуществляли в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [12]. В первой серии опытов изучали изменение энергетического обмена в лимфоцитах и ткани легких при остром бронхолегочном воспалении у крыс. Во второй серии опытов исследовали влияние метапрота, трекрезана и полиоксидония на показатели энергетического обмена в лимфоцитах и ткани легких при остром бронхолегочном воспалении у крыс. Острое бронхолегочное воспаление (бронхопневмонию) моделировали следующим образом: под эфирным наркозом хирургическим путем обнажали трахею и уколом между двумя хрящевыми полукольцами иглой диаметром 0,8 мм в ее просвет вводили 0,1 мл живичного скипидара. Разрез на шее ушивали. Непосредственно сразу после операции и далее на протяжении 5 дней животным опытной группы внутрибрюшинно вводили раствор одного из исследуемых препаратов: метапрота (25 мг/кг), трекреза-на (25 мг/кг) или полиоксидония (0,75 мг/кг) либо их комбинации, используя те же дозы. Выбор доз определялся на основании проведенных ранее исследований и доказательств действия препаратов именно в этих дозах как иммуномодуляторов. На пятые сутки эксперимента животных декапитировали. Легкие хранили в жидком азоте несколько суток до окончания каждой серии экспериментов, после чего ткань измельчали в фарфоровой ступке, гомогенизировали и в них и выделенных из крови лимфоцитах определяли биохимические показатели, характеризующие энергетический обмен. Содержание молочной и пировиноградной кислот определяли в 10% гомогенате ткани мозга, приготовленном на 6 N хлорной кислоте, энзиматическим методом [13]. Принцип определения лактата основан на дегидрировании молочной кислоты в присутствии лактатдегидрогеназы и НАД: Лактат+НАД ^ ПВК+НАДН2. Принцип метода определения пирувата заключается в восстановлении пирувата в лактат в присутствии лактатдегидрогеназы и НАДН: ПВК+НАДН ^ лактат+НАД. Изменение оптической плотности при определении лактата и пирувата регистрировали спек-тофотометрически при длине волны 340 нм. Свободные адениннуклеотиды определяли с помощью восходящей тонкослойной хроматографии на пластинах «силуфол» и последующим сканированием на спектрофлуориметре MPF-4 «Hitachi» [14]. Показатели всех компонентов адениловой системы позволяют судить о направленности обменных процессов в ткани. Информативным является соотношение их молярных концентраций. Такой интегративной величиной, объединяющей три компонента аденило-вой системы в единую формулу, служит энергетический заряд [15]. Величину энергетического заряда адениловой системы рассчитывали по формуле: АТФ+0,5 АДФ/АТФ+АДФ+АМФ. В опытах с флуоресценцией флавиновых и пиридиновых нуклеотидов в альвеолярных макрофагах и лимфоцитах крови крыс объектом исследования служили перитонеальные и альвеолярные макрофаги интактных крыс самцов Вистар массой 230-250 г. Альвеолярные макрофаги получали в бронхоальвеолярных смывах, перитонеальные макрофаги - в смывах из брюшной полости с применением раствора Хенкса (рН 7,4). Взвесь макрофагов содержала 1х 106 клеток в 1 мл. Адгезии макрофагов на стекло достигали 20-минутной инкубацией во влажной камере при 37° С. Полученная суспензия содержала более 98% жизнеспособных клеток по результатам теста с 0,1% раствором трипанового синего. При дифференцированном подсчете в окрашенных мазках макрофаги составляли около 90%. Антиоксидантный эффект препаратов в макрофагах определяли в термостатируемой при 37±0,5° С кювете на хемилюминометре «Хемилюм-1» (Россия), сопряженном с компьютером. Биохемилюминесценцию (БХЛ) регистрировали по изменению люцигенинза-висимой хемилюминесценции, для усиления которой использовали люцигенин (бис-^метилакридиний, «Sigma»). В кювету вносили 0,2 мл суспензии макрофагов, содержащую 1х 107 клеток, 0,1 мл раствора люцигенина (100 мкмоль/л) и 0,1 мл изотонического раствора натрия хлорида с соответствующими дозами тестируемых препаратов (в контроле - 0,1 мл изотонического раствора натрия хлорида). Время инкубации составляло 20 мин и 40 мин. Уровень спонтанной БХЛ измеряли в течение 5 мин при постоянном перемешивании с помощью мешалки. После графической МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 3 51 регистрации результатов с помощью оригинальной компьютерной программы вычисляли интенсивность БХЛ (интегральный показатель) и по высоте пика полученных кривых отмечали величину максимума интенсивности свечения. Показатели спонтанной БХЛ в контрольной группе (макрофаги в изотоническом растворе натрия хлорида) принимали за 100%. Показатели БХЛ, полученные в опытных группах (макрофаги с препаратом), рассчитывали в процентах от контроля. С помощью регистрации спонтанной БХЛ клеток исследовали уровень продукции фагоцитами реактивных форм кислорода, прежде всего, супероксидного анион-радикала (О2), по интенсивности наработки которого можно оценить степень активности клетки и ее функциональный потенциал на фоне действия препарата [16]. Выборка для каждой группы животных составила не менее 10 крыс. Математическую с использованием стандартного пакета программ STATISTICA for Windows методами вариационной статистики (t-критерий Стьюдента) при р<0,05. Результаты и их обсуждение. Патоморфологические и метаболические изменения при экспериментальном бронхолегочном воспалении у крыс. У животных, получавших интратрахеально скипидар для моделирования острого бронхолегочного воспаления, при морфологическом исследовании макроскопически наблюдалось воспалительное поражение легких с типичной инфильтрацией и точечными кровоизлияниями в ткань. В большинстве случаев патологический процесс локализовался в нижней доле правого легкого. Существенных различий между особями по распространенности патологического процесса и характеру патоморфологических нарушений не наблюдали, что свидетельствовало о воспроизводимости и адекватности выбранной модели. Микроскопически в легких интактных крыс меж-альвеолярные перегородки были обычного вида, кровеносные сосуды умеренно полнокровны, альвеолы наполнены воздухом. Введение крысам скипидара вызывало утолщение межальвеолярных перегородок. Кровеносные сосуды перегородок были расширены и полнокровны. Просветы альвеол заполнялись эозинофильной жидкостью с нейтрофильными лейкоцитами, встречались нити фибрина. В легком отмечали наличие экссудата смешанного характера: серозного, фибринозного, фибринозно-гнойного и гнойного. В незначительной части опытов наблюдали некроз легочной ткани. В прилежащих к некрозу альвеолах содержался преимущественно серозно-фибринозный экссудат. Метаболические изменения при экспериментальном остром бронхолегочном воспалении у крыс про являлись увеличением в лимфоцитах крови и ткани легких содержания лактата, АДФ и АМФ на фоне снижения содержания пирувата и АТФ. При этом более выраженные изменения наблюдали в ткани легких. Изменения в адениннуклеотидном пуле при остром бронхолегочном воспалении приводили к снижению величины энергетического заряда адениннук-леотидов, что свидетельствовало о развитии энергодефицита в лимфоцитах крови и ткани легких крыс. Влияние метапрота, полиоксидония, трекрезана и их комбинаций на выживаемость крыс и структурные изменения в легких при остром бронхолегочном воспалении. Введение в течение пяти дней крысам с острым бронхолегочным воспалением метапрота, полиоксидония, трекрезана и их комбинаций увеличивало выживаемость животных с бронхолегочным воспалением (рис. 1). °/ 100 п ) 80- 60- 40- 20- о- 78 85 60 58 65 48 1 2 3 4 5 6 Рис. 1. Влияние метапрота, трекрезана, полиоксидония и их комбинаций на выживаемость крыс при остром бронхолегочном воспалении: 1 - бронхолегочное воспаление; 2 - воспаление+метапрот; 3 - воспаление+полиоксидоний; 4 - воспаление+трекрезан; 5 - воспаление+метапрот+полиоксидоний; 6 - воспаление+метапрот+трекрезан. При введении животным с бронхолегочным воспалением метапрота, полиоксидония, трекрезана и их комбинаций изменялась микроскопическая картина ткани легких. На фоне действия метапрота уменьшалось утолщение межальвеолярных перегородок и их полнокровие. Просветы альвеол содержали эозинофильную жидкость с нейтрофильными лейкоцитами и отдельные нити фибрина. В легком присутствовал серозный и фибринозный экссудат. Некротические участки ткани легкого не наблюдались. На фоне действия полиоксидония микроскопическая картина ткани легкого представлена умеренно полнокровными межальвеолярными перегородками, наличием серозно-фибринозного экссудата. Большинство альвеол заполнены воздухом. Применение трекрезана оказывало сходное с полиоксидонием влияние на структуру ткани легких. Микроскопически межальвеолярные 52 МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 3 перегородки незначительно утолщены и полнокровны. Большинство альвеол наполнены воздухом. Отсутствовали некротические участки ткани. В просветах альвеол отмечали серозно-фибринозный экссудат. При применении комбинации метапрота с полиокси-донием и, в большей степени, с трекрезаном микроскопическая картина ткани легких приближалась к нормальной: межальвеолярные перегородки были обычного вида, кровеносные сосуды их умеренно полнокровны, альвеолы наполнены воздухом. Влияние метапрота, полиоксидония, трекрезана и их комбинаций на показатели энергетического обмена в легких и лимфоцитах крови крыс при остром бронхолегочном воспалении. Введение крысам с острым бронхолегочным воспалением метапрота достоверно снижало в лимфоцитах крови содержание лактата на 50% по сравнению с нелеченными животными. Количество пирувата в лимфоцитах крови крыс возрастало в 4,4 раза (табл. 1). Эти изменения свидетельствуют об уменьшении проявления лактатного ацидоза на фоне действия метапрота. При этом в лимфоцитах крови увеличивалось содержание АТФ - на 91%, снижалось содержание АДФ - на 32% и АМФ - на 20% (р<0,05). АДФ - на 16% и АМФ - на 12%; увеличению в лимфоцитах крови содержания пирувата на 140% и АТФ - на 41%. Изменение содержания аденин-нуклеотидов сопровождалось достоверным увеличением энергетического заряда адениловой системы. Применение метапрота, полиоксидония и трекре-зана оказывало энергостабилизирующее действие и в ткани легких. Так, при действии метапрота достоверно снижался уровень лактата на 54%, содержание АДФ - на 45% и АМФ - на 29%. При этом увеличивалось содержание пирувата в 6,5 раз, АТФ - на 129% и энергетического заряда адениннуклеотидов - на 37% (табл. 2). На фоне действия трекрезана уровень лактата в ткани легких достоверно снижался на 49%, АДФ - на 40% и АМФ - на 22% на фоне увеличения содержания пирувата в пять раз и АТФ - на 98% (p<0,05). При этом величина энергетического заряда адениннуклеотидов достоверно возрастала на 30%. При введении полиоксидония в легких снижалось содержание лактата на 39%, АДФ - на 32% и АМФ - на 22% (р<0,05). Наряду с этим достоверно увеличивалось содержание пирувата в четыре раза и АТФ - на 69%, а также значение энергетического заряда адениннуклеотидов - на 20%. Влияние метапрота, полиоксидония и трекрезана на показатели энергетического обмена крови крыс при остром бронхолегочном воспалении (Mim; n- 10) Таблица 1 в лимфоцитах Группы животных Показатель бронхолегочное воспаление (контроль) бронхолегочное воспаление+метапрот бронхолегочное воспаление+трекрезан бронхолегочное воспаление+ ІГОЛИОКСИ доний Лактат, мкмоль/мл 7,52+0,13 3,75+0,08* 4,53+0,16* 5,45+0,11* Пируват, мкмоль/мл 0,05+0,02 0,23+0,02* 0,16+0,02* 0,14+0,02* АТФ, мкмоль/мл 1,32±0,07 2,47±0,10* 2,12±0,05* 1,85±0,04* АДФ, мкмоль/мл 1,22±0,05 0,83±0,03* 0,99±0,07* 1,03±0,06* АМФ, мкмоль/мл 0,84±0,04 0,65±0,02* 0,73±0,03* 0,74±0,03* Энергетический заряд, уел. ед. 0,574+0,007 0,733+0,006* 0,687+0,007* 0,658+0,008* р<0,05 в сравнении с контролем. На фоне действия трекрезана в лимфоцитах крови крыс с острым бронхолегочным воспалением уменьшалось содержание лактата на 40%, АДФ - на 19% и АМФ - на 13% (р<0,05). Содержание пирувата достоверно возрастало в три раза и АТФ - на 62%. Введение животным полиоксидония приводило к достоверному снижению уровня лактата на 28%, Таким образом, при монотерапии острого бронхолегочного воспаления метаболические нарушения в легких и лимфоцитах крови крыс в большей степени корригировал метапрот. Энергостабилизирующее действие полиоксидония было более выражено в ткани легких и по направленности эффектов было сопоставимо с действием трекрезана, но уступало ему по силе действия. МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 3 53 Влияние метапрота, полиоксидония и трекрезана на показатели энергетического обмена при остром бронхолегочном воспалении (M±m; n- 10) Таблица 2 в легких крыс Группы животных Показатель бронхолегочное воспаление (контроль) бронхолегочное воспаление+метапрот бронхолегочное воспаление+трекрезан бронхолегочное воспаление+ полиоксидоний Лактат, мкмоль/г 8,54+0,10 3,92+0,05* 4,33+0,03* 5,24+0,08* Пируват, мкмоль/г 0,03+0,01 0,22+0,02* 0,18+0,02* 0,13+0,02* АТФ, мкмоль/г 1,07+0,04 2,48+0,03* 2,16+0,05* 1,85+0,02* АДФ, мкмоль/г 1,18±0,03 0,66±0,02* 0,72±0,05* 0,83±0,02* АМФ, мкмоль/г 0,69±0,06 0,49±0,03* 0,55±0,02* 0,55±0,02* Энергетический заряд, уел. ед. 0,569±0,008 0,778±0,006* 0,739±0,007* 0,685±0,007* * р<0,05 в сравнении с контролем. Использование метапрота в сочетании с полиок-сидонием или трекрезаном сопровождалось более выраженным энергостабилизирующим действием в лимфоцитах крови и ткани легких крыс с острым бронхолегочным воспалением, чем при монотерапии. Применение комбинации метапрота с трекрезаном сопровождалось снижением в лимфоцитах крови содержания лактата на 61%, АДФ - на 35% и АМФ - на 42% (р<0,05). Содержание пирувата в лимфоцитах возрастало в 4,4 раза и АТФ - в 2 раза. Величина энергетического заряда аденило-вой системы достоверно возрастала по сравнению с нелеченными животными на 38% (табл. 3). При сочетанном применении метапрота с полиок-сидонием в лимфоцитах крови крыс снижалось содержание лактата на 57%, АДФ - на 51% и АМФ - на 49% (р<0,05). Содержание пирувата достоверно увеличивалось в 4 раза, а содержание АТФ - в 2 раза. Значение энергетического заряда адениннуклеотидов увеличивалась на 42% по сравнению с нелеченными животными (р<0,05). В ткани легких при сочетанном введении метапрота и трекрезана уровень лактата достоверно снижался на 66%, АДФ - на 55% и АМФ - на 52% на фоне увеличения содержания пирувата в 9,6 раза и АТФ - на 177% (р<0,05). Изменение содержания адениннуклеотидов сопровождалось увеличением на 49% их энергетического заряда (табл. 4). Применение метапрота в сочетании с полиоксидони-ем сопровождалось снижением в ткани легких содержания лактата на 62%, АДФ - на 28% и АМФ - на 18%. При этом увеличивалось содержание пирувата Таблица 3 Влияние комбинаций метапрота с трекрезаном и полиоксидонием на показатели энергетического обмена в лимфоцитах крови крыс при остром бронхолегочном воспалении (М±ш; п=10) Показатель Группы животных бронхолегочное воспаление (контроль) бронхолегочное воспаление+метапрот+ трекрезан бронхолегочное воспаление+метапрот+ полиоксидоний Лактат, мкмоль/мл 7,48±0,10 2,92±0,13* 3,23±0,07* Пируват, мкмоль/мл 0,05±0,01 0,21 ±0,02* 0,22±0,02* АТФ, мкмоль/мл 1,29±0,07 2,83±0,05* 2,74±0,08* АДФ, мкмоль/мл 1,22+0,05 0,77+0,04* 0,58+0,03* АМФ, мкмоль/мл 0,83+0,04 0,48+0,03* 0,43+0,03* Энергетический заряд, уел. ед. 0,569+0,006 0,786+0,008* 0,809+0,007* * р<0,05 в сравнении с контролем. 54 МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 3 Таблица 4 Влияние комбинации метапрота с трекрезаном или полиоксидонием на показатели энергетического обмена в легких крыс при остром бронхолегочном воспалении (М±ш; п=10) Показатель Группы животных бронхолегочное воспаление (контроль) бронхолегочное воспаление+ метапрот+трекрезан бронхолегочное воспаление+метапрот+ полиоксидоний Лактат, мкмоль/г 8,57±0,12 2,94±0,11* 3,24±0,11* Пируват, мкмоль/г 0,04±0,02 0,31 ±0,02* 0,22±0,02* АТФ, мкмоль/г 1,09+0,04 3,03+0,04* 2,64+0,04* АДФ, мкмоль/г 1,18+0,03 0,55+0,03* 0,88+0,03* АМФ, мкмоль/г 0,69+0,06 0,34+0,04* 0,58+0,03* Энергетический заряд, уел. ед. 0,569±0,008 0,848±0,006* 0,759±0,008* * р<0,05 в сравнении с контролем. в 6,6 раза и АТФ - на 146% (p<0,05). Эти изменения сопровождались достоверным увеличением величины энергетического заряда адениловой системы. Таким образом, при монотерапии острого бронхолегочного воспаления у крыс изученные препараты можно расположить в ряду по возрастанию их энергостабилизирующего действия: полиоксидоний<трекрезан<метапрот. Применение комбинаций иммуномодулятора с антиги-поксантом при бронхолегочном воспалении у крыс оказывало более выраженный эффект в лимфоцитах и ткани легких, чем монотерапия. Энергостабилизирующее действие комбинации метапрота с полиоксидонием и с трекрезаном было сопоставимо. Влияние метапрота, полиоксидония, трекрезана и их комбинаций на флуоресценцию флавиновых и пиридиновых нуклеотидов в альвеолярных макрофагах и лимфоцитах крови крыс. Внесение в среду альвеолярных макрофагов, выделенных у интактных крыс, метапрота сопровождалось снижением интенсивности флуоресценции НАДН на 47% и усилением на 32% флуоресценции флавопротеидов (рис. 2). На фоне действия трекрезана в альвеолярных макрофагах крыс флуоресценция флавопротеидов снижалась на 15% по сравнению с исходным фоном, а флуоресценция НАДН возрастала на 31%. Параметр В снижался с 1,65 до 1,07, а показатель R имел отрицательное значение (-0,35). Внесение в среду альвеолярных макрофагов полиоксидония сопровождалось более значительным снижением флуоресценции флавопротеидов (на 54%) и увеличением флуоресценции НАДН на 49%. Параметр В под влиянием полиоксидония снижался с 2,11 до 0,64, а показатель R был ниже, чем на фоне действия трекрезана (-0,69). При внесении в среду альвеолярных макрофагов комбинации метапрота с трекрезаном или полиоксидонием также наблюдали снижение интенсивности флуоресценции в области спектра флавопротеидов и увеличение свечения в области пиридиннуклеотидов. При этом эффекты метапрота в сочетании с трекрезаном % 43 23 3 -17 -37 -57 -77 49 31 15 □ Фп □ НАДН 32 23 22 54 47 Трекрезан Полиокси- Метапрот Метапрот+ Метапрот+ донии полиоксидоний трекрезан Рис. 2. Влияние метапрота, полиоксидония, трекрезана и их комбинации на флуоресценцию флавопротеидов (Фп) и пиридиннуклеотидов (НАДН) в альвеолярных макрофагах крыс. * - р<0,05 в сравнении с контролем. были сопоставимы с его комбинацией с полиоксидони-ем. Тем не менее на фоне комбинации трекрезана или полиоксидония с метапротом показатель R был больше, чем при действии трекрезана и полиоксидония. Характер флуоресценции флавопротеидов и пири-диннуклеотидов в лимфоцитах крови интактных крыс на фоне действия метапрота, трекрезана, полиоксидония и их комбинаций сохранялся. На фоне действия метапрота в лимфоцитах крови крыс интенсивность флуоресценции в области спектра МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 3 55 флавопротеидов была на 46% выше фоновой. При этом интенсивность флуоресценции НАДН в лимфоцитах снижалась на 23%. Это сопровождалось увеличением параметра £, в два раза и положительным значением величины реакции метаболической системы лимфоцитов. На фоне действия трекрезана уровень свечения флавопротеидов снижался на 27% по сравнению с фоновым, а флуоресценция НАДН возрастала на 61%, что приводило к отрицательному значению величины реакции метаболической системы лимфоцитов. Внесение в среду лимфоцитов полиоксидония приводило к большему снижению свечения в области спектра флавопротеидов и увеличению интенсивности флуоресценции НАДН, чем при действии трекрезана. Параметр £, при действии полиоксидония уменьшался в 2,8 раза по сравнению с фоном, величина реакции метаболической системы лимфоцитов имела отрицательное значение. При внесении в среду лимфоцитов комбинации метапрота с полиоксидонием интенсивность флуоресценции в области спектра флавопротеидов снижалась на 24% по сравнению с фоном. Свечение в области пиридиннуклеотидов увеличивалось на 22%. Параметр £, уменьшался в 1,6 раза, а величина реакции метаболической системы лимфоцитов (R) имела отрицательное значение. Сходные эффекты наблюдались при внесении в среду лимфоцитов метапрота в сочетании с трекрезаном. Однако изменения флуоресценции флавопротеидов и пири-диннуклеотидов на фоне комбинаций препаратов были менее выраженными по сравнению с действием трекрезана и полиоксидония. Таким образом, при внесении в среду альвеолярных макрофагов и лимфоцитов крови крыс метапрота усиливается флуоресценция флавопротеидов и снижается флуоресценция восстановленных пиридин-нуклеотидов, что свидетельствует об усилении интенсивности тканевого дыхания клеток. В отличие от метапрота, трекрезан и полиоксидоний уменьшали интенсивность флуоресценции флавопротеидов и увеличивали флуоресценцию восстановленных пиридин-нуклеотидов в альвеолярных макрофагов и лимфоцитов крови крыс. На фоне комбинации трекрезана или полиоксидония с метапротом величина реакции метаболической системы клеток была больше, чем при действии трекрезана и полиоксидония. Заключение. Метапрот, трекрезан, полиоксидоний и их сочетания при курсовом применении у крыс с экспериментальным острым бронхолегочным воспалением облегчают течение воспалительного процесса, что проявляется уменьшением количества экссудата в ткани легких, снижением полнокровности крове -носных сосудов, нормализацией морфологической картины легочной ткани (межальвеолярные перегородки обычного вида, все альвеолы наполнены воздухом). При экспериментальной бронхопневмонии мета-прот, трекрезан и полиоксидоний обладают энергостабилизирующим действием, что проявляется снижением уровня лактата, продуктов гидролиза АТФ - АДФ и АМФ, увеличением содержания пирувата и АТФ в лимфоцитах крови и ткани легких крыс. При монотерапии экспериментальной бронхопневмонии препараты располагаются по возрастанию их энергостабилизирующего действия в следующем порядке: полиоксидоний<трекрезан<метапрот<мета-прот+полиоксидоний=метапрот+трекрезан. Метапрот, в отличие от трекрезана, полиоксидония и их комбинации с метапротом, усиливает флуоресценцию флавопротеидов и снижает флуоресценцию восстановленных пиридиннуклеотидов в альвеолярных макрофагах и лимфоцитах крови крыс, что свидетельствует об усилении интенсивности тканевого дыхания клеток.

V Viktorovna Zarubina

S. M. Kirov Military Medical Academy

St. Petersburg, Russia

E V Mokrenko

S. M. Kirov Military Medical Academy; Irkutsk State Medical University

St. Petersburg, Russia

A V Bolekhan

S. M. Kirov Military Medical Academy

St. Petersburg, Russia

P D Shabanov

S. M. Kirov Military Medical Academy; Institute of Experimental Medicine

Email: pdshabanov@mail.ru
St. Petersburg, Russia

  1. Вишнякоеа Л. А., Путов Н. В. Этиология острой пневмонии // Тер. арх.- 1990.- Т. 62, № 3.- С. 15-18.
  2. Дангиг И. И., Скипский И. М., Смульская Г. П. Затяжная пневмония: факторы риска и лечебная тактика // Тер. архив.- 1999.- № 3.- С. 32-35.
  3. Чучалин А. Г. Пневмонии - актуальная проблема медицины (вступительное слово): мат-лы главн. симпозиума «Пневмонии».- М., 1997.
  4. Чучалин А. Г., Ноников В. Е. Вопросы этиологии, иммунной патологии и терапии острой пневмонии // Клин. мед.- 1991. - № 1.- С. 71-74.
  5. Зарубина И. В., Шабанов П. Д. Молекулярная фармакология антигипоксантов.- СПб.: Н-Л, 2004.
  6. Зарубина И. В., Шабанов П. Д. Антиоксидантное действие полиоксидония и метапрота при бронхолегочном воспалении у крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 2015.- Т. 160, № 8.- С. 200-204.
  7. Шабанов П. Д., Мокренко Е. В. Противовоспалительные и иммуностимулирующие эффекты трекрезана при лечении воспалительно-дегенеративных поражений мягких тканей пародонта // Обз. по клин. фармакол. и лек. терапии.- 2015.- Т. 13, № 2.- С. 34-42.
  8. Шабанов П. Д., Зарубина И. В., Мокренко Е. В. Фармакология трекрезана - нового иммуномодулятора и адаптогена // Обз. по клин. фармакол. и лек. терапии.- 2014.- Т. 12, № 2.- С. 12-27.
  9. Казимировская В. Б., Дьяков В. М., Воронков М. Г., Ковальчук С. Ф. Трекрезан: токсикология, фармакология, результаты клинических испытаний.- Иркутск, 1996.
  10. Козлов Ю. А. Полиоксидоний в комплексном лечении гнойно-воспалительных заболеваний // Terra medica nova.- 2005.- № 1.- С. 2-5.
  11. Пинегин Б. В., Некрасов А. В., Хаитов Р. М. Иммуномодулятор «полиоксидоний»: механизмы действия и аспекты клинического применения // Медлайн-экспресс.- 2005.- № 1 (177).- С. 19-23.
  12. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В. П. Фисенко.- М.: МЗ РФ, 2000.
  13. Marbach E. P., Weil M. H. Rapid enzymatic measurement of blood lactate and pyruvate // Clin. Chem.- 1967.- Vol. 13.- P. 314-325.
  14. Зарубина И. В., Криворучко Б. И. Разделение и прямое количественное определение адениннуклеотидов на силуфоле // Укр. биохим. журнал.- 1982.- Т. 54, № 4.- С. 437-439.
  15. Atkinson D. The energy charge of the adenylate pool as a regulatory parameter. Interaction with feedback modifiers // Biochemestry.- 1968.- Vol. 7, № 10.- P. 4030-4034.
  16. Зарубина И. В., Антоненкова Е. В., Болехан А. В., Мокренко Е. В. Влияние иммуномодуляторов в разных комбинациях на люцигенин-зависимую хемилюминесценцию в альвеолярных и перитонеальных макрофагах крови // Обз. по клин. фармакол. и лек. терапии.- 2014.- Т. 12, № 1.- С. 15-18.
  17. Бизюкин А. В., Сеодаева С. К. Новый методический подход к изучению метаболизма фагоцитирующих клеток // Пульмонология.- 1995.- № 1.- С. 46-49.
  18. Фомина Т. Д., Походзей И. В. Иммунологическая реактивность организма и клинико-рентгенологическая картина острой пневмонии у взрослых // Тер. архив.- 1986.- № 4.- С. 108-110.

Views

Abstract - 115

PDF (Russian) - 2

Cited-By


PlumX

Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2016 Zarubina V.V., Mokrenko E.V., Bolekhan A.V., Shabanov P.D.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies