OBShchIE ZAKONOMERNOSTI MORFOGENEZA V NORME, PRI PATOLOGII I V EKSPERIMENTE IMMUNOGISTOKhIMIChESKOE ISSLEDOVANIE KhROMAFFINNYKh KLETOK OKOLOSERDEChNOY OBLASTI NOVOROZhDENNOY KRYSY

Abstract



Введение. Хромаффинные клетки (ХК) были открыты в начале XX столетия и получили свое название из-за способности окрашиваться солями хромовой кислоты в желто-коричневый цвет. На основании их общего происхождения с симпатическими нервными клетками из ганглиозной пластинки [1, 2], а также сходства синтезируемых теми и другими катехоламинов (норадреналин, дофамин, адреналин), их относят к симпато-адреналовой системе. Предполагается, что ХК выполняют как минимум две функции: нейроэндокринную и сенсорную. ХК входят в состав мозгового вещества надпочечников, параганглиев и каротидного тельца. Они были обнаружены в виде небольших долек и тяжей в аортально-пульмональной области (АПО) сердца различных животных (кошка, собака, кролик) и человека и изучены с помощью общегистологических и гистохимических методик, а также электронной микроскопии [1, 3]. В настоящее время для исследования ХК используются маркеры хромогранин А и В, белок PGP 9.5 и другие, выявляемые методом иммуногистохимии (ИГХ) [4, 5]. Однако морфологические особенности ХК в онтогенезе остаются малоизученными. Цель: изучить локализацию и структуру ХК в АПО новорожденной крысы с использованием комплекса ИГХ-маркеров. Объекты, материалы и методы. Работа выполнена на новорожденных крысах Вистар (n=5) в соответствии с Приказом Минздрава СССР от 12.08.1977 № 755 «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных». У животных 1-2-го дня постнатального периода (P1-2) выделяли сердце с околосердечной областью и фиксировали в цинк-этанол-формальдегиде [6]. Гистологический анализ проводили на парафиновых срезах толщиной 5-7 мкм. Часть препаратов окрашивали толуидиновым синим. Для ИГХ-исследования применяли кроличьи поликлональные антитела к белку PGP 9.5 (protein gene product 9.5; Spring Bioscince, США; 1:200), к синаптофизину (Syp; Monosan, Нидерланды) и к тиро-зингидроксилазе (ТГ; Abcam, Великобритания; 1:1000). В качестве вторичных антител применяли реактивы из набора Super Sensitive Polymer-HRP Detection Kit HRP/DAB (BioGenex, США). Результаты и их обсуждение. На препаратах, окрашенных толуидиновым синим, были видны ушки сердца, предсердия и желудочки, в околосердечной области определялись фрагменты главных магистральных сосудов сердца (аорта, легочный ствол, верхняя и нижняя полые вены), трахеи, лимфатического узла, пищевода, нервных стволов и микроганглиев. Поскольку на данном сроке развития выявить ХК с помощью обычной гистологической окраски затруднительно, были использованы нейро-ИГХ-марке-ры. Syp - интегральный белок синаптических везикул, который содержится также в эндокринных клетках и является их маркером [4, 6]. У новорожденных крыс в области аорты и легочного ствола были обнаружены Syp-иммунопозитивные (Syp+) ХК, которые располагались в виде скоплений, одиночно или в составе групп из 23 клеток. Syp+-ХК представляли собой мелкие, окрашенные в темно-коричневый цвет клетки округлой, вытянутой или треугольной формы. Вблизи скоплений ХК встречались отдельные группы молодых нейронов и нейробластов. Иногда ХК в виде цепочек из 5-6 клеток, располагались непосредственно внутри нервных стволиков и пучков. ТГ - ферментный маркер, с помощью которого избирательно выявляются катехоламины. Он позволил выявить не только пучки симпатических волокон, их терминальные аксоны, подрастающие к сосудам, но и ТГ-иммунопози-тивные (ТГ+) ХК [5]. Эти клетки были выявлены в тех же местах,- вблизи и внутри крупных нервов и рядом с микроганглиями. ТГ+-ХК имели треугольную или неправильную форму и относительно длинные цитоплаз -матические отростки, заполненные гранулами. С помощью ИГХ-реакции на PGP 9.5 в АПО сердца новорожденных (P1-2) крыс PGP-9.5-иммунопозитивные ХК хорошо выявлялись, и локализовались также в нервных стволиках и вблизи ганглиев. Заключение. Использованный комплекс ИГХ-марке-ров позволил выявить у новорожденных крысят ХК сердечной области. Установлено, что ХК, найденные в АПО сердца новорожденных животных, теснейшим образом связаны с нервами и интрамуральными ганглиями. Вопрос о функциях ХК требует дальнейших исследований.

A L Alekseenko

Email: iemmorphol@yandex.ru

E I Chumasov

  1. Ноздрачев А. Д., Чумасов Е. И. Периферическая нервная система.- СПб.: Наука, 1999.- 281 с.
  2. Huber K. The sympathoadrenal cell lineage: specification, diversification, and new perspectives // Dev. Biol.- 2006.- Vol. 298, № 2.- Р. 335-343.
  3. Tanaka K., Chiba T. Microvascular organization of sympathetic ganglia, with special reference to small intensely-fluorescent cells // Microsc. Res. Tech.- 1996.- Vol. 35, № 2.- Р. 137-145.
  4. Чумасов Е. И., Петрова Е. С., Коржевский Д. Э. Иммуноморфологический анализ иннервации хромаффинных клеток параганглиев артерий и сердца млекопитающих // Журн. эволюц. биохимии и физиологии.- 2011.- Т. 47, № 4.- С. 325-331.
  5. Takaki F., Nakamuta N., Kusakabe T., Yamamoto Y. Sympathetic and sensory innervation of small intensely fluorescent (SIF) cells in rat superior cervicalganglion // Cell Tissue Res.- 2015.- Vol. 359, № 2.- Р. 441-451.
  6. Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии: Руководство / Коржевский Д. Э., Кирик О. В., Петрова Е. С., Карпенко М. Н., Григорьев И. П., Сухорукова Е. Г., Колос Е. А., Гиляров А. В.- СПб.: СпецЛит, 2014.- С. 119.

Views

Abstract - 22

PDF (Russian) - 0

Cited-By


PlumX

Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2016 Alekseenko A.L., Chumasov E.I.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies