ISSLEDOVANIE EKSPRESSII GENOV-REGULYaTOROV GIALURONANA V KLONAL'NYKh KLETOChNYKh KUL'TURAKh OPUKhOLI GEPATOTsELLYuLYaRNOY KARTsINOMY

Abstract



Введение. Одной их характеристик раковых клеток является их способность к эпителио-мезенхимному переходу (ЭМП), который сопряжен с ремоделированием внеклеточного матрикса (ВКМ) [1]. В данной работе были рассмотрены белки, регулирующие один из компонентов ВКМ - гиалуроновую кислоту (HA). Внутриклеточные сигнальные пути, инициируемые взаимодействием HA с рецепторами CD44 и Rhamm, приводят к воспалительным и онкогенным реакциям, которые могут способствовать направленной миграции клеток [2]. Has1 и Has2 синтезируют HA высокой молекулярной массы, наличие которого свидетельствует о нормальных процессах в клетках [3]. При канцерогенезе ремоделирование ВКМ происходит за счет повышения количества молекул HA низкой молекулярной массы, которые образуются путем деградации HA с помощью гиалуронидаз Hyal1 и Hyal2 [4]. Существенным фактором для роста и прогрессии рака, возможно, является гетерогенность опухоли, описанная во многих типах рака [5]. Целью данной работы стало исследование экспрессии генов, отвечающих за синтез, деградацию и связывание гиа-луронана в клональных клеточных культурах гепатоцеллю-лярной карциномы мыши (ГЦК). Материалы и методы. Из опухолевой ткани ГЦК были выделены 9 клеточных культур, состоящих из эпителиальных клеток полигональной формы с гетерогенностью по степени дифференцировки. Также были получены три клеточные линии методом single cell cloning, две из которых представляли собой более гомогенный пласт клеток, фенотипически похожих на стволовые клетки рака. После второго пассажа из культур ГЦК выделили тотальный белок и мРНК. Паттерн экспрессии исследуе мых генов сравнивали с коммерческой линией клеток гепа-томы HEPA1-6 и тканью здоровой печени мыши. Полученные данные обрабатывались статистически в программных обеспечениях StepOne Software v2.3, DataAssist Software v3.01 и GraphPad Prism v5.0. Значения считались достоверными при р<0,05. Результаты и обсуждение. В большинстве выделенных нами культур ГЦК не обнаружено возрастания экспрессии гиалуронидаз, однако экспрессия Has2 с наибольшей достоверностью повышена в 4 из 11 культурах (рис. а). Значительно повышена экспрессия CD44 и Rhamm во всех культурах, что по литературным данным коррелирует со степенью злокачественности опухолевых клеток (рис. б) [5]. Наличие белка CD44 в выделенных культурах ГЦК было показано иммунохимиче-ским окрашиванием. Маркер ГЦК - белок а-фетопро-теин - детектировался во всех исследуемых образцах методом Вестерн-блот. Заключение. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о высокой злокачественности полученных популяций клеток и их возможности к эпигенетической пластичности в исходной опухоли. Анализ экспрессии генов, участвующих в регуляции гиалуронана в клональных клеточных культурах ГЦК, может указывать на паракринное влияние клеточных популяция друг на друга в одной опухоли, а также на способность регулировать состав ВКМ для создания благоприятной среды для опухолевого роста, инвазии и метастазирования.

N O Dashenkova

Email: n.goncharova@idbras.ru

A A Tsitrina

A S Mikaelyan

  1. Epithelial-Mesenchymal Transition in tumor microenvironment / Jing Y., Han Z., Zhang S., Liu Y., Wei L. // Cell & Bioscience.- 2011.- Vol. 1.- P. 29
  2. Hyaluronan, Inflammation, and Breast Cancer Progression / Schwertfeger K., Cowman M., Telmer P., Turley E., McCarthy J. // Front Immunol.- 2015.- Vol. 6.- P. 236.
  3. Maharjan A., Pilling D., Gomer R. High and Low Molecular Weight Hyaluronic Acid Differentially Regulate Human Fibrocyte Differentiation // PLoS One.- 2011.- Vol. 6.
  4. A novel role of low molecular weight hyaluronan in breast cancer metastasis / Wu M., Cao M., He Y., Liu Y., Yang C., Du Y., Wang W., Gao F. // FASEB J.- 2015.- Vol. 29.- P. 1290-1298.
  5. Expression of cancer stem cell biomarkers as a tool for a correct therapeutic approach to hepatocellular carcinoma / Romano M., De Francesco F., Pirozzi G., Gringeri E., Boetto R., Di Domenico M., Zavan B., Ferraro G., Cillo U.// Oncoscience.- 2015.- Vol. 2.- P. 443-456.

Views

Abstract - 12

PDF (Russian) - 0

Cited-By


PlumX

Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2016 Dashenkova N.O., Tsitrina A.A., Mikaelyan A.S.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies