PRIMENENIE AUTOLOGIChNYKh MEZENKhIMNYKh STVOLOVYKh KLETOK PODKOZhNOY ZhIROVOY TKANI V EKSPERIMENTAL'NOM LEChENII BOLEZNI GIRShPRUNGA

Abstract



Введение. Болезнь Гиршпрунга (врождённый аганглиоз толстой кишки) - распространённая патология, встречаю-щяяся с частотой 1:5000 новорожденных. До настоящего времени лечение болезни Гиршпрунга осуществляется только с помощью хирургического вмешетельства. Все применяемые на сегодня операции высокотравматичны и опасны своими осложнениями [1]. В связи с этим возникла необходимость создания нового, малоинвазивного, патогенетически обоснованного метода лечения болезни Гиршпрунга [2]. Одним из наиболее перспективных направлений в исследовании новых методов лечения является применение технологий клеточной терапии [3]. Известны различные источники мезенхимных стволовых клеток, такие как пуповинная кровь, красный костный мозг, подкожная жировая клетчатка и некоторые другие. Подкожная жировая клетчатка обладает рядом преимуществ перед другими источниками, а именно: объем изымаемой у донора подкожной жировой ткани может составлять до 3000 мл, что значительно превышает объем материала из других источников, а концентрация стволовых клеток составляет до 10% ядерных клеток стромально-васкулярной фракции [4]. Целью настоящей работы стало исследование возможности применения аутологичных мезенхимных стволовых клеток подкожной жировой ткани в экспериментальном лечения болезни Гиршпрунга. Объекты, материалы и методы исследования. В эксперименте было задействовано 50 самцов крыс линии Вистар, массой 200-230 г. Эксперимент был выполнен с соблюдением этических норм и правил гуманного обращения с лабораторными животными. Животных разделили на две группы: контрольную (n=20) и экспериментальную (n=30). На крысах обеих групп была смоделирована болезнь Гиршпрунга с применением 1%-го раствора глутамата натрия (C5H8NO4Na*H2O). У крыс экспериментальной группы методом липэктомии получали по 0,2 мл подкожной жировой клетчатки. Из полученного образца подкожной клетчатки в условиях Лаборатории культивирования тканей выделяли стромально-васкуляр-ную фракцию клеток. Выделение проводили методом ферментативной обработки, центрифугирования и фильтрации [4]. Полученные клетки культивировали на среде alfa-MEM с добавлением фетальной сыворотки телят, 216 МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2016 г., ТОМ 16, № 4 глютамина, антибиотиков и антимикотиков. Клетки 2-го пассажа пересаживали и инкубировали в течение 48 ч на нейрональной дифференцировочной среде. Затем клетки вводили той же крысе, у которой был взят исходный материал (каждой крысе было введено 1х106 клеток). Клеточную трансплантацию осуществляли методом инфильтрации стенки дистального участка толстой кишки доступом через анальное отверстие. Через 5 суток после имплантации нейробластоподобных клеток животные были выведены из эксперимента. Дистальный участок толстой кишки отправляли на гистоморфологическое исследование. Животные, погибшие при моделировании болезни Гиршпрунга, в данную выборку включены не были. Статистическую обработку полученных данных не проводили в связи с малой численностью выборки. Результаты и их обсуждение. После культивирования полученных стволовых клеток подкожной жировой ткани на нейрональной дифференцировочной среде при прижизненной микроскопии клетки имели морфологическое сходство с нервными клетками различной степени дифферен-цировки, а именно: крупные размеры, наличие отростков, образование единичных синапсов. Из 30 крыс экспериментальной группы 4 погибли в связи с индивидуальной реакцией на наркоз. Остальные 26 животных были выведены из эксперимента в соответствии с планом. При гисто-морфологическом исследовании дистальных участков толстой кишки животных в обеих группах выявлены изменённые ганглии, в связи с чем отсутствует возможность достоверно определить, являются ли они результатом развития введённых нейробластоподобных клеток, или их наличие связано с несостоятельностью выбранной нами модели. Заключение. Предложенный источник стволовых клеток и метод индукции их дифференцировки показал себя пригодным для дальнейших исследований в связи с тем, что из 30 полученных образцов подкожной жировой клетчатки крыс удалость успешно получить 30 образцов культур нейробластоподобных клеток, - это говорит о надёжности метода. Выбранный нами метод моделирования болезни Гиршпрунга не позволяет достоверно определить, являются ли выявленные при патоморфологическом исследовании ганглии результатом развития введённых нейробластоподобных клеток или результатом спонтанной регенерации. В случае успешной разработки клинического метода лечения болезни Гиршпрунга с применением аутологичных стволовых клеток подкожной жировой ткани будет получена возможность избегать тяжёлых операций, опасных своими осложнениями, проводя органосохраняющее лечение. Метод требует сравнительно небольших экономических затрат на организацию лаборатории и обучение персонала, что позволит воспроизводить его вне крупных центров.

I A Komissarov

Email: explabgpmu@gmail.com

N V Smirnova

R G Stoyanovskiy

A V Berdikov

V P Karushev

S S Denisov

  1. Козлов М. Ю. Лапароскопические операции при болезни Гиршпрунга у детей. Автореф. дис.. канд. мед. наук.- М., 2010.- 23 с.
  2. Wagner J. P., Sullins V. F., Khalil H. A., Dunn J. C. A durable model of Hirschsprung’s colon // J. Pediatr. Surg.- 2014.- Vol. 49, № 12.- P. 1804-1808.
  3. Kwok C. K., Tam P. K., Ngan E. S. Potential use of skin-derived precursors (SKPs) in establishing a cell-based treatment model for Hirschsprung’s disease // J. Pediatr. Surg.- 2013.- Vol. 48, № 3.- P. 619-628.
  4. Zuk P. A. The adipose-derived stem cell: looking back and looking ahead // Mol. Biol. Cell.- 2010.- Vol. 21, № 11.- P. 1783-1787.

Views

Abstract - 25

PDF (Russian) - 0

Cited-By


PlumX

Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2016 Komissarov I.A., Smirnova N.V., Stoyanovskiy R.G., Berdikov A.V., Karushev V.P., Denisov S.S.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies