ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ МЕТОД ОДНОВРЕМЕННОГО ВЫЯВЛЕНИЯ НЕЙРОНОВ И АСТРОЦИТОВ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ КРЫСЫ



Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Цель настоящего исследования состояла в разработке метода одновременной иммуногистохимической детекции нейронов и астроцитов с использованием пероксидазной метки с последующим анализом при помощи микроскопии в проходящем свете. Для этого была выбрана пара антигенов, каждый из которых специфически выявляет либо только нейроны, либо астроциты (в качестве маркеров были использованы ядерный белок нервных клеток (NeuN) и глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP) соответственно). Данная методика дает возможность не только идентифицировать исследуемые клетки, но и оценивать их функциональное состояние как в норме, так и при патологических воздействиях. Предложенный протокол окраски позволяет значительно упростить и оптимизировать процесс обнаружения одновременно двух антигенов на препарате и способствует повышению качества получаемых препаратов.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Ю А Калинина

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»; ООО «Транс-Технологии»

Д А Суфиева

ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины»; Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова (ИЭФБ РАН)

Список литературы

  1. Romijn HJ, van Uum JF, Breedijk I, et al. Double immunolabeling of neuropeptides in the human hypothalamus as analyzed by confocal laser scanning fluorescence microscopy. J Histochem Cytochem. 1999;47(2):229-236. doi: 10.1177/002215549904700211.
  2. Schulze W, Hayata-Takano A, Kamo T, et al. Simultaneous neuron- and astrocyte-specific fluorescent marking. Biochem Biophys Res Commun. 2015;459(1):81-86. doi: 10.1016/j.bbrc.2015.02.073.
  3. Гиляров А.В., Кирик О.В., Коржевский Д.Э. Сравнительный анализ методологических подходов, применяемых для одновременного выявления нескольких антигенов при иммуногистохимическом исследовании // Морфология. - 2010. - Т. 138. - № 5. - С. 59-64. [Gilyarov AV, Kirik OV, Korzhevskii DE. Comparative analysis of methodological approaches applied for the simultaneous demonstration of several antigens in immunohistochemical studies. Morfologiia. 2010;138(5):59-64. (In Russ.)]
  4. Duan W, Zhang YP, Hou Z, et al. Novel Insights into NeuN: from Neuronal Marker to Splicing Regulator. Mol Neurobiol. 2016;53(3):1637-1647. doi: 10.1007/s12035-015-9122-5.
  5. Сухорукова Е.Г., Кирик О.В., Зеленкова Н.М., Коржевский Д.Э. Нейрональный ядерный антиген NeuN - показатель сохранности нервной ткани и пригодности ее для иммуногистохимического исследования // Медицинский академический журнал. - 2015. - Т. 15. - № 1. - С. 63-67. [Sukhorukova EG, Kirik OV, Zelenkova NM, Korzhevskii DE. Neuronal nuclear antigen NeuN as an indicator of the nervous tissue preservation and suitability for immunocytochemical study. Medical academic journal. 2015;15(1):63-67. (In Russ.)]
  6. Yang Z, Wang KK. Glial fibrillary acidic protein: from intermediate filament assembly and gliosis to neurobiomarker. Trends Neurosci. 2015;38(6):364-374. doi: 10.1016/j.tins.2015.04.003.
  7. Сухорукова Е.Г., Коржевский Д.Э., Алексеева О.С. Глиальный фибриллярный кислый белок - компонент промежуточных филаментов астроцитов мозга позвоночных // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. - 2015. - Т. 51. - № 1. - С. 3-10. [Sukhorukova EG, Korzhevskii DE, Alekseeva OS. Glial fibrillary acidic protein: The component of iintermediate filaments in the vertebrate brain astrocytes. Zh Evol Biokhim Fiziol. 2015;51(1):3-10. (In Russ.)]
  8. Кирик О.В., Суфиева Д.А. GFAP-иммунопозитивные клетки в составе эпендимы III желудочка головного мозга крысы // Медицинский академический журнал. - 2017. - Т. 17. - № 3. - С. 32-37. [Kirik OV, Sufieva DA. GFAP-immunopositive cells among ependymocytes of the third ventricle of the rat brain. Medical academic journal. 2017;17(3):32-37. (In Russ.)]
  9. Korzhevskii DE, Sukhorukova EG, Gilerovich EG, et al. Advantages and Disadvantages of Zinc-Ethanol-Formaldehyde as a Fixative for Immunocytochemical Studies and Confocal Laser Microscopy. Neurosci Behav Physiol. 2014;44(5):542-545. doi: 10.1007/s11055-014-9948-8.
  10. Paxinos G, Watson С. The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. 4rd ed. San Diego: Academic Press; 1998.
  11. Garcia-Cabezas MA, John YJ, Barbas H, Zikopoulos B. Distinction of Neurons, Glia and Endothelial Cells in the Cerebral Cortex: An Algorithm Based on Cytological Features. Front Neuroanat. 2016;10:107. doi: 10.3389/fnana.2016.00107.
  12. Коржевский Д.Э., Гилерович Е.Г., Кирик О.В., и др. Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии: руководство / Под ред. Д.Э. Коржевского. - СПб.: СпецЛит, 2013. [Korzhevskii DE, Gilerovich EG, Kirik OV, et al. Morfologicheskaya diagnostika. Podgotovka materiala dlya gistologicheskogo issledovaniya i elektronnoy mikroskopii: rukovodstvo. Ed by D.E. Korzhevskii. Saint Petersburg: SpetsLit; 2013. (In Russ.)]
  13. Гусельникова В.В., Коржевский Д.Э. NeuN - нейрональный ядерный антиген и маркер дифференцировки нервных клеток // Acta Naturae. - 2015. - Т. 7. - № 2. - С. 46-51. [Gusel’nikova VV, Korzhevskiy DE. NeuN as neuronal nuclear antigen and neuron differentiation marker. Acta Naturae. 2015;7(2):46-51. (In Russ.)]
  14. Sofroniew MV, Vinters HV. Astrocytes: biology and pathology. Acta Neuropathol. 2010;119(1):7-35. doi: 10.1007/s00401-009-0619-8.
  15. Коржевский Д.Э, Ленцман М.В., Гиляров А.В., и др. Морфологические проявления локальной функциональной активации астроцитов, вызванной кратковременной общей ишемией головного мозга // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. - 2007. - Т. 43. - № 5. - С. 423-426. [Korzhevskii DE, Gilyarov AV, Otellin VA, et al. Morphological manifestations of local functional activation of astrocytes induced by transient global cerebral ischemia. Zh Evol Biokhim Fiziol. 2007;43(5):423-426. (In Russ.)]
  16. Panickar KS, Norenberg MD. Astrocytes in cerebral ischemic injury: morphological and general considerations. Glia. 2005;50(4):287-298. doi: 10.1002/glia.20181.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Калинина Ю.А., Суфиева Д.А., 2018

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 74760 от 29.12.2018 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах