Модулирующее действие рекомбинантного лактоферрина, выделенного из молока трансгенных коз, на агрегационную активность тромбоцитов

Обложка


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

В работе впервые показано, что рекомбинантный лактоферрин, выделенный из молока трансгенных коз, связывается с плазматической мембраной тромбоцитов. Обнаружено, что взаимодействие рекомбинантного лактоферрина с тромбоцитами приводит к потенцированию либо ингибированию агонист-индуцированной агрегации тромбоцитов в зависимости от типа агониста (аденозиндифосфат, тромбин, растительные лектины зародышей пшеницы, канавалии, бузины черной). Методом проточной цитометрии с помощью флуоресцентно меченного антитела CD42b показано, что рекомбинантный лактоферрин связывается с гликопротеином Ib на тромбоцитах.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Екатерина Вячеславовна Шамова

Белорусский государственный университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: shamova@tut.by

канд. биол. наук, старший научный сотрудник НИЛ биофизики и биотехнологии кафедры биофизики физического факультета

Белоруссия, 220030, г. Минск, пр. Независимости, 4 

Дарья Владимировна Григорьева

Белорусский государственный университет

Email: dargr@tut.by

канд. биол. наук, старший научный сотрудник НИЛ биофизики и биотехнологии кафедры биофизики физического факультета

Белоруссия, 220030, г. Минск, пр. Независимости, 4

Ирина Владимировна Горудко

Белорусский государственный университет

Email: irinagorudko@gmail.com

канд. биол. наук, доцент, доцент кафедры биофизики физического факультета

Россия, 220030, г. Минск, пр. Независимости, 4

Анастасия Никитична Свешникова

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН

Email: agolomy@gmail.com

канд. физ.-мат. наук, старший научный сотрудник кафедры биофизики физического факультета; заведующая лабораторией внутриклеточной сигнализации и системной биологии 

Россия, 119991, г. Москва, ул. Ленинские горы, д.1; 119991, г. Москва, ул. Косыгина, д.4

Список литературы

  1. Gonzalez-Chavez SA, Arevalo-Gallegos S, Rascon-Cruz Q. Lactoferrin: structure, function and applications. Int J Antimicrob Agents. 2009;33(4):301-308. https://doi.org/10.1016/j.ijantimicag.2008.07.020.
  2. Suzuki YA, Lopez V, Lonnerdal B. Mammalian lactoferrin receptors: structure and function. Cell Mol Life Sci. 2005;62(22):2560-2575. https://doi.org/10.1007/s00018-005-5371-1.
  3. Ward PP, Paz E, Conneely OM. Multifunctional roles of lactoferrin: a critical overview. Cell Mol Life Sci. 2005;62(22):2540-2548. https://doi.org/10.1007/s00018-005-5369-8.
  4. Farnaud S, Evans RW. Lactoferrin - a multifunctional protein with antimicrobial properties. Mol Immunol. 2003;40(7):395-405. https://doi.org/10.1016/S0161-5890(03)00152-4.
  5. Борзенкова Н.В., Балабушевич Н.Г., Ларионова Н.И. Лактоферрин: физико-химические свойства, биологические функции, системы доставки, лекарственные препараты и биологически активные добавки (обзор) // Биофармацевтический журнал. - 2010. - Т. 2. - № 3. - С. 3-19. [Borzenkova NV, Balabushevich NG, Larionova NI. Lactoferrin: physical and chemical properties, biological functions, delivery systems, pharmaceutical and nutraceutical preparations (review). Biofarmatsevticheskii zhurnal. 2010;2(3):3-19. (In Russ.)]
  6. Maneva A, Taleva B, Manev V, Sirakov L. Lactoferrin binding to human platelets. Int J Biochem. 1993;25(5):707-712. https://doi.org/10.1016/0020-711x(93)90357-k.
  7. Leveugle B, Mazurier J, Legrand D, et al. Lactotransferrin binding to its platelet receptor inhibits platelet aggregation. Eur J Biochem. 1993;213(3):1205-1211. Https://doi.org/10.1111/j.1432-1033.1993.tb17871.x.
  8. Podoplelova NA, Sveshnikova AN, Kotova YN, et al. Coagulation factors bound to procoagulant platelets concentrate in cap structures to promote clotting. Blood. 2016;128(13):1745-1755. https://doi.org/10.1182/blood-2016-02-696898.
  9. Shamova EV, Gorudko IV, Drozd ES, et al. Redox regulation of morphology, cell stiffness, and lectin-induced aggregation of human platelets. Eur Biophys J. 2011;40(2):195-208. https://doi.org/10.1007/s00249-010-0639-2.
  10. Смирнова И.В., Хаспекова С.Г., Игнатов В.В., Мазуров А.В. Взаимодействие агглютинина зародышей пшеницы и конканавалина А с тромбоцитами. Стимуляция функциональных реакций тромбоцитов и связывание с мембранными гликопротеинами // Биохимия. - 1998. - Т. 63. - № 6. - С. 842-851. [Smirnova IV, Khaspekova SG, Ignatov VV, Mazurov AV. Interaction of wheat germ agglutinin and concanavalin A with platelets. Stimulation of platelet functional reactions and binding with membrane glycoproteins. Biokhimiia. 1998;63(6):710-718. (In Russ.)]
  11. Ohmori T, Yatomi Y, Wu Y, et al. Wheat germ agglutinin-induced platelet activation via platelet endothelial cell adhesion molecule-1: involvement of rapid phospholipase C gamma 2 activation by Src family kinases. Biochemistry. 2001;40(43):12992-13001. https://doi.org/10.1021/bi0109459.
  12. Shibuya N, Goldstein IJ, Broekaert WF, et al. The elderberry (Sambucus nigra L.) bark lectin recognizes the Neu5Ac(alpha 2-6)Gal/GalNAc sequence. J Biol Chem. 1987;262(4):1596-1601.
  13. Dörmann D, Clemetson KJ, Kehrel BE. The GPIb thrombin-binding site is essential for thrombin-induced platelet procoagulant activity. Blood. 2000;96(7):2469-2478.
  14. Torti M, Festetics ET, Bertoni A, et al. Clustering of integrin alphaIIb-beta3 differently regulates tyrosine phosphorylation of pp72syk, PLCgamma2 and pp125FAK in concanavalin A-stimulated platelets. Thromb Haemost. 1999;81(1):124-130. https://doi.org/10.1055/s-0037-1614429.
  15. Varga-Szabo D, Pleines I, Nieswandt B. Cell adhesion mechanisms in platelets. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008;28(3):403-412. https://doi.org/10.1161/ATVBAHA.107.150474.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Связывание рекомбинантного лактоферрина (рЛФ), коньюгированного с флуоресцентной меткой (FITC) с тромбоцитами: отмытые тромбоциты инкубировали с рЛФ-FITC (200 мкг/мл) в течение 10 минут при +23 °С, полученные образцы разбавляли и анализировали на проточном цитометре. В каждом образце было подсчитано не менее 10 000 тромбоцитов. Связывание рЛФ с мембраной тромбоцитов оценивали по количеству положительных событий для тромбоцитов, несущих на своей поверхности рЛФ, меченный FITC

Скачать (52KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Влияние рекомбинантного лактоферрина (рЛФ) на агрегацию тромбоцитов, индуцированную физиологическими агонистами (аденозиндифосфат (АДФ), тромбин) и растительными лектинами (WGA — специфичный лектин зародышей пшеницы, Con A — маннозо-связывающий лектин канавалии, SNA — галактозо-специфичный лектин бузины черной). Тромбоциты инкубировали с рЛФ в течение 2 минут, а затем добавляли агонист. На рис. а, б, г — типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов, индуцированные АДФ (а), тромбином (б) и WGA (г) соответственно, в присутствии и в отсутствие рЛФ. На рис. в, д, е — зависимость степени агрегации (Т) (в и д) и параметра стабильности лектин-индуцированных агрегатов (R) (e) от концентрации рЛФ. Концентрации агонистов: АДФ — 2,5 мкМ, тромбин — 12,5 мкг/мл, WGA — 5 мкг/мл, Con A — 100 мкг/мл, SNA — 75 мкг/мл. В случае лектин-индуцированной агрегации дезагрегацию тромбоцитов инициировали внесением соответствующих гаптенных углеводов: 100 мМ GlcNAc (WGA), 60 мМ α-метид-D-маннозида (Con A), 60 мМ лактозы (SNA). Концентрация рЛФ на графиках с кинетическими кривыми указана в мкг/мл. Стрелкой указан момент добавления гаптенного углевода

Скачать (262KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Уменьшение количества мест связывания СD42b c GPIb в присутствии рекомбинантного лактоферрина (рЛФ). Тромбоциты инкубировали с рЛФ (100–1000 мкг/мл) в течение 10 минут при +23 °С, затем добавляли СD42b R-PE (1 % по объему) и инкубировали еще 5 минут при +23 °С. Полученные образцы разбавляли и использовали для последующего анализа на проточном цитометре. Для каждого образца проанализировали не менее 10 000 тромбоцитов. Об экспонировании GPIb на поверхности тромбоцитов судили по интенсивности флуоресценции антител СD42b R-PE. * p < 0,05 по сравнению с образцами в отсутствие рЛФ (контроль)

Скачать (38KB)
Метаданные

© Шамова Е.В., Григорьева Д.В., Горудко И.В., Свешникова А.Н., 2018

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 74760 от 29.12.2018 г.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах