FRAGMENTY VNEKLETOChNOY DNK DLYa DIFFERENTsIAL'NOY DIAGNOSTIKI GEMORRAGIChESKIKh I IShEMIChESKIKh INSUL'TOV

Abstract

Full Text

Инсульт - фенотипически разнообразное заболевание: большинство инсультов являются результатом свертывания кровеносных сосудов и отрезания кровотока в части мозга, остальные инсульты связаны с кровоиз- лиянием. Окислительный стресс и связанное с ним окислительное повреждение являются основными причинами гибели клеток во время ишемии. После ишемии реперфузия может вызывать последовательную цепь патофизио- логических каскадов, которые, в свою очередь, вызывают апоптическую или некротическую клеток гибель, при- водящую к выделению ДНК в циркуляцию. Цель исследования - оценить низкомолекулярные фрагменты ДНК как возможный прогностический биомаркер при остром ишемическом и геморрагическом инсульте. Методы. Обследованы пациенты с острым инсультом (n=54) в возрасте 46-50 лет, у 5 из них был диа- гностирован геморрагический инсульт, а у 46 - ишемический инсульт, и контрольные субъекты (n=23) в возрасте 34-73 лет, которые были разделены на 3 возрастные группы: 34-44 года (n=7), 46-67 лет, что соответствует воз- расту пациентов (n=6) и 60-74 года (n=4). У всех участников не было клинических признаков предшествующего инсульта. После венепункции 3 мл крови были собраны в пробирки Vacutainer, содержащие ЭДТА. У пациентов с ишемическим инсультом (n=42) была собрана спинномозговая жидкость. Образцы ДНК были выделены из плазмы и спинномозговой жидкости депротеинизацией фенолом, проанализированы с помощью градиентного полиакри- ламидного электрофореза и количественно определены спектрофотометрически. Результаты. В плазме 17 здоровых доноров уровни фрагментов низкомолекулярной ДНК (фнДНК) составляли 30,2 ± 6,6 нг/мл. Однако в группе 6 доноров, соответствующих возрасту пациентов с инсультом (36-67 лет), уровни фнДНК составили 20,16 ± 7,70 нг/мл (различия недостоверны). При геморрагическом инсульте уровни фнДНК были значительно выше, чем в контроле, достигая 72,8 ± 17,6 нг/мл через 3 ч и 61,8 ± 16,5 нг/мл через 6 ч (p<0,015), снижаясь после 24 ч до 28,0 ± 6,9 нг/мл и падали до исход- ного уровня через 48 ч и до 72 ч. В случае ишемического инсульта значимые концентрации фвДНК в плазме были обнаружены уже через 3 ч после начала инсульта, когда они были 40,2 ± 7,8 нг/мл, более чем в два раза выше, чем у здоровых контролей, после чего наблюдалось значительное увеличение до 50,2 ± 5,1 нг/мл через 24 ч и 54,7 ± 10,1 нг/мл через 48 ч (р<0,02). В течение следующих 72 ч эти уровни постепенно возвращаются к исходному значению. У пациентов с ишемическим инсультом обнаруживаемые количества фнДНК были также обнаружены в образцах спинномозговой жидкости, собранных приблизительно через 24 часа после начала инсульта (71,9 ± 16,9 нг/мл), в то время как образцы, собранные в более ранние или в более поздние моменты времени, не содержали значимых количеств фнДНК. Обсуждение. Два распространенных типа инсульта, связанных с ишемией и геморрагией, отличаются временной динамикой накопления фнДНК. При геморрагии первоначальное повышение уровней фнДНК, скорее всего, отражает степень повреждения ткани, в то время как у пациентов с ишемией уровни фнДНК увеличиваются параллельно с повреждением, вызванным гипоксией и последующей компенсаторной реперфузией. Повышение уровней циркулирующей ДНК при инсульте было отмечено ранее, настоящее исследование отличается определением фнДНК, высвобождаемая из клеток, погибающих в результате апоптоза, а не некроза. Заключение. Полученные данные определяют оптимальные интервалы оценки с максимальной диффе- ренцирующей силой для исходов инсульта: 24-48 часов после ишемии и как можно ближе к моменту госпитализа- ции для геморрагии. Данные также указывают на роль апоптоза в формировании ишемического очага.