СРАВНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ МЕТИЛЕНОВОГО СИНЕГО ДЛЯ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ПУТЕЙ ЛИМФООТТОКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА КРЫСАХ



Цитировать

Полный текст

Аннотация

Ежегодно во всем мире диагностируется более 2 000 000 новых случаев заболевания немелкоклеточным раком легкого. Предоперационное N-стадирование является важнейшим диагностическим этапом для определения прогнозов и тактики дальнейшего лечения пациентов с раком легкого. У 20-30% пациентов, прошедших лечение по поводу НМРЛ I-II стадии, наблюдается местный или отдаленный рецидив заболевания, а 5-летняя выживаемость у этих больных варьирует от 40 до 85,5%. В связи с этим создается необходимость разработки новых методов интраоперационной диагностики поражения региональных лимфатических узлов. Одним из таких методов является обнаружение и исследование первого лимфатического узла (сигнального) на пути опухолевого распространения с целью определения состояния остальных региональных лимфатических коллекторов. Однако, на сегодняшний день отсутствует «идеальный» метод выявления сигнального лимфатического узла. Это требует разработки новых подходов к визуализации путей лимфооттока. Цель исследования: сравнить и оценить эффективность использования препаратов метиленового синего для маркирования путей лимфооттока у лабораторных животных (крыса беспородная). Животные рандомизированы в 2 группы по 8 особей в каждой. Первой группе подкожно в левое бедро вводился 1% водный раствор метиленового синего, второй - метиленовый синий с человеческим сывороточным альбумином. В зависимости от времени экспозиции препарата животные случайным образом разделены на 4 подгруппы - 15, 30, 45 и 60 минут. Оценивалась эффективность маркирования путей лимфооттока от места инъекции. В результате исследования продемонстрировано, что использование 1% раствора метиленового синего позволяет адекватно визуализировать пути лимфооттока. Недостатком препарата является миграция в ЛУ следующего порядка при экспозиции длительностью 30 минут. Раствор метиленового синего в сочетании с человеческим сывороточным альбумином обладает сравнимым качеством визуализации ЛУ, однако, однако, обладает замедленной (>60 минут) миграцией, что является предпочтительным во время операции.

Полный текст

Рак легкого на протяжении последних лет занимает лидирующую позицию в структуре онкологи- ческой заболеваемости и смертности. Ежегодно во всем мире диагностируется более 2 000 000 новых случаев заболевания злокачественными образованиями легких, 85-90% которого представлены немел- коклеточным раком (НМРЛ) [7]. Кроме того, более 1 700 000 человек погибает ежегодно в связи с про- грессированием онкологического процесса. Не смотря на стремительное развитие медицины и онко- логии в частности, отдаленная выживаемость среди мужчин и женщин по разным источникам остается около 19% [5]. Адекватное лечение НМРЛ ранних стадий (I-II) позволяет увеличить долю пациентов, пере- живающих 5-летний рубеж до 64% и более [2]. Предоперационное выявление метастазов в регионарных лимфатических узлах является важней- шим диагностическим этапом для определения прогнозов и тактики дальнейшего лечения [1]. У 20-30% пациентов, прошедших лечение по поводу НМРЛ I-II стадии, наблюдается местный или отдаленный ре- цидив заболевания, а 5-летняя выживаемость у этих больных варьирует от 40 до 85,5% [7]. Одной из при- чин неудовлетворительных результатов является распространение опухолевых клеток в региональные уз- лы в виде микрометастазов, которые не выявлены при лучевой диагностике и рутинном гистологическом исследовании [3]. Активное использование низкодозовой компьютерной томографии (НДКТ) в качестве метода скрининга рака легкого позволило увеличить долю пациентов с подозрением на наличие злокачествен- ного новообразования в легких [6, 8]. При I-II стадии НМРЛ должна быть использована активная хирурги- ческая тактика для диагностики и лечения патологического процесса [6]. Стандартным объемом вме- шательства является лобэктомия. Однако, в последнее время предложены оганосохраняющие анато- мические резекции (сегментэктомии). Данный объем вмешательства может выполняться исключительно при доказанном отсутствии поражения регионарных лимфатических узлов, что должно подтверждаться интраоперационно при определении индивидуальных путей лимфооттока. В связи с вышесказанным создаются предпосылки для поиска новых методов, которые позволят усовершенствовать результаты диагностики поражения лимфатических узлов у пациентов с НМРЛ. Од- ной из таких методик является интраоперационное выявление «сигнального лимфатического узла», а также определение индивидуального типа лимфооттока. Данный подход позволяет определить первый лимфатический коллектор на пути лимфогенного распространения онкологического процесса и вы- полнить его прицельную биопсию с целью определения состояния остальных региональных лимфатиче- ских узлов (ЛУ) [1]. Однако, на сегодняшний день отсутствует «идеальный» метод выявления сигнального лимфатического узла. Предложено использование биологических красителей, радиоизотопных препа- ратов, флюоресцирующих и радиоконтрастных веществ, но каждый из перечисленных методов имеет недостатки при использовании в клинической практике, что делает актуальной проблему поиска опти- мального метода интраоперационного маркирования путей лимфооттока [9, 10]. Цель исследования: сравнить эффективность использования 1% водного раствора метиленового синего (МС) и 1% водного раствора метиленового синего с сывороточным человеческим альбумином (МС:ЧСА) в эксперименте. Материалы и методы. В исследовании проводилась оценка и сравнение эффективности ис- пользования анилиновых красителей синего цвета для маркирования путей лимфооттока у лаборатор- ных животных (крыса беспородная). В эксперименте использовано 16 самок беспородных крыс (ФГУП «Питомник лабораторных животных «Рапполово»», Ленинградская область, РФ) в возрасте около 40 дней с начальной массой тела 180-220 г, содержащихся в стандартных условиях вивария. Для анестезии ис- пользовался препарат «Золазепам» (Zoletil®100). Все экспериментальные работы выполнялись в соот- ветствии с требованиями международной конвенции. Получено разрешение этического комитета Во- енно-Медицинской академии им. С.М. Кирова. Животные рандомизированы в 2 группы по 8 особей в каждой. Первой группе для маркирования путей лимфооттока вводился 1% водный раствор метиленового синего (МС), второй группе - смесь 1% водного раствора метиленового синего с 20% раствором человеческого сывороточного альбумина (МС:ЧСА). Введение препаратов осуществлялось по одинаковой методике: после предварительной анестезии маркирующий раствор вводился подкожно в бедренный сегмент левой задней конечности. После инъекции в течение 15 секунд выполнялись круговые массирующие движения в месте введения препарата. Далее животные случайным образом разделены на 4 подгруппы в зависимости от времени экспозиции растворов - 15, 30, 45 и 60 минут. По истечении времени животные выводились из эксперимента. Производилось вскрытие с целью определения эффективности маркирования лимфатических узлов. Лимфатические узлы верифициро- ваны на основании схемы, представленной в литературе. Выполнялась биопсия сигнального лимфати- ческого узла с последующим гистологическим исследованием. Целью гистологического исследования являлось изучение микроскопических изменений, наблюдаемых в маркированном лимфатическом узле. Результаты исследования. У всех лабораторных животных проведена оценена эффективность интраоперационной визуализации путей лимфооттока от места введения хромолимфторопных препа- ратов (МС; МС:ЧСА). По результатам визуальной оценки определялась эффективность введённого пре- парата для окраски путей лимфооттока (Таблица 1). Далее исследованы результаты маркирования СЛУ при экспозиции в течение 3- минут. В группах МС и МС:ЧСА у всех 4 животных определялся единственный окрашенный лимфатический узел, который был расценен как сигнальный (Рис. 4, 5). При экспозиции в течение 45 минут у животных группы МС выявлено от 2 до 3 маркированных лимфатических узлов разного порядка, что связано, вероятно, с миграцией препарата в следующие коллекторы по пути лимфооттока. Во второй группе у обоих животных выявлен единственный окрашен- ный узел в подвздошной области. Предполагается, что данные различия связаны с молекулярной массой соединений и размерами, что делает миграцию МС:ЧСА более длительной через первый узел на пути лимфооттока (Рис. 5, 6). При экспозиции длительностью 60 минут результаты в группе МС:ЧСА были получены аналогичные предыдущим, однако, окраска узла оказалась чуть менее интенсивной, чем спустя 30 и 45 минут. На- против, в группе, которой вводился МС, по истечении 60 минут окрашенных узлов не обнаружено (Рис. 7, 8). Из полученных маркированных лимфатических узлов изготовлены микропрепараты. Структура ЛУ оставалась не измененной, а также не определялось гистологических признаков окрашивания метиле- новым синим. Таким образом, маркирование ЛУ синими красителями не изменяет микроструктуры препарата, что является важным критерием при поиске микрометастазов в ЛУ. Выводы: 1. Использование 1% раствора метиленового синего позволяет адекватно визуализировать пути лимфооттока. Недостатком препарата является миграция в ЛУ следующего порядка при экспозиции длительностью 30 минут. 2. Раствор метиленового синего в сочетании с человеческим сывороточным альбумином обла- дает сравнимым качеством визуализации ЛУ, однако, обладает замедленной (>60 минут) миграцией, что является предпочтительным во время операции.
×

Об авторах

В. В Коваленко

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ

Санкт-Петербург, Россия

И. В Дмитроченко

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ

Санкт-Петербург, Россия

А. Р Закиров

ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ

Санкт-Петербург, Россия

Список литературы

  1. Акопов, А.Л. Интраоперационное определение «сигнальных» лимфатических узлов при помощи системы инфракрасной визуали-зации при местно-распространённом немелкоклеточном раке лёгкого / А.Л. Акопов, Г.В. Папаян, И.В. Чистяков // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. - 2015. - Т.174. - №4. - С.13-17.
  2. Амиралиев, А.М. Сегментэктомия у больных со злокачественными новообразованиями легких / А.М. Амиралиев, О.В. Пикин, А.Б. Рябов // Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. - 2017. - Т.6. - №5. - С.87-95.
  3. Исмагилов, А.Х. Биопсия сигнальных лимфатических узлов: история и современность / А.Х. Исмагилов, Н.Г. Аснина, Г.А. Азаров // Опухоли женской репродуктивной системы. - 2018. - Т.14. - №1. - С.38-46.
  4. Манихас, Г.М. Биопсия сигнального лимфатического узла при меланоме кожи конечностей и туловища / Г.М. Манихас, В.В. Марты-нюк, М.В. Зинькевич // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - 2008. - №1. - С.107-110.
  5. Bille, A. Incidence of occult pN2 disease following resection and mediastinal lymph node dissection in clinical stage I lung cancer patients / A. Bille, K.M. Woo, U.A. European [et al.] // Eur. J. Cardiothorac. Surg. - 2017. - Vol.51, №4. - P.674-679.
  6. Ettinger, D.S. Non-Small Cell Lung Cancer, Version 1.2020, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology / D.S. Ettinger, D.E. Wood, D.L. Aisner [et al.] // J. Natl. Compr. Canc. Netw. - 2019. - Vol.15, №4. - P.504-535.
  7. Siegel, R.L. Cancer statistics / R.L. Siegel, K.D. Miller, A. Jemal // CA Cancer J. Clinic. - 2019. - Vol.69, №1. - P.7-34.
  8. Silvestri, G.A. Methods for staging non-small cell lung cancer: Diagnosis and management of lung cancer, 3rd ed: American college of chest physicians evidence-based clinical practice guidelines / G.A. Silvestri, A.V. Gonzalez, M.A. Jantz [et al.] // Chest. - 2013. - Vol.143, №5. - P.211-250.
  9. Tiffet, O. Sentinel lymph node detection in primary melanoma with preoperative dynamic lymphoscintigraphy and intraoperative γ probe guidance / O. Tiffet, J.L. Perrot, A. Gentil-Perret [et al.] // Br. J. Surg. - 2004. - Vol.91, №7. - P.886-892.
  10. Usman, A.M. Screening for lung cancer: A systematic review and meta-analysis / A.M. Usman, J. Miller, L. Peirson [et al.] // Prev. Med. - 2016. - Vol.89, №3. - P.301-314.
  11. Wishart, G.C. A feasibility study (ICG-10) of indocyanine green (ICG) fluorescence mapping for sentinel lymph node detection in early breast cancer / G.C. Wishart, S.-W. Loh, L. Jones [et al.] // Eur. J. Surg. Oncol. - 2012. - Vol.38, №8. - P.651-656.
  12. Yamashita, S.I. Video-assisted thoracoscopic indocyanine green fluorescence imaging system shows sentinel lymph nodes in non-small-cell lung cancer / S.I. Yamashita, K. Tokuishi, K. Anami [et al.] // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 2011. - Vol.141, №1. - P.141-144.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Коваленко В.В., Дмитроченко И.В., Закиров А.Р., 2020

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС 77 - 77760 от 10.02.2020.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах