Modern opportunities for diagnostics of chronic endometritis

V. N. Ellinidi; Эллиниди В. Н.; N. I. Davydova; Давыдова Н. И.; N. M. Kalinina; Калинина Н. М.; Е. А. Mikhnina; Михнина Е. А.; О. А. Dobrotvortseva; Добротворцева О. А.

doi:10.17816/JOWD88985

Modern opportunities for diagnostics of chronic endometritis

Authors: Ellinidi V.N.¹^,2, Davydova N.I.¹^,2, Kalinina N.M.¹^,2, Mikhnina Е.А.¹^,2, Dobrotvortseva О.А.¹^,2
Affiliations:
1. All-Russian Center for Emergency and Radiation Medicine, EMERCOM of Russia
2. Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS
Issue: Vol 52, No 3 (2003)
Pages: 64-68
Section: Original Research
URL: https://journals.eco-vector.com/jowd/article/view/88985
DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD88985
ID: 88985

Cite item

Full Text

Abstract
Full Text
About the authors
References
Supplementary files
Statistics

Abstract

The indices of local immunity were studied by the immunohistochemical method in the endometrium from 151 women with morphological manifestations of chronic endometritis. To confirm the inflammatory process and clarify its nature, the parameters of systemic immunity were studied. According to changes in the parameters of local immunity, three groups of patients were identified. Determination of the parameters of systemic immunity made it possible to confirm chronic endometritis in all women and to identify a group with an autoimmune nature of inflammation.

Keywords

modern diagnostic capabilities, diagnosis of chronic endometritis, endometritis, indices of local immunity

Full Text

Актуальность проблемы

Проблема изучения воспалительных заболеваний эндометрия у женщин репродуктивного возраста является актуальной, так как вызывает не только нарушение менструальной, но и репродуктивной функции. Частота встречаемости хронического эндометрита при бесплодии колеблется от 20 до 60% [5], при привычном невынашивании беременности — от 60,5 до 86,7% [1]. Клинические проявления хронического эндометрита неспецифичны, заболевание часто диагностируется случайно при скрининговом обследовании женщин.

Для диагностики хронического эндометрита используется, как правило, гистологический метод, учитывающий совокупность морфологических признаков хронического воспаления: наличие очаговой лимфолейкоцитарной инфильтрации, очагового или диффузного фиброза стромы; присутствие плазматических клеток и склеротические изменения стенок спиральных артерий [6, 3]. Наличие только одного или двух вышеописанных критериев воспаления вызывает сомнение у морфологов в постановке диагноза хронического эндометрита. Других способов верификации диагноза на сегодняшний день не существует.

Данные литературы, касающиеся изменений параметров иммунитета при хронических воспалительных процессах эндометрия (эндометритах) малочисленны [4, 8].

Цель исследования: определение маркеров иммунокомпетентных клеток, подтверждающих воспаление в эндометрии и уточнение характера воспалительного процесса при сопоставлении показателей местного и системного иммунитета.

Материалы и методы

Показатели системного и местного иммунитета были изучены в лаборатории морфологических исследований и НИЛ клеточного и гуморального иммунитета ВЦЭРМ МЧС России. Группу исследования составили 151 женщина (средний возраст 32 года) с нарушением репродуктивной функции (бесплодие первичное, вторичное, невынашивание беременности), с гистологическими критериями хронического эндометрита. Все женщины наблюдались в НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта, где перед выполнением инвазивных процедур (лапаро- и гистероскопий, гистеросальпингографий, биопсий эндометрия) они были обследованы на наличие скрытых инфекций урогенитального тракта с использованием бактериологического, культурального, иммуно- флюорисцентного, иммуноферментного и серологического

методов исследования (в качестве биологического материала исследовались секрет влагалища и цервикального канала, а также образцы крови). Контрольную группу составили 10 женщин с нормальной морфологической структурой эндометрия, соответствующей пролиферативной (5) и секреторной (5) фазам менструального цикла без признаков воспаления.

Местный иммунитет. Показатели местного иммунитета — количество естественных киллерных клеток (CD56+ и CD16+), лимфоцитов экспрессирующих маркеры активации HLA-DR+, CD25+, изучали в ткани эндометрия (соскобах) иммуногистохимическим методом с использованием моноклональных антител (фирмы «Novocastra» , Великобритания) по описанной методике [7]. Полученные результаты оценивали количественно (в трех полях зрения при увеличении микроскопа-объектива ×40).

Системный иммунитет. С целью подтверждения воспалительного процесса и определения его характера были изучены параметры системного иммунитета у 50 женщин. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови определяли методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител (МедБиоСпектр, Москва). Спонтанную, индуцированную продукцию и содержание в сыворотке цитокинов определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа, используя тест-системы «Протеиновый контур» (Санкт- Петербург) для изучения фактора некроза опухолей-α (ФНО-α), интерферона-α (ИНФ-α), интерлейкина-2 (ИЛ-2), интерлейкина-4 (ИЛ-4) и тест-системы «Цитокин» (Санкт-Петербург) для определения интерферон-γ (ИНФ-γ). Циркулирующие иммунные комплексы высоко-, средне-, низкомолекулярные (ЦИКв, ЦИКc, ЦИКн) определяли осаждением ПЭГ 6000. Уровни иммуноглобулинов классов А, М, G изучали турбодиметрическим методом. Секреторный иммуноглобулин А определяли иммуноферментным методом, используя тест-системы «Полигност» , Санкт-Петербург.

Результаты исследования

По результатам бактериологического, культурального и серологического исследований в группе обследованных у 9 женщин диагностирован гепатит С, у 8 женщин выявлена хроническая герпетическая, у 14 микоплазменная, у 5 хламидийная, у 47 уреамикоплазменная инфекции. Всего инфицировано было 49% (71) женщин, выявление двух и более возбудителей отмечено у 66% из числа инфицированных. До проведения иммунологического обследования все женщины были пролечены по поводу выявленных инфекций урогенитального тракта. При гистологическом исследовании соскобов эндометрия морфологическое подтверждение хронического эндометрита отмечено у 11,9% женщин, только лимфолейкоцитарная инфильтрация стромы эндометрия имела место у 54,6%, фиброз стромы выявлен у 34,5% обследованных.

При иммуногистохимическом исследовании эндометрия в контрольной группе количество клеток, экспрессирующих CD56+, CD16+ и HLA-DR+ было 0-5 в поле зрения.

Полученные результаты исследования местного иммунитета от 151 женщины позволили нам выделить 3 группы обследованных (таблица).

Таблица. Распределение женщин по группам в зависимости от количества лимфоцитов, экспрессирующих CD56+ в эндометрии

Группы (кол-во женщин)	Параметры местного иммунитета (в поле зрения)
Группы (кол-во женщин)	CD56+	CD16+	HLA-DR	CD25+
1(64)	0-5-10	20-50	0-10	0
2(40)	10-25	30-50	10-30	0
3 (47)	От 30	От 50	От 30	0
Контроль (10)	0-5-10	0-5-10	0-5-10	0

В первую группу были включены 64 женщины (42,7%), в эндометрии которых количество лимфоцитов, экспрессирующих CD56+ и HLA- DR+, не отличались от контрольной группы (от 5 до 10 в поле зрения и 0-5 в поле зрения соответственно), но было повышено количество клеток, экспрессирующих CD 16+ — от 10 до 50 в поле зрения.

Вторую группу составили 40 (26,7%) женщин, в эндометрии которых количество лимфоцитов, экспрессирующих CD56+ — было 10-25-30 в поле зрения, CD 16+ — от 30 в поле зрения, HLA- DR+ — 15-20 в поле зрения, что превышало эти показатели по сравнению с контрольной группой почти в три раза.

Третью группу составили 47 (31,3%) женщин, в эндометрии которых количество клеток, несущих антигены CD56+, CD16+ и HLA-DR+ было выше 50 в поле зрения, что значительно превышало количество этих же показателей по сравнению с контрольной группой в 5 раз и выше.

При сопоставлении данных местного иммунитета с системным у женщин в различных группах было выявлено, что субпопуляционный состав лимфоцитов (рис. 1) в каждой из выделенных групп и у всех обследованных женщин достоверно не отличался от средних показателей нормы (р>0,05).

Рис. 1. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у женщин в зависимости от количества в эндометрии лимфоцитов, экспрессирующих CD56+

Рис. 2. Количество лимфоцитов периферической крови, экспрессирующих маркеры активации (CD25+, CD95+, HLA(II) у женщин в зависимости от количества в эндометрии лимфоцитов, экспрессирующих CD56+

У всех женщин и в каждой из выделенных групп отмечалась тенденция к снижению специфических цитотоксических лимфоцитов (CD8+) в периферической крови с наиболее выраженными изменениями в 3 группе. За счет этого несколько был увеличен иммунорегуляторный индекс, достигающий максимальных показателей в 3 группе. Содержание естественных киллеров (CD 16+) в периферической крови приближалось к нижним границам нормы и в 3 группе этот показатель был самым низким.

Количество лимфоцитов, экспрессирующих маркеры активации CD95+ и HLA-DR+ (табл. 3), свидетельствующие об активности процесса, не отличались от средних показателей в контрольной группе. Количество лимфоцитов, экспрессирующих CD25+ (рис. 2) — маркер клеток-супрессоров пролиферации аутореактивных клеток, был снижен в 1 и во 2 группе [10]. Во всех группах отмечены высокие показатели спонтанной продукции ИЛ-2, при этом индуцированная продукция ростового фактора была в норме (рис. 3).

Рис. 3. Продукция ростового фактора ИЛ-2 у женщин в зависимости от количества в эндометрии лимфоцитов, экспрессирующих CD56+

Показатели иммуноглобулинов классов А, М, G (рис. 4) были в норме, однако уровень секреторного иммуноглобулина A (slgA) был повышен во всех исследуемых группах, что объясняется наличием воспалительного процесса в слизистой эндометрия и особенностями иммунитета слизистых. Отмечалось повышенное содержание ЦИКн во всех исследованных группах по сравнению с контрольной (рис. 5).

Рис. 4. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови (IgA, IgM, IgG, slgA) и циркулирующих иммунных комплексов в крови у женщин в зависимости от количества в эндометрии лимфоцитов, экспрессирующих CD56+

Рис. 5. Изменения циркулирующих иммунных комплексов наличие воспалительного процессах во всех исследуемых группах. ФНО-α и ИНФ-γ влияют на цитотоксическую активность естественных киллерных клеток эндометрия, реализующих ее по Fas-зависимому или перфоринопосредованному

Спонтанная продукция и содержание в сыворотке ИФН-γ в целом и в выделенных группах статистически достоверно превышали значения этого показателя в контрольной группе, при этом максимальное содержание этого цитокина отмечалось у пациентов 3 группы (рис. 6) (тест Манна-Уитни, р< 0,05). Спонтанная продукция и содержание в сыворотке провоспалительного цитокина ФНО-α у всех обследованных женщин, особенно во 2 и 3 исследуемых группах, превышало контрольные значения с максимальным нарастанием показателей в 3 группе (рис. 6), отличия между группами были достоверными (тест Манна-Уитни, р< 0,05). Спонтанная продукция и содержание в сыворотке ИЛ-4 были повышены у всех женщин (рис. 6), достоверно отличались от показателей контрольной группы и характеризовались максимальным увеличением в 3 группе (тест Манна-Уитни, р< 0,05).

Рис.6. Продукция цитокинов Тх1(ФНО-а, ИНФ-γ) и Тх2(ИЛ-4) у женщин в зависимости от количества в эндометрии лимфоцитов, экспрессирующих CD56+

Обсуждение

На сегодняшний день большая роль в естественной иммунной защите эндометрия отводится большим гранулярным лимфоцитам, точнее натуральным киллерным клеткам с высокой экспрессией (CD16+CD56+++), способным лизировать широкий спектр клеток-мишеней. Именно эти клетки считаются основными регуляторами физиологических процессов, связанных с пролиферацией, и рассматриваются как иммунокомпетентные клетки, отвечающие за репродуктивный иммунитет и поддержание беременности [9, 12].

В связи с тем, что формирование групп сравнения основывалось на результатах иммуногистохимического определения в соскобах эндометрия количества лимфоцитов, экспрессирующих CD56+, CD16+ и HLA-II параметры системного иммунитета были выборочно изучены у женщин в каждой из этих групп. Выявленное увеличение в эндометрии количества лимфоцитов, экспрессирующих CD56+ у пациентов второй и третьей групп, сочеталось с более низкими значениями в этих группах количества лимфоцитов периферической крови, осуществляющих цитотоксическую функцию, как специфическую (СD8+),так и неспецифическую (CD16+) и сопровождалось увеличением иммунорегуляторного индекса. Снижение этих субпопуляций лимфоцитов (CD8+, CD16+) в периферической крови можно объяснить миграцией этих клеток в очаг воспаления — эндометрий. Все обследованные группы характеризовались высокой спонтанной продукцией ростового фактора — интерлейкина-2, необходимого не только для пролиферации Т-, В-лимфоцитов, но и естественных киллерных клеток, что наряду с высокой спонтанной продукцией провоспалительных цитокинов ФНО-α и ИНФ-γ и высоким уровнем этих цитокинов в сыворотке подтверждает пути. Увеличенная продукция исследованных цитокинов может явиться одной из причин нарушения развития эмбриона и прерывания беременности.

По некоторым данным [11] на цитотоксическую функцию эндометриальных лимфоцитов также оказывает влияние ИЛ-4, высокое содержание в сыворотке и повышенная спонтанная продукция которого наблюдались во всех исследуемых группах. Повышенная спонтанная продукция ИЛ-4 и его высокий уровень в сыворотке отражает также активность гуморального иммунного ответа, что подтверждается повышенным уровнем секреторного иммуноглобулина А. Высокое содержание ЦИКн, характеризующихся тропностью к эндотелию, свидетельствует о возможном вовлечении в воспалительный процесс мелких сосудов и капилляров и способствует выраженности остроты процесса. Выявленные нарушения показателей местного (повышенное количество лимфоцитов, экспрессирующих CD56+++CD16++) и системного иммунитета (снижение CD8+, CD16+, повышение имммунорегуляторного индекса, увеличенное содержание в сыворотке ЦИКн, высокая продукция ИЛ-2, ФНО-α и ИНФ-γ) у пациенток 3 группы были расценены нами как аутоиммунное воспаление. Проведенное комплексное исследование параметров местного и системного иммунитета у женщин с нарушением репродуктивной функции позволило уточнить иммунопатогенез хронических эндометритов, подтвердить его при сомнительном гистологическом диагнозе (наличие только лимфолейкоцитарной инфильтрации или фиброзе строме) и выявить группу пациенток с аутоиммунным характером воспаления. Уточнение иммунопатогенеза хронических эндометритов позволяет обосновать и применять в дальнейшем иммунокоррегирующую терапию.