Immunological characteristics of acute urogenital monochlamydiosis
- 作者: Bugrova O.G.1, Kira E.F.1, Savitcheva A.M.1
-
隶属关系:
- Russian Military Medical Academy
- 期: 卷 48, 编号 4 (1999)
- 页面: 21-25
- 栏目: Original Research
- ##submission.dateSubmitted##: 15.11.1999
- ##submission.datePublished##: 15.11.1999
- URL: https://journals.eco-vector.com/jowd/article/view/88845
- DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD88845
- ID: 88845
如何引用文章
全文:
详细
The article stresses that the use of two modem methods: luminescent and lactincytochemical has helped to understand the receptor expression for bionic amines, catecholamines and pectines, that depicts the functional potential of mucous and immune cells in urogenital chlamydiosis.
全文:
В многочисленных работах [2, 3, 7, 8, 13] показано, что С. trachomatis способны индуцировать различные изменения в иммунном ответе. Большое внимание при урогенитальном хламидиозе уделяется состоянию факторов неспецифической защиты организма, и в частности — функции нейтрофилов. Нейтрофилы рассматриваются как иммуноэффекторные клетки, главная функция которых - антимикробная. Несомненно степень сбалансированности различных звеньев и компонентов иммунной системы является наиболее важным диагностическим и прогностическим признаком при урогенитальном хламидиозе и может быть использована в качестве контроля за эффективностью проводимого лечения.
Материалы и методы
Иммунологический анализ нами был проведен у 117 (30,4%) женщин и 17(19,1%) мужчин, у которых методами ПИФ и ПЦР выявлены С. trachomatis. Средний возраст больных составил - 23,6±1,2 года. Диагноз подтверждался определением специфических противохламидийных антител класса A (IgA), G (IgG) и М (IgM), нарушение уровня которых является маркером инфекционно-воспалительного хламидийного процесса.
Результаты исследования
При варианте острого течения урогенитального хламидиоза, установленном у 41 (35%) женщины и 17 обследованных мужчин, у всех обнаружено повышение уровня специфических антихламидийных IgA и IgM в сыворотке крови.
Второй вариант хронического течения, установленный у 76 (64,9%) женщин, характеризовался повышенным уровнем специфических IgG, но не IgA и IgM в сыворотке крови.
Весь объем комплексного клинико-лабораторного и иммунологического исследования при различных вариантах течения монохламидийной инфекции — остром и хроническом - проводился в сравнении с показателями 34 здоровых женщин - посетительниц кабинета медицинских осмотров, профилактических медицинских осмотров, средний возраст которых составил - 21,2±0,6 лет.
Оценка состояния гуморального иммунитета.
Результаты изучения состояния В-звена иммунитета, выраженные абсолютным и относительным содержанием В-лимфоцитов у обследуемых больных, свидетельствуют об определенной его активации, и его показатели были равны соответственно 12,08±1,03% и 0,21±0,04 х 109/л, против - 11,01±2,8% и 0,24±0,03 х 109/л у здоровых женщин (р<0,05). Далее у этих женщин (29 из 41) провели определение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови. Результаты исследования представлены в табл. 2.
Таблица 1. Сравнительная характеристика гематологических показателей при монохламидийной инфекции
Монохламидиоз | Hb | Лейкоциты 109/л | Пал., % | Сегм., % | Э., % | Лимф., % | Моно., % | СОЭ, мм/час |
Острый | 140±3,9 | 7,6±0,8 | 3,1±0,6 | 58±5,5 | 5,0±0,8 | 24,1±2,8 | 5,0±0,6 | 7,3±1,8 |
Хронический | 142±4,0 | 7,1±1,1 | 3,4±0,7 | 53±3,9 | 4,7±0,6 | 20,1±2,0 | 5,4±0,1 | 8,2±2,5 |
Таблица 2. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови женщин с монохламидийной инфекцией
Число обследованных | Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови больных | |||||
IgM, г/л | IgA, г/л | IgG, г/л | ||||
0,7 - 1,4 | 1,5 - 3,0 | 0,7 - 0,2 | 2,1 - 4,5 | 7,6 - 12,3 | 12,6 - 20 | |
n=29 | 4 | 5 | 6 | 7 | 4 | 3 |
Как видно из табл. 2, у большинства обследованных обнаружено увеличенное содержание IgM и IgA, но не IgG. По-видимому, умеренное, но не достоверное повышение продукции В-лимфоцитов сопровождается определенным увеличением концентрации иммуноглобулинов, в частности IgA. Полученные результаты документировали правильность выделения в рабочей классификации урогенитального хламидиоза варианта острого течения моноинфекции, и, как будет показано ниже, эти же показатели были отличны у лиц, отнесенных в группу (вариант) с хроническим течением моноинфекции.
Оценка состояния клеточного иммунитета проводилась согласно методике Р.В. Петрова и соавт. [12] у 29 пациентов варианта моноинфекции с острым течением.
При обследовании 29 пациенток с моноинфекцией обнаружено достоверное снижение как относительного, так и абсолютного количества Т-лимфоцитов (соответственно 42,8±7,2% и 3,14±8,1 х 109/л) по сравнению со здоровыми женщинами (48,15±4,2% и 3,81±2,3 х 109/л). Содержание субпопуляций Т-клеток, несущих поверхностные антигены СДЗ+, СД4+, СД8+, СД16+, и иммунорегуляторный индекс (ИРИ) - отношение СД4+/СД8+ представлены в табл. 3.
Как видно из показателей, представленных в табл. 3, при моноинфекции отмечено умеренное снижение незрелых лимфоцитов (СДЗ+), Т-хелперных (СД4+) и Т-супрессорно-цитотоксических (СД8+) регуляторных субпопуляций лимфоцитов. В то же время не установлено нарушений их соотношения (СД4+/СД8+), если не считать тенденцию к незначительному увеличению коэффициента СД4+/СД8+ по процентному содержанию клеток (1,12+0,8) в сравнении со здоровыми женщинами (0,9±0,4; р<0,05).
Таблица 3. Функциональная активность фагоцитов периферической крови больных с монохламидийной инфекцией
Показатель | Здоровые, n=34 |
| Больные МХИ |
|
женщины, n=41 | мужчины, n = 17 | среднее число | ||
Фагоцитарный показатель, % | 67,1±3,8 | 58,02±4,1 | 57,3±6,1 | 57,7±5,1 |
Фагоцитарное число, % | 4,8±1,4 | 6,15±2,1 | 5,8±4,3 | 5,9±3,2 |
Фагоцитарный индекс | 3,2±0,05 | 3,5±0,08 | 3,3±0,2 | 3,4±1,4 |
HCT-тест: положительные клетки, % | 80,61±1,6 | 72,04±5,6 | 74,1±6,2 | 73,07±5,9 |
Цитохимический показатель | 0,86±0,04 | 0,78±0,68 | 0,69±0,01 | 0,71±0,3 |
Обращает на себя внимание факт снижения (табл. 3) уровня СД16+ (NK-клеток или больших гранулярных лимфоцитов), совпадающий по времени (исследование Т-лимфоцитов, NK-клеток и иммуноглобулинов проводилось в одно и то же время) с развитием повышенного уровня иммуноглобулинов IgM и IgA (табл. 2). Интересно, что супрессорный NK-клеточный эффект может включаться лимфокинами [1], образующимися при активации В-лимфоцитарного механизма иммунитета. Показано, что гранулоциты периферической крови также подавляют активность NK-клеток, что связывают [11] с выделением ими устойчивого к нагреванию ингибитора протеаз. При недостатке NK-клеток и низкой их функциональной активности эти клетки не способствовали ликвидации инфекции на ранних стадиях и далее наступала ее генерализация с развитием лихорадки [1].
Состояние факторов неспецифической защиты при моноинфекции.
Фагоцитарная активность нейтрофилов исследована у 41 женщины и 17 мужчин. Оценивали следующие показатели фагоцитоза: фагоцитарный индекс, фагоцитарное число, фагоцитарный показатель, тест НСТ.
Исследование изменений в системе клеточного и гуморального звеньев неспецифической защиты у лиц с моноинфекцией показало достоверное снижение фагоцитарной функции нейтрофилов. Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов представлены в табл. 3.
Как представлено в табл. 3, процент нейтрофилов, вступивших в фагоцитоз, хотя и имел тенденцию к снижению, но достоверно не отличался от данных контрольной группы (57,7±5,1 % и 67,1±3,9% соответственно). Полученные данные у женщин и мужчин сходны (58,02±4,1 % - у женщин и 57,32±6,1 % - у мужчин). Представляется возможным утверждать, что у больных моноинфекцией с острым течением способность нейтрофилов к поглощению чужеродных веществ сохранена. Более того, интегральный фагоцитарный индекс даже несколько повышался и превышал показатели у здоровых (3,4±1,4 и 3,2±0,05 соответственно). Связано это с заметным повышением фагоцитарного числа, т.е. среднего числа частиц латекса, поглощенных фагоцитированной клеткой, которое (у женщин и мужчин) превышало таковое у здоровых (4,4±1,4 и 3,2±0,05 соответственно).
Представленные особенности подтвердились и в НСТ-тесте (табл. 3). Спонтанное восстановление НСТ, как известно, свидетельствует о «метаболическом взрыве», возникающем в нейтрофиле в связи с фагоцитозом. У обследованных нами больных с моноинфекцией этого не наблюдалось. Количество диформазон-положительных клеток было несколько снижено в сравнении с группой контроля (73,07±5,9 и 80,61±1,6 соответственно). Поскольку HCT-тест позволяет характеризовать ферментные системы, а интенсивность восстановления НСТ отражает энергетические процессы, обеспечивающие появление биоокислителей с бактерицидным действием (перекись водорода, супероксидный анион-радикал, синглентный кислород, гидроксильный радикал), полученные результаты вычисления среднего цитохимического коэффициента реакции незначительно отличаются от результатов, полученных у здоровых (0,73±0,3 и 0,86±0,04 соответственно), что свидетельствует о слабом или неадекватном «метаболическом взрыве» нейтрофилов пациентов с моноинфекцией. Полученные данные документируют отсутствие или слабо выраженный завершенный фагоцитоз. По-видимому, это и обусловливает активность монохламидийной инфекции.
Следовательно, у больных моноинфекцией бактерицидная функция нейтрофилов недостаточна, т.е. речь должна идти о необходимости повышения активности неспецифических факторов защиты или оптимизации методов терапии моноинфекции.
Оценка интерферонового статуса при моноинфекции.
В связи с большой ролью цитокинов в развитии урогенитального хламидиоза и, в частности, ролью интерферонов (ИФН), обладающих не только противовоспалительным, но и иммуномодулирующим действием, в данном разделе работы предпринято изучение ИФН-статуса у больных с моноинфекцией (у 20 женщин и 5 мужчин).
ИНФ-статус устанавливали, исследуя следующие параметры: уровень суммарного ИФН в крови, а также а- и ß-типов ИФН, способность лейкоцитов крови больных продуцировать a-, ß- и у- типы ИФН in vitro под воздействием циклоферона.
Интерфероновый статус определяли микрометодом С.С. Григоряна и Ф.И. Ершова [4] в цельной гепаринизированной крови.
В контрольной группе (здоровые женщины - 5) показатели ИФН в сыворотке составили 10,5±1,1 ЕД/мл, способность к образованию а- и ß- ИФН - 48,6±3,9 ЕД/мл, у-ИФН - 18,0±2,1 ЕД/мл. Показатели интерферонового статуса у пациентов с моноинфекцией представлены в табл. 4.
Таблица 4. Показатели ИФН-статуса у больных моноинфекцией (ЕД/мл)
Всего обследованных | Способность к образованию ИФН | Сывороточный ИФН | ||
α - и β - ИНФ | γ - ИНФ | α - и β - ИНФ | γ - ИНФ | |
здоровые, n=5 | 48,6±3,9 | 18,0±2,1 | 10,5±1,1 | 0 |
монохламидиоз, n=25 | 40,7±2,1 | 14,3±1,2 | 11,2±1,1 | 14,3±1,2 |
Как видно из табл. 4 уровень сывороточного ИФН (а- и ß- ИФН - 11,2±1,0, а у-ИФН - 14,3±1,2) выше, чем в группе контроля (у-ИФН-0), что убедительно указывает на наличие в организме пациентов острого инфекционного процесса - моноинфекции. Полученные данные вполне совпадают с результатами других исследователей [4, 9, 15].
Поскольку вирусы более чувствительны к действию ИФН (особенно у-ИФН), чем бактерии, то у пациентов с высоким уровнем ИФН в крови развитие вирусных инфекций могло подавляться (или они могли переходить в латентную форму), поэтому хламидийный процесс выявлялся как моноинфекция. Об этом же свидетельствуют результаты изучения интерферонового статуса больных с урогенитальным хламидиозом, проведенного Н.Г. Логиновой и соавт. [9].
Итак, для пациентов с моноинфекцией характерны повышенные уровни сывороточного ИФН и спонтанной продукции ИФН лейкоцитами, что свидетельствует об остроте протекания инфекционного процесса.
Состояние местною иммунитета у больных с урогенитальным хламидиозом.
Как и в других системах организма, сообщающихся с внешней средой, местная иммунная система урогенитального тракта обусловлена его анатомо-физиологическими особенностями, наличием нормальной микрофлоры, специфическими и неспецифическими факторами. Урогенитальный тракт не только является местом реализации иммунологических процессов, но и активно участвует в них, выполняя одновременно роль органа иммуногенеза.
Проведено иммунологическое исследование влагалищных выделений у 11 больных с острым течением монохламидийной инфекции. Забор материала проводили в позднюю фолликулиновую фазу менструального цикла. В полученном материале определяли уровень иммуноглобулинов – sIgA, IgА, IgM, IgG по Манчини [6].
У здоровых женщих (контрольная группа - 5) концентрация иммуноглобулинов в отделяемом полового тракта в несколько раз меньше, чем в сыворотке крови. В отделяемом вагины средняя концентрация IgG колебалась в пределах 0,06 - 0,28 мг/мл, IgА - 0,06-0,1, мг/мл, IgM - не более 0,01 мг/мл (в группе контроля соответственно - IgG - 0,07 мг/мл, IgА - 0,02 мг/мл, IgM -0). Эти данные коррелируют с аналогичными результатами, полученными другими исследователями, 1, 14].
Люминисцентно-цитохимическое выявление биогенных аминов при урогенитальном хламидиозе.
Характеристика местного иммунитета нами была дополнена люминесцентно-цитохимическим исследованием содержания биогенных аминов (серотонин, гистамин) и катехоламинов (адреналин, норадреналин) в цилиндрическом эпителии цервикального канала, а для сравнения - в эпителии полости рта (буккальном эпителии) и иммунокомпетентных клетках периферической крови. Исследование проведено у 11 женщин с урогенитальным хламидиозом.
Использован метод Фалька - Хилларпа с ортофталевым альдегидом [6]. Препараты просматривались в люминесцентном микроскопе МЛ-2 и фотографировались на пленку РФ-3.
В результате исследования у больных с урогенитальным хламидиозом была обнаружена довольно сходная картина топографии биогенных аминов на буккальном и цервикальном эпителиях. Однонаправленность экспрессии рецепторов для биогенных аминов на слизистых оболочках - весьма интересное явление. Обнаружено цитоплазматическое и цитомембранное гнездное и гомогенное свечение биогенных аминов (серотонин, гистамин). Среди эпителиальных клеток полости рта и цервикального канала обнаруживались макрофаги и нейтрофилы с яркой специфической люминесценцией. В целом же эпителиальное содержание биогенных аминов не характерно, и, в основном, это были макрофаги. Мембранофиксированные мелкогранулярные скопления биогенных аминов желто-зеленого цвета - нередкий цитохимический признак воспалительного процесса в организме. На исследованном материале определена топография рецепторов для биогенных аминов на слизистых оболочках.
Обнаружено явление сопряженной экспрессии рецепторов для биогенных аминов и следов катехоламинов на эпителии и макрофагах двух слизистых оболочек. Дальнейшее изучение этого явления чрезвычайно перспективно, т.к. открываются возможности установления нарушений медиаторного обмена в системе местного иммунитета, а также диагностические возможности установления иммунных и иммуно-медиаторных дисфункций при местных воспалительных процессах, в частности при урогенитальном хламидиозе.
Результаты исследования мембранно-рецепторных изменений оказались настолько интересны, что мы расширили задачу. Проведено исследование экспрессии рецепторов для пектинов на клетках слизистых оболочек и крови. Мы учитывали современные представления о фенотипе иммунокомпетентных и эпителиальных клеток, который определяется мембранными и цитоплазматическими гликосоединениями, Эти углеводные соединения (пектины) биологически активны и выполняют регуляторную и гормональную роль [10]. Их участие в местном иммунитете заключается в экспрессии рецепторов на цитомембранах различных клеток и внутриклеточной передаче сигнала.
Для целей дифференцировки углеводсодержащих биополимеров и рецепторов к ним на лимфоцитах, моноцитах периферической крови и клетках слизистых оболочек (буккального и урогенитального эпителиев) нами использованы лектины НПО «Лектин-тест». В работе применены пектины арахиса (PNA, специфичный к D-галактозе), лектин зародышей пшеницы (WGA, специфичный к N-ацетил-В-глюкозамину и сиаловой кислоте), лектин коры бобовника анагиролистного (LAA, специфичный к L-фукозе), а также лектин сои (SDA, специфичный к К-ацетил-В-галактозамину). Клетки обрабатывали мечеными пероксидазой хрена пектинами по обычным гистохимическим методикам с диаминобензидином-тетрагидрохлоридом.
Лектино-цитохимическое исследование периферической крови, буккального и урогенитального эпителиев проводилось у 9 клинически здоровых женщин и 24 больных урогенитальным хламидиозом. В результате исследования установлена топография рецепторов для пектинов PNA на лимфоцитах и фиксация на моноцитах-макрофагах для PNA и LAA. Лектиногистохимическим методом показана неоднородность буккального и урогенитального эпителиев, которые обычно маркировались PNA и WGA, реже - SDA.
Активированные Т- и В-лимфоциты фиксировали PNA и WGA. Клетки с фагоцитарной активностью всей цитомембраны накапливали PNA. На высоте инфекции лектины выявлялись редко, что свидетельствует об отсутствии экспрессии рецепторов. Высокое содержание пектинов PNA, SDA и LAA отмечалось постоянно на клетках эпителия слизистых оболочек как урогенитального тракта, так и буккального эпителия.
Заключение
Таким образом, использование двух современных методов - люминесцентного и лектиноцитохимического - позволило представить топографию экспрессии рецепторов для биогенных аминов, катехоламинов и пектинов (углеводных соединений), что отражает функциональные потенции клеток слизистых оболочек и клеток иммунной системы при урогенитальном хламидиозе.
作者简介
O. Bugrova
Russian Military Medical Academy
编辑信件的主要联系方式.
Email: info@eco-vector.com
俄罗斯联邦, St. Petersburg
E. Kira
Russian Military Medical Academy
Email: info@eco-vector.com
俄罗斯联邦, St. Petersburg
A. Savitcheva
Russian Military Medical Academy
Email: info@eco-vector.com
俄罗斯联邦, St. Petersburg
参考
补充文件
![](/img/style/loading.gif)