Immunological characteristics of acute urogenital monochlamydiosis

Full Text

В многочисленных работах [2, 3, 7, 8, 13] показано, что С. trachomatis способны индуцировать различные изменения в иммунном ответе. Большое внимание при урогенитальном хламидиозе уделяется состоянию факторов неспецифической защиты организма, и в частности — функции нейтрофилов. Нейтрофилы рассматриваются как иммуноэффекторные клетки, главная функция которых - антимикробная. Несомненно степень сбалансированности различных звеньев и компонентов иммунной системы является наиболее важным диагностическим и прогностическим признаком при урогенитальном хламидиозе и может быть использована в качестве контроля за эффективностью проводимого лечения.

Материалы и методы

Иммунологический анализ нами был проведен у 117 (30,4%) женщин и 17(19,1%) мужчин, у которых методами ПИФ и ПЦР выявлены С. trachomatis. Средний возраст больных составил - 23,6±1,2 года. Диагноз подтверждался определением специфических противохламидийных антител класса A (IgA), G (IgG) и М (IgM), нарушение уровня которых является маркером инфекционно-воспалительного хламидийного процесса.

Результаты исследования

При варианте острого течения урогенитального хламидиоза, установленном у 41 (35%) женщины и 17 обследованных мужчин, у всех обнаружено повышение уровня специфических антихламидийных IgA и IgM в сыворотке крови.

Второй вариант хронического течения, установленный у 76 (64,9%) женщин, характеризовался повышенным уровнем специфических IgG, но не IgA и IgM в сыворотке крови.

Весь объем комплексного клинико-лабораторного и иммунологического исследования при различных вариантах течения монохламидийной инфекции — остром и хроническом - проводился в сравнении с показателями 34 здоровых женщин - посетительниц кабинета медицинских осмотров, профилактических медицинских осмотров, средний возраст которых составил - 21,2±0,6 лет.

Оценка состояния гуморального иммунитета.

Результаты изучения состояния В-звена иммунитета, выраженные абсолютным и относительным содержанием В-лимфоцитов у обследуемых больных, свидетельствуют об определенной его активации, и его показатели были равны соответственно 12,08±1,03% и 0,21±0,04 х 10⁹/л, против - 11,01±2,8% и 0,24±0,03 х 10⁹/л у здоровых женщин (р<0,05). Далее у этих женщин (29 из 41) провели определение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови. Результаты исследования представлены в табл. 2.

 

Таблица 1. Сравнительная характеристика гематологических показателей при монохламидийной инфекции

 

Монохламидиоз	Hb	Лейкоциты 109/л	Пал., %	Сегм., %	Э., %	Лимф., %	Моно., %	СОЭ, мм/час
Острый	140±3,9	7,6±0,8	3,1±0,6	58±5,5	5,0±0,8	24,1±2,8	5,0±0,6	7,3±1,8
Хронический	142±4,0	7,1±1,1	3,4±0,7	53±3,9	4,7±0,6	20,1±2,0	5,4±0,1	8,2±2,5

 

Таблица 2. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови женщин с монохламидийной инфекцией

 

Число обследованных	Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови больных
	IgM, г/л		IgA, г/л		IgG, г/л
	0,7 - 1,4	1,5 - 3,0	0,7 - 0,2	2,1 - 4,5	7,6 - 12,3	12,6 - 20
n=29	4	5	6	7	4	3

 

Как видно из табл. 2, у большинства обследованных обнаружено увеличенное содержание IgM и IgA, но не IgG. По-видимому, умеренное, но не достоверное повышение продукции В-лимфоцитов сопровождается определенным увеличением концентрации иммуноглобулинов, в частности IgA. Полученные результаты документировали правильность выделения в рабочей классификации урогенитального хламидиоза варианта острого течения моноинфекции, и, как будет показано ниже, эти же показатели были отличны у лиц, отнесенных в группу (вариант) с хроническим течением моноинфекции.

Оценка состояния клеточного иммунитета проводилась согласно методике Р.В. Петрова и соавт. [12] у 29 пациентов варианта моноинфекции с острым течением.

При обследовании 29 пациенток с моноинфекцией обнаружено достоверное снижение как относительного, так и абсолютного количества Т-лимфоцитов (соответственно 42,8±7,2% и 3,14±8,1 х 10⁹/л) по сравнению со здоровыми женщинами (48,15±4,2% и 3,81±2,3 х 10⁹/л). Содержание субпопуляций Т-клеток, несущих поверхностные антигены СДЗ+, СД4+, СД8+, СД16+, и иммунорегуляторный индекс (ИРИ) - отношение СД4+/СД8+ представлены в табл. 3.

Как видно из показателей, представленных в табл. 3, при моноинфекции отмечено умеренное снижение незрелых лимфоцитов (СДЗ+), Т-хелперных (СД4+) и Т-супрессорно-цитотоксических (СД8+) регуляторных субпопуляций лимфоцитов. В то же время не установлено нарушений их соотношения (СД4+/СД8+), если не считать тенденцию к незначительному увеличению коэффициента СД4+/СД8+ по процентному содержанию клеток (1,12+0,8) в сравнении со здоровыми женщинами (0,9±0,4; р<0,05).

 

Таблица 3. Функциональная активность фагоцитов периферической крови больных с монохламидийной инфекцией

 

Показатель	Здоровые, n=34		Больные МХИ
		женщины, n=41	мужчины, n = 17	среднее число
Фагоцитарный показатель, %	67,1±3,8	58,02±4,1	57,3±6,1	57,7±5,1
Фагоцитарное число, %	4,8±1,4	6,15±2,1	5,8±4,3	5,9±3,2
Фагоцитарный индекс	3,2±0,05	3,5±0,08	3,3±0,2	3,4±1,4
HCT-тест: положительные клетки, %	80,61±1,6	72,04±5,6	74,1±6,2	73,07±5,9
Цитохимический показатель	0,86±0,04	0,78±0,68	0,69±0,01	0,71±0,3

 

Обращает на себя внимание факт снижения (табл. 3) уровня СД16+ (NK-клеток или больших гранулярных лимфоцитов), совпадающий по времени (исследование Т-лимфоцитов, NK-клеток и иммуноглобулинов проводилось в одно и то же время) с развитием повышенного уровня иммуноглобулинов IgM и IgA (табл. 2). Интересно, что супрессорный NK-клеточный эффект может включаться лимфокинами [1], образующимися при активации В-лимфоцитарного механизма иммунитета. Показано, что гранулоциты периферической крови также подавляют активность NK-клеток, что связывают [11] с выделением ими устойчивого к нагреванию ингибитора протеаз. При недостатке NK-клеток и низкой их функциональной активности эти клетки не способствовали ликвидации инфекции на ранних стадиях и далее наступала ее генерализация с развитием лихорадки [1].

Состояние факторов неспецифической защиты при моноинфекции.

Фагоцитарная активность нейтрофилов исследована у 41 женщины и 17 мужчин. Оценивали следующие показатели фагоцитоза: фагоцитарный индекс, фагоцитарное число, фагоцитарный показатель, тест НСТ.

Исследование изменений в системе клеточного и гуморального звеньев неспецифической защиты у лиц с моноинфекцией показало достоверное снижение фагоцитарной функции нейтрофилов. Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов представлены в табл. 3.

Как представлено в табл. 3, процент нейтрофилов, вступивших в фагоцитоз, хотя и имел тенденцию к снижению, но достоверно не отличался от данных контрольной группы (57,7±5,1 % и 67,1±3,9% соответственно). Полученные данные у женщин и мужчин сходны (58,02±4,1 % - у женщин и 57,32±6,1 % - у мужчин). Представляется возможным утверждать, что у больных моноинфекцией с острым течением способность нейтрофилов к поглощению чужеродных веществ сохранена. Более того, интегральный фагоцитарный индекс даже несколько повышался и превышал показатели у здоровых (3,4±1,4 и 3,2±0,05 соответственно). Связано это с заметным повышением фагоцитарного числа, т.е. среднего числа частиц латекса, поглощенных фагоцитированной клеткой, которое (у женщин и мужчин) превышало таковое у здоровых (4,4±1,4 и 3,2±0,05 соответственно).

Представленные особенности подтвердились и в НСТ-тесте (табл. 3). Спонтанное восстановление НСТ, как известно, свидетельствует о «метаболическом взрыве», возникающем в нейтрофиле в связи с фагоцитозом. У обследованных нами больных с моноинфекцией этого не наблюдалось. Количество диформазон-положительных клеток было несколько снижено в сравнении с группой контроля (73,07±5,9 и 80,61±1,6 соответственно). Поскольку HCT-тест позволяет характеризовать ферментные системы, а интенсивность восстановления НСТ отражает энергетические процессы, обеспечивающие появление биоокислителей с бактерицидным действием (перекись водорода, супероксидный анион-радикал, синглентный кислород, гидроксильный радикал), полученные результаты вычисления среднего цитохимического коэффициента реакции незначительно отличаются от результатов, полученных у здоровых (0,73±0,3 и 0,86±0,04 соответственно), что свидетельствует о слабом или неадекватном «метаболическом взрыве» нейтрофилов пациентов с моноинфекцией. Полученные данные документируют отсутствие или слабо выраженный завершенный фагоцитоз. По-видимому, это и обусловливает активность монохламидийной инфекции.

Следовательно, у больных моноинфекцией бактерицидная функция нейтрофилов недостаточна, т.е. речь должна идти о необходимости повышения активности неспецифических факторов защиты или оптимизации методов терапии моноинфекции.

Оценка интерферонового статуса при моноинфекции.

В связи с большой ролью цитокинов в развитии урогенитального хламидиоза и, в частности, ролью интерферонов (ИФН), обладающих не только противовоспалительным, но и иммуномодулирующим действием, в данном разделе работы предпринято изучение ИФН-статуса у больных с моноинфекцией (у 20 женщин и 5 мужчин).

ИНФ-статус устанавливали, исследуя следующие параметры: уровень суммарного ИФН в крови, а также а- и ß-типов ИФН, способность лейкоцитов крови больных продуцировать a-, ß- и у- типы ИФН in vitro под воздействием циклоферона.

Интерфероновый статус определяли микрометодом С.С. Григоряна и Ф.И. Ершова [4] в цельной гепаринизированной крови.

В контрольной группе (здоровые женщины - 5) показатели ИФН в сыворотке составили 10,5±1,1 ЕД/мл, способность к образованию а- и ß- ИФН - 48,6±3,9 ЕД/мл, у-ИФН - 18,0±2,1 ЕД/мл. Показатели интерферонового статуса у пациентов с моноинфекцией представлены в табл. 4.

 

Таблица 4. Показатели ИФН-статуса у больных моноинфекцией (ЕД/мл)

 

Всего обследованных	Способность к образованию ИФН		Сывороточный ИФН
	α - и β - ИНФ	γ - ИНФ	α - и β - ИНФ	γ - ИНФ
здоровые, n=5	48,6±3,9	18,0±2,1	10,5±1,1	0
монохламидиоз, n=25	40,7±2,1	14,3±1,2	11,2±1,1	14,3±1,2

 

Как видно из табл. 4 уровень сывороточного ИФН (а- и ß- ИФН - 11,2±1,0, а у-ИФН - 14,3±1,2) выше, чем в группе контроля (у-ИФН-0), что убедительно указывает на наличие в организме пациентов острого инфекционного процесса - моноинфекции. Полученные данные вполне совпадают с результатами других исследователей [4, 9, 15].

Поскольку вирусы более чувствительны к действию ИФН (особенно у-ИФН), чем бактерии, то у пациентов с высоким уровнем ИФН в крови развитие вирусных инфекций могло подавляться (или они могли переходить в латентную форму), поэтому хламидийный процесс выявлялся как моноинфекция. Об этом же свидетельствуют результаты изучения интерферонового статуса больных с урогенитальным хламидиозом, проведенного Н.Г. Логиновой и соавт. [9].

Итак, для пациентов с моноинфекцией характерны повышенные уровни сывороточного ИФН и спонтанной продукции ИФН лейкоцитами, что свидетельствует об остроте протекания инфекционного процесса.

Состояние местною иммунитета у больных с урогенитальным хламидиозом.

Как и в других системах организма, сообщающихся с внешней средой, местная иммунная система урогенитального тракта обусловлена его анатомо-физиологическими особенностями, наличием нормальной микрофлоры, специфическими и неспецифическими факторами. Урогенитальный тракт не только является местом реализации иммунологических процессов, но и активно участвует в них, выполняя одновременно роль органа иммуногенеза.

Проведено иммунологическое исследование влагалищных выделений у 11 больных с острым течением монохламидийной инфекции. Забор материала проводили в позднюю фолликулиновую фазу менструального цикла. В полученном материале определяли уровень иммуноглобулинов – sIgA, IgА, IgM, IgG по Манчини [6].

У здоровых женщих (контрольная группа - 5) концентрация иммуноглобулинов в отделяемом полового тракта в несколько раз меньше, чем в сыворотке крови. В отделяемом вагины средняя концентрация IgG колебалась в пределах 0,06 - 0,28 мг/мл, IgА - 0,06-0,1, мг/мл, IgM - не более 0,01 мг/мл (в группе контроля соответственно - IgG - 0,07 мг/мл, IgА - 0,02 мг/мл, IgM -0). Эти данные коррелируют с аналогичными результатами, полученными другими исследователями, 1, 14].

Люминисцентно-цитохимическое выявление биогенных аминов при урогенитальном хламидиозе.

Характеристика местного иммунитета нами была дополнена люминесцентно-цитохимическим исследованием содержания биогенных аминов (серотонин, гистамин) и катехоламинов (адреналин, норадреналин) в цилиндрическом эпителии цервикального канала, а для сравнения - в эпителии полости рта (буккальном эпителии) и иммунокомпетентных клетках периферической крови. Исследование проведено у 11 женщин с урогенитальным хламидиозом.

Использован метод Фалька - Хилларпа с ортофталевым альдегидом [6]. Препараты просматривались в люминесцентном микроскопе МЛ-2 и фотографировались на пленку РФ-3.

В результате исследования у больных с урогенитальным хламидиозом была обнаружена довольно сходная картина топографии биогенных аминов на буккальном и цервикальном эпителиях. Однонаправленность экспрессии рецепторов для биогенных аминов на слизистых оболочках - весьма интересное явление. Обнаружено цитоплазматическое и цитомембранное гнездное и гомогенное свечение биогенных аминов (серотонин, гистамин). Среди эпителиальных клеток полости рта и цервикального канала обнаруживались макрофаги и нейтрофилы с яркой специфической люминесценцией. В целом же эпителиальное содержание биогенных аминов не характерно, и, в основном, это были макрофаги. Мембранофиксированные мелкогранулярные скопления биогенных аминов желто-зеленого цвета - нередкий цитохимический признак воспалительного процесса в организме. На исследованном материале определена топография рецепторов для биогенных аминов на слизистых оболочках.

Обнаружено явление сопряженной экспрессии рецепторов для биогенных аминов и следов катехоламинов на эпителии и макрофагах двух слизистых оболочек. Дальнейшее изучение этого явления чрезвычайно перспективно, т.к. открываются возможности установления нарушений медиаторного обмена в системе местного иммунитета, а также диагностические возможности установления иммунных и иммуно-медиаторных дисфункций при местных воспалительных процессах, в частности при урогенитальном хламидиозе.

Результаты исследования мембранно-рецепторных изменений оказались настолько интересны, что мы расширили задачу. Проведено исследование экспрессии рецепторов для пектинов на клетках слизистых оболочек и крови. Мы учитывали современные представления о фенотипе иммунокомпетентных и эпителиальных клеток, который определяется мембранными и цитоплазматическими гликосоединениями, Эти углеводные соединения (пектины) биологически активны и выполняют регуляторную и гормональную роль [10]. Их участие в местном иммунитете заключается в экспрессии рецепторов на цитомембранах различных клеток и внутриклеточной передаче сигнала.

Для целей дифференцировки углеводсодержащих биополимеров и рецепторов к ним на лимфоцитах, моноцитах периферической крови и клетках слизистых оболочек (буккального и урогенитального эпителиев) нами использованы лектины НПО «Лектин-тест». В работе применены пектины арахиса (PNA, специфичный к D-галактозе), лектин зародышей пшеницы (WGA, специфичный к N-ацетил-В-глюкозамину и сиаловой кислоте), лектин коры бобовника анагиролистного (LAA, специфичный к L-фукозе), а также лектин сои (SDA, специфичный к К-ацетил-В-галактозамину). Клетки обрабатывали мечеными пероксидазой хрена пектинами по обычным гистохимическим методикам с диаминобензидином-тетрагидрохлоридом.

Лектино-цитохимическое исследование периферической крови, буккального и урогенитального эпителиев проводилось у 9 клинически здоровых женщин и 24 больных урогенитальным хламидиозом. В результате исследования установлена топография рецепторов для пектинов PNA на лимфоцитах и фиксация на моноцитах-макрофагах для PNA и LAA. Лектиногистохимическим методом показана неоднородность буккального и урогенитального эпителиев, которые обычно маркировались PNA и WGA, реже - SDA.

Активированные Т- и В-лимфоциты фиксировали PNA и WGA. Клетки с фагоцитарной активностью всей цитомембраны накапливали PNA. На высоте инфекции лектины выявлялись редко, что свидетельствует об отсутствии экспрессии рецепторов. Высокое содержание пектинов PNA, SDA и LAA отмечалось постоянно на клетках эпителия слизистых оболочек как урогенитального тракта, так и буккального эпителия.

Заключение

Таким образом, использование двух современных методов - люминесцентного и лектиноцитохимического - позволило представить топографию экспрессии рецепторов для биогенных аминов, катехоламинов и пектинов (углеводных соединений), что отражает функциональные потенции клеток слизистых оболочек и клеток иммунной системы при урогенитальном хламидиозе.

About the authors

O. G. Bugrova

Russian Military Medical Academy

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, St. Petersburg

E. F. Kira

Russian Military Medical Academy

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, St. Petersburg

A. M. Savitcheva

Russian Military Medical Academy

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, St. Petersburg

References

Supplementary files