Cytokine production by peripheral blood lymphocytes in patients with ovarian epithelial tumors
- 作者: Pavlov R.V.1, Aksenenko V.A.1, Krivoruchko A.Y.1, Pavlenko N.A.1
-
隶属关系:
- Stavropol State Medical Academy
- 期: 卷 50, 编号 1 (2001)
- 页面: 37-40
- 栏目: Scientific activity
- ##submission.dateSubmitted##: 24.11.2021
- ##submission.dateAccepted##: 24.11.2021
- ##submission.datePublished##: 30.12.2021
- URL: https://journals.eco-vector.com/jowd/article/view/89004
- DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD89004
- ID: 89004
如何引用文章
全文:
详细
In presence of autoserum, production of IL1b, IL2, IL4, IL6 and TNFa by peripheral blood lymphocytes of 30 patients with epithelial tumors of ovaries and 50 patients with epithelial ovarian cancer of I-IV stages was investigated. The data received enable to ascertain the increase of mononuclear activity during ovarian tumor progression, increase of T-helpers of the second type activity, along with the reduction of T-helpers of the first type activity in peripheral blood of patients, and abnormalities of IL6-dependent mechanism of control of ILIb and TNFa production by peripheral blood lymphocytes of patients with ovarian cancer.
全文:
В последнее десятилетие отмечается рост заболеваемости эпителиальных опухолей яичников (ЭОЯ), в связи с чем вопросы профилактики, ранней диагностики и эффективности лечения данного заболевания являются весьма актуальными.
Одним из наиболее перспективных направлений современной онкологии является изучение роли иммунной системы в патогенезе опухолей и возможности применения иммунологических методов для их диагностики и лечения. Иммунология канцерогенеза активно изучается на протяжении последних 20 лет. Получены данные, подтверждающие роль иммунной системы в противоопухолевой защите организма, изучаются механизмы, ведущие к деструкции клеток новообразования, а также механизмы феномена иммунологической толерантности клеток опухоли. Особое значение в реализации противоопухолевого иммунитета в настоящее время уделяется цитокинам-биологически активным веществам, продуцируемым иммунокомпетентными клетками и опосредующим все реакции иммунитета, в том числе противоопухолевого [2, 4].
Несмотря на активное изучение роли отдельных цитокинов в реализации противоопухолевого иммунитета, а также возможности применения их в диагностике и лечении опухолей разной локализации, особенности цитокинового обмена у больных ЭОЯ изучены недостаточно. Имеющиеся литературные данные относительно обмена цитокинов у больных ЭОЯ немногочисленны и противоречивы, что диктует необходимость дальнейшего изучения этой проблемы [3, 5, 7, 8, 9].
Цель исследования
Целью исследования стало изучение продукции лимфоцитами периферической крови (ЛИК) больных опухолями яичников отдельных цитокинов: интерлейкина-1 р (ИЛ 1/3) и фактора некроза опухоли а (ФИОа) как цитокинов, обладающих цитотоксической активностью в отношении клеток опухоли; интерлейкина-2 (ИЛ2) и интерлейкина-4 (ИЛ4) как цитокинов, опосредующих клеточную реакцию Т-лимфоцитов по 1 или 2 типу; интерлейкина-6 (ИЛ6) как цитокина, замыкающего воспалительную реакцию и являющегося антагонистом ИЛ1/3 и ФНОа.
Методы исследования
Были изучены особенности спонтанной и стимулированной продукции цитокинов ЛПК больных ЭОЯ, находившихся на лечении в Ставропольском краевом онкологическом диспансере в период с 1998 по 1999 гг.
Всего было обследовано 80 больных опухолями яичников. Контрольную группу составили 30 здоровых женщин.
После клинического обследования, проведения УЗИ, КТГ и гистологического исследования образцов удаленных опухолей все больные женщины были распределены на 3 группы: 30 больных доброкачественными эпителиальными опухолями яичников (ДЭОЯ), 20 больных эпителиальным раком яичников I-II стадии (ЭРЯ I-II) и 30 пациенток с эпителиальным раком яичников III-IV стадии (ЭРЯ III-IV).
Выделение ЛПК осуществлялось на градиенте плотности Ficoll-Paque (р= 1,077 г/мл), производства "Pharmacya Fine" Chemicals» (Швеция), по методу описанному Воуит (1968) [6].
Таблица 1. Спонтанная и стимулированная продукция ИЛ1/3 и ФНО ЛПК больных ЭОЯ
Группы | ИЛ 1/3, пкг/мл | ФНОа, пкг/мл | ||
пациенток | Спонтанная, (М+т) | Стимулированная, (М±т) | Спонтанная, (М±т) | Стимулированная, (М±т) |
Здоровые, п=30 | 47,5+4,1 | 578,4±60,3 # | 58,8+2,9 | 981,8+90,9 # |
ДЭОЯ, п=30 | 617,5±88,0 * | 1556,0±205,4 * # | 1056,0±72,3 * | 2228±203,5 * # |
ЭРЯ I-II, п=20 | 699,3+54,7 * | 1500,0+112,5 * # | 1114,0+78,2* | 2267±157,8*# |
ЭРЯ III-IV, п=30 | 1506,0+174,2 ** | 2270,0+175,9 ** # | 1804,0+170,1** | 2872+117,5** # |
* -различиямежду больными ЭОЯи здоровыми женщинами (р<0,05);
* * -различия между больными ЭРЯи больными ДЭОЯ (р<0,05);
# -различиямежду спонтанной и стимулированной продукцией цитокинов ЛПК (р<0,05)
Культивирование ЛПК с целью моделирования условий in vivo проводили по методике, предложенной Н.М. Бережной и соавт. (1993) [ 1] Для этого к клеточной суспензии, содержащей ЛПК в конечной концентрации 2x106 /мл среды 199, добавляли 10% аутосыворотки обследованных женщин и 40 мкг/мл гентамицина. Для оценки стимулированной продукции цитокинов в полученные клеточные суспензии добавляли по 20 мкг/мл фитогемагглютинина (ФГА) производства «ПанЭко» (Россия). Клеточные суспензии инкубировали в течение 24 часов при 37°С и 100% влажности в атмосфере 5% СО2. После истечения срока культивирования супернатанты очищали центрифугированием при 800 g в течение 30мин, собирали в стерильные пластиковые пробирки типа «Эппендорф» и хранили до тестирования при -30 °C не более 6 мес.
Уровень цитокинов в культуральных средах определялся методом твердофазового иммуноферментного анализа (ИФА) на планшетном фотометре «Labsystems iEMS Reader MF» (Швеция) с помощью наборов реагентов ТОО «Протеиновый контур» (Россия). По данным титрования стандартных образцов строились калибровочные графики для каждого из цитокинов, по которым в исследуемых образцах определялась концентрация ИЛ1Д ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6 и ФНОа.
Статистическая обработка данных проводилась на компьютере PENTIUM 300 с использованием программы «Primer Biostatistic 4.03». Для всех показателей, полученных у женщин основной и контрольной группы, определялись средние значения (М), а также стандартная ошибка среднего (т). Для оценки достоверности различий между значениями использовался простой критерий Стьюдента. Различия между показателями считались достоверными при р<0,05.
Результаты исследования
По нашим данным (табл. 1), спонтанная и стимулированная продукция ИЛ1/3 и ФНОа лимфоцитами всех больных опухолями яичников вне зависимости от степени их злокачественности и распространения опухолевого процесса выше, чем у здоровых женщин. Увеличение продукции этих цитокинов прогрессирует с распространением рака яичников, вследствие чего лимфоциты больных ЭРЯ III-IV стадии продуцируют большее количество ИЛ1Д и ФНОа, чем лимфоциты больных доброкачественными опухолями.
В ответ на стимуляцию ФГА мононуклеарные клетки здоровых женщин увеличивают продукцию ИЛ1Д 12,3 раза и ФНОа в 17 раз, у больных опухолями яичников продукция этих цитокинов в ответ на стимуляцию возрастает всего в 1,5-2 раза.
Полученные данные относительно продукции ИЛ 1/3 и ФНОа ЛПК больных ЭОЯ соответствуют данным литературы и убедительно подтверждают факт повышенной исходной цитотоксической активности мононуклеарных клеток у этих больных. Снижение способности мононуклеаров отвечать повышением продукции ИЛ1/3 и ФНОа связано с достижением максимальной активности этих клеток, при которой их дальнейшая активация невозможна.
При изучении продукции выделенными из периферической крови лимфоцитами интерлейкина-2 и интерлейкина-4 (табл. 2) нами установлено достоверное снижение спонтанной и стимулированной продукции ИЛ2 только у больных раком яичников по сравнению со здоровыми женщинами и больными доброкачественными опухолями. Лимфоциты больных ДЭОЯ продуцируют такое же количество ИЛ2, что и лимфоциты здоровых женщин.
Таблица 2. Спонтанная и стимулированная продукция ИЛ2 и ИЛ4 ЛПК больных ЭОЯ
Группы пациенток | ИЛ2, МЕ/мл | ИЛ4 | пкг/мл | |
Спонтанная, (М+т) | Стимулированная, (М+т) | Спонтанная, (М+т) | Стимулированная, (М+т) | |
Здоровые, (п=30) | 110,2+0,9 | 116,1 ±0,7# | 25,7+1,0 | 33,7+1,9# |
ДЭОЯ, (п=30) | 110,6+1,0 | 115,6+0,4# | 37,9+3,6 * | 53,7+5,4 * # |
ЭРЯ1-П, (п=20) | 105,5+1,3 ** | 113,2+0,5 ** # | 42,4+4,5 * | 52,5+5,2 * # |
ЭРЯШ-IV, (п=30) | 104,2 ±1,4 ** | 113,1+0,3**# | 62,4+5,2 ** | 85,9+8,8**# |
* -различия между больными ЭОЯ и здоровыми женщинами (р<0,05);
* * -различия между больными ЭРЯи больными ДЭОЯ (р<0,05);
# -различия между спонтанной и стимулированной продукцией цитокинов ЛПК (р<0,05)
Таблица 3. Спонтанная и стимулированная продукция ИЛ6 ЛПК больных ЭОЯ
Группы пациенток | ИЛ6, пкг/мл | |
Спонтанная (М+т) | Стимулированная (М+т) | |
Здоровые, (п=30) | 5409+534 | 14880+142# |
ДЭОЯ, (п=30) | 14030+233 * | 15070+149 |
ЭРЯ1-П, (п=20) | 15360+209 * | 14600+172# |
ЭРЯШ-IV, (п=30) | 15630+152 * | 14700+147# |
* -различия между больными ЭОЯ и здоровыми женщинами (р<0,05);
* * -различия между больными ЭРЯи больными ДЭОЯ (р<0,05);
# -различия между спонтанной и стимулированной продукцией цитокинов ЛПК (р<0,05)
В отличие от ИЛ2, продукция ИЛ4 возрастает с прогрессированием опухолевого процесса. При этом ЛПК всех больных опухолями яичников вне зависимости от их злокачественности и степени распространения продуцируют больше ИЛ4, чем ЛПК здоровых женщин, а лимфоциты больных раком продуцируют больше ИЛ4, чем лимфоциты больных доброкачественными опухолями яичников.
Лимфоциты больных ЭОЯ сохраняют способность отвечать увеличением продукции ИЛ2 и ИЛ4 на стимуляцию ФГА, что свидетельствует о сохраненных резервных возможностях противоопухолевой активности Т-лимфоцитов у этих больных.
Снижение продукции ИЛ2 и повышение концентрации ИЛ4 у больных опухолями яичников в процессе прогрессирования опухоли позволяет предположить наличие иммунной перестройки, которая проявляется в преимущественной активации Т-хелперов 2 типа, за дифференцировку которых отвечает ИЛ4 [2, 4].
По нашим данным (табл. 3), спонтанная продукция ИЛ6 лимфоцитами больных ЭОЯ выше, чем у здоровых женщин, вне зависимости от степени злокачественности и распространенности опухоли. В отличие от базальной, стимулированная продукция ИЛ6 больных опухолями яичников не отличается от таковой у здоровых женщин.
При сравнении спонтанной и стимулированной продукции ИЛ6 ЛПК больных ЭОЯ нами установлено, что, в отличие от лимфоцитов здоровых женщин, которые отвечают повышением продукции ИЛ6 на стимуляцию ФГА, лимфоциты больных ДЭОЯ не реагируют на неспецифическую иммуностимуляцию повышением продукции ИЛ6, а лимфоциты больных ЭРЯ в ответ на стимуляцию ФГА снижают продукцию этого интерлейкина.
Подобная парадоксальная реакция лимфоцитов больных опухолями яичников в отношении продукции ИЛ6 может быть объяснена достижением максимальной активности клеток, продуцирующих ИЛ6, и истощением их компенсаторных возможностей.
Выводы
1. Мононуклеарные клетки периферической крови больных ЭОЯ находятся в состоянии повышенной активации, которая прогрессирует с распространением опухолевого процесса
2. Снижение интенсивности иммунного ответа мононуклеаров периферической крови больных ЭОЯ в ответ на неспецифическую иммуностимуляцию свидетельствует об истощении потенциала активации этих клеток.
3. На фоне повышенной продукции ИЛ 1/3 и ФНОа резко выраженная декомпенсация резервных возможностей ЛПК больных ЭОЯ, продуцирующих ИЛ6, указывает на гиперпродукцию цитокинов, обладающих противоопухолевой цитотоксичностью, и на нарушение механизмов, регулирующих их синтез.
4. Снижение у больных ЭОЯ иммунного ответа мононуклеаров периферической крови в ответ на стимуляцию и нарушение защитных механизмов, контролирующих продукцию ИЛ 1/3 и ФНОа, делает сомнительной эффективность неспецифической иммунотерапии этих больных.
5. Снижение продукции ИЛ2 и повышение продукции ИЛ4 ЛПК больных ЭОЯ свидетельствует о нарушении активности Т-клеточных реакций 1 типа у этих больных и делает применение рекомбинантных препаратов ИЛ2 методом выбора в противоопухолевой терапии ЭОЯ.
作者简介
R. Pavlov
Stavropol State Medical Academy
Email: info@eco-vector.com
俄罗斯联邦
V. Aksenenko
Stavropol State Medical Academy
Email: info@eco-vector.com
俄罗斯联邦
A. Krivoruchko
Stavropol State Medical Academy
Email: info@eco-vector.com
俄罗斯联邦
N. Pavlenko
Stavropol State Medical Academy
编辑信件的主要联系方式.
Email: info@eco-vector.com
俄罗斯联邦
参考
补充文件
![](/img/style/loading.gif)