Squamous cell carcinoma of the mucous floor of the mount and tongue associated with the Epstein-Barr virus and human papillomavirus

全文:

В настоящее время большое внимание уделяется вирусассоциированному онкогенезу, т. к. более чем в 15% случаев этиологическими агентами новообразований являются вирусы. Среди последних наиболее изучены вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) и вирус папилломы человека (ВПЧ), способствующих трансформации клеток, например, плоского эпителия шейки матки (ВПЧ), клеток лимфоидного ряда (ВЭБ), которые рассматриваются как этиологические факторы рака шейки матки и лимфомы Беркита. Описана роль ВЭБ и ВПЧ при раке орофарингеальной зоны. Цель исследования заключалась в оценке инфицированности ВЭБ и ВПЧ больных раком слизистой оболочки дна полости рта и языка и особенностей его течения. Обследованы 100 больных раком данных анатомических областей, в т. ч. без метастазов - 36, с метастазами - 34, с рецидивами - 30. Из 36 больных без метастазов 10 имели II стадию (T2N0M0), 12 - III (T3N0M0), 14 - IV (T4N0M0). Из 34 больных с метастазами 19 были с III стадией (T2N1M0 - 7, T3N1M0 - 12), 15 - c IV (T3N2M0 - 6, T4N1M0 - 9). Материалом для молекулярно-биологических исследований служили фиксированные в формалине и залитые в парафин ткани опухоли (FFPE ткани). Депарафинизацию проводили по стандартной методике с использованием ксилола и этанола 96°. Экстракцию вирусной ДНК из ткани опухоли проводили методом сорбции на колонках с применением коммерческого набора реагентов «QIAamp DNA FFPE Tissue Kit» (QIAGEN, Германия). Детекция ДНК и определение генотипа ВПЧ высокого (ВКР) и низкого (НКР) канцерогенного риска, вирусов группы герпеса проводили методом мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени» на термоциклере Rotor Gene 6000 (QIAGEN, Германия). Во всех тест-системах в качестве эндогенного внутреннего контроля был использован участок ДНК гена b-глобина, что позволило оценить качество исследованных образцов. При расчете вирусной нагрузки проводили нормализацию показателей на 100000 копий гена b-глобина. При исследовании парафиновых блоков 100 больных генетический материал ВПЧ был обнаружен в 36% случаев. ВПЧ ВКР обнаруживался в 2 раза чаще, чем ВПЧ НКР. Чаще других ткани опухоли были инфицированы 16 и 11 типами (соответственно 50 и 25% общего числа опухолей, инфицированных ВПЧ). ВПЧ 6 типа выявлен в трех случаях (8,33% инфицированных ВПЧ), 11 типа - в девяти (25%), ВПЧ 16 типа присутствовал самостоятельно в 18 исследуемых образцах (50% инфицированных ВПЧ больных) и в сочетании с ВПЧ 35 типа - в трех случаях (8,33%). ВПЧ 35 типа в виде моноинфекции также был выявлен в трех случаях (8,33%). Частота инфицирования ВПЧ НКР у пациентов без метастазов была выше (25±7,2%), чем ВПЧ ВКР (16,7 ±6,2%), в 1,5 раза, а у пациентов с метастазами, наоборот, ВПЧ ВКР встречался в 4 раза чаще, чем ВПЧ НКР - 35,3±8,2 и 8,8± 4,9% соответственно. У больных с рецидивами встречался только ВПЧ ВКР - 20±7,3% (рис. 1). В образцах тканей опухолей больных без метастазов из ВПЧ ВКР встречался только 16 тип, тогда как у пациентов с метастазами и рецидивами - 16, 35 и 16+35 типы. Из ВПЧ НКР в ткани опухоли у больных без метастазов был обнаружен только 11 генотип, а у пациентов с метастазами - только 6 генотип. Статистически значимые различия (p=0,0026) были выявлены при сравнении ВПЧ НКР 11 типа у больных без регионарных метастазов (25±7,2%) и с метастазами (0%). Рецидивные опухоли достоверно реже (р=0,0001) были инфицированы ВПЧ у ВПЧ-позитивных (20±7,3%), чем у ВПЧ-негативных (80±7,3%) больных. У ВПЧ-позитивных больных чаще встречался высокодифференцированный рак (G1) - 52,77±8,3% (в большей степени характерно для ВПЧ ВКР - 19,44±6,6%), тогда как у ВПЧ-негативных достоверно чаще (р=0,005) встречался умеренно дифференцированный (67,19±5,9%) по сравнению с высокодифференцированным (32,19±5,9%). Низкая степень дифференцировки (G3) не выявлена. ВПЧ НКР преобладали при размере опухоли менее 2 см (27,8±7,5% образцов), при размере 2-4 см - обнаруживались только в 5,56±3,8% случаев. ВПЧ ВКР определялись в опухолях более крупных размеров, причем тем чаще, чем большего размера были опухоли. Таким образом, с увеличением распространенности опухоли установлен рост частоты инфицирования ВПЧ ВКР (р=0,0039), и наоборот, для ВПЧ НКР с увеличением размера процесса его выявление достоверно снижается (р=0,001). Изучение зависимости исходов заболевания от частоты инфицирования ткани опухоли показало, что среди ВПЧ-позитивных доля умерших (25±7,2%) была в 3 раза меньше доли живых (75±7,2%, р=0,0001), что характерно как для ВПЧ НКР, так и для ВПЧ ВКР. Среди неинфицированных ВПЧ количество умерших и живых больных было в равных долях - по 50±6,3%. Среди умерших (n=41) количество инфицированных ВПЧ (n=9, 21,95±6,5%) было достоверно меньше (p=0,0001), чем ВПЧ-негативных (n=32, 78,05±6,5%). Частота инфицирования ткани опухоли ВЭБ при исследовании парафиновых блоков составила 60%. ВЭБ встречался реже в группе больных без метастазов (44,44±6,4%), чем у пациентов с метастазами (70,58±5,9%, р=0,031). У пациентов с ВЭБ умеренная степень дифференцировки рака встречалась в 2 раза чаще высокой - соответственно 66,67±6,1 и 33,33±6,1% (р=0,0004), тогда как у ВЭБ-негативных пациентов эти показатели были равны - 50±7,9%. Опухоли с низкой степенью дифференцировки не выявлены. Доля умерших инфицированных ВЭБ больных (48,33±6,5%) меньше доли живых (51,67±6,5%), но различия статистически не значимы. У ВЭБ-негативных доля умерших оказалась в 2,3 раза меньше доли живых - 30±7,2 и 70±7,2% соответственно (р=0,0006). Таким образом, инфицирование ткани опухоли ВПЧ, как ВКР, так и НКР, установлено у 36% больных, при этом между больными без метастазов, с регионарными метастазами и рецидивами различия не выявлены. Выявляемость ВПЧ ВКР (24%) в 2 раза превысила показатель ВПЧ НКР (12%). У пациентов без регионарных метастазов ВПЧ НКР встречался в 1,5 раза чаще, чем ВПЧ ВКР, а у больных с метастазами в 4 раза чаще встречался ВПЧ ВКР. При оценке биологических свойств опухоли, с которыми может быть связано присутствие или отсутствие в них ВПЧ, было установлено, что ВПЧ ВКР встречался в равных долях в опухолях с высокой и умеренной степенью дифференцировки, при этом чаще выявлены распространенные опухоли. ВПЧ НКР чаще встречался при опухолях высокой степени дифференцировки и меньшей распространенности. У ВПЧ-позитивных был отмечен высокий уровень выживаемости - 75±7,2%. Несмотря на то что полученные данные указывают на рост частоты инфицирования ВПЧ, при увеличении распространенности опухолевого процесса выживаемость этих больных остается высокой. Это можно объяснить индукцией противоопухолевого иммунитета и повышением чувствительности опухоли к химио- и радиотерапии у ВПЧ-позитивных больных. Инфицированность тканей опухолей ВЭБ отмечена у 60% больных, при этом ее рост был связан с увеличением размера опухоли. ВЭБ встречался чаще у пациентов с регионарными метастазами - 70,58±5,9%. У ВЭБ-позитивных больных преобладала умеренная степень дифференцировки опухоли.

作者简介

S. Papko

V. Kokoev

V. Panov

O. Volgushev

A. Korol’kov

G. Nistratov

Email: hyppokrat-g@mail.ru

A. Kabanov

参考

补充文件