The detection of viral hepatitis B markers in blood donors in military units

Full Text

Вирусный гепатит В (ВГВ) характеризуется высоким уровнем заболеваемости, трудностями ранней диагностики, дорогостоящим лечением и неблагоприятными исходами. Одним из источников заражения вирусом гепатита В могут быть клинически бессимптомные носители антигена HBsAg. Эти лица представляют эпидемическую опасность для окружающих, особенно при его наличии в крови. Несмотря на принимаемые меры безопасности, сохраняется риск передачи возбудителей ВГВ с донорской кровью из-за ограниченного перечня декретированных маркёров, применения тест-систем с недостаточно высокой чувствительностью, наличия серонегативного окна, не позволяющего выявлять «свежие» случаи инфицирования, формирования атипичного серологического профиля и др. В Российской Федерации тестирование донорской крови на маркёры гемотрансфузионных инфекций регламентируется приказом Минздрава России № 364 от 2001 г., в котором декретировано проведение исследования на наличие сифилиса, поверхностного антигена ВГВ (HBsAg), антител к вирусу гепатита С, вирусу иммунодефицита человека тип 1, 2. Накопленные в последние годы данные свидетельствуют, что ДНК ВГВ в низких концентрациях продолжает определяться в сыворотке крови и ткани печени у некоторых больных с недетектируемым общепринятыми лабораторными методами уровнем HBsAg в крови. Наличие таких данных привело к возникновению понятия так называемой «оккультной (occult), молчащей (silent), латентной (latent)» инфекции ВГВ, или скрытого гепатита В (СГВ). Поскольку получение ДНК ВГВ из печени в клинической практике затруднено, предложено определять СГВ как инфекцию, характеризуемую выявлением ДНК ВГВ методом ПЦР или другими молекулярно-биологическими методами у HBsAg-негативных лиц. Это определение СГВ наиболее часто используют в клинической практике. Целью настоящего исследования явилось выявление в крови доноров воинских частей маркёров инфицирования ВГВ и оценка распространенности среди них скрытых форм инфекции. Проведено исследование 746 образцов сывороток доноров, сдававших кровь в воинских частях для центра крови Главного военного клинического госпиталя им. Н.Н.Бурденко за период 2013-2015 гг. Регистрацию и учет поступающих образцов крови выполняли при помощи автоматизированной лабораторной информационной системы ЗАО НПО «Алтей» (Москва). Хранение биологического материала до его исследования осуществляли при температуре 60 °С в специальных криопробирках. Для исследования применяли тест-системы отечественного и импортного производства. HBsAg определяли методом иммуноферментного анализа набором реагентов «Гепастрип В» с последующим подтверждением позитивных образцов в тест-системе «Гепаблок» (НПО «Ниармедик», Россия). Тестирование сывороток крови на наличие серологических маркёров ВГВ (анти-HBs, анти-НВс, анти-HBe) проводили с использованием коммерческих тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Россия), «Architect» («Abbott Diagnostics», США). Исследования на маркёры ВГВ производились на автоматическом анализаторе TRITURUS (Diagnostic Grifols, S.A., Испания). СГВ у HBsAg-негативных лиц и вирусную нагрузку определяли методом количественной ПЦР в реальном времени с помощью тест-системы «РеалБест ДНК-ВГВ» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия) на приборе CFX-96 (Bio-Rad, США). Тестирование выполняли согласно требованиям Международной организации по стандартизации (ISO) и Стандартных операционных процедур (SOP). Для анализа и статистической обработки полученных результатов использовали общепринятые методы статистики. Доля обследованных лиц, отведенных от донорства вследствие выявления у них HBsAg, составила 0,54% (4 человека из 746), что соответствует среднероссийским показателям. Остальные 742 HBsAg-негативных образца сывороток крови были исследованы на наличие маркёров ВГВ дополнительными иммунологическими и молекулярно-биологическими методами. Результаты исследования показали, что у доноров в 56,9% случаев отсутствовали маркёры ВГВ. Антитела к HBsAg (анти-HBs), при отсутствии других серологических маркёров, были выявлены у 217 человек (29,2%), вакцинированных против ВГВ. Наличие анти-HBs в сочетании с анти-HBc у 56 доноров (7,6%) может быть свидетельством ранее перенесенного ВГВ (см. таблицу). Из 742 образцов, полученных от доноров крови, негативных по HBsAg, в 47 (6,3%) случаях обнаружены анти-НВс-IgG. Данные антитела рассматриваются как суррогатный маркёр СГВ, особенно при гемотрансфузиях, трансплантации органов или иммуносупрессивной терапии. Однако присутствие изолированных анти-HBc не всегда сопровождается наличием ДНК ВГВ, и наоборот, их отсутствие не исключает скрытой инфекции. В нашем исследовании в 2 (4,2%) из 47 образцов была выявлена ДНК ВГВ, указывающая на наличие СГВ. Таким образом, ДНК ВГВ в крови доноров, негативных по HВsAg, составила 0,27% (2 из 742 образцов). Проблема СГВ актуальна в связи с тем, что лица со скрытой инфекцией могут быть источником заражения реципиентов при гемотрансфузии с последующим развитием ВГВ. Подобная ситуация может возникнуть, если донор находится в периоде «серологического окна» (HBsAg-, виремия, ранняя острая фаза ВГВ-инфекции). Кроме того, донор может оказаться «носителем вируса дикого типа в формате СГВ», т. е. с подавлением репликационной активности и экспрессии генов. В этом случае скрытая ВГВ-инфекция характеризуется периодами транзиторной виремии, чередующейся с периодами, когда вирусная ДНК не обнаруживается в крови. Считается, что наибольшую эпидемическую опасность представляют доноры, позитивные по ДНК ВГВ с наличием анти-HBc как единственного серологического маркёра («изолированные» анти-HBc). Вероятность возникновения ВГВ зависит от уровня вирусной нагрузки, перелитого компонента крови, иммунокомпетентности пациента и серологического статуса (присутствие/отсутствие анти-HBc и/или анти-HBs) как у донора, так и реципиента. Результаты проведенного исследования подтверждают необходимость внедрения молекулярно-биологических методов исследования для повышения уровня инфекционной безопасности при использовании компонентов крови доноров.

About the authors

T. A Semenenko

Email: semenenko@gamaleya.org

V. G Akimkin

A. D Onufrievich

V. I Volotskaya

S. V Skvortsov

L. V Yarosh

O. G Nikolaeva

References

Supplementary files