Experience of use of human leukocyte interferon in remittent course of multiple sclerosis

Full Text

Рассеянный склероз (PC) как самое распространенное демиелинизирующее заболевание ЦНС остается предметом пристального изучения исследователей различных областей науки — вирусологии, иммунологии, нейрохимии и неврологии. Это связано с отсутствием знаний об этиологии PC, первопричинах, вызывающих демиелинизацию, а также со сложностью биохимических и иммунопатологических процессов, имеющих место при этом заболевании. Определенная генетическая несостоятельность иммунной системы при PC, сочетание активации одних звеньев иммунитета с явной супрессией других обусловливают и сложность терапевтической коррекции иммунопатологических нарушений при PC. Известные методы иммуносупрессивной терапии (цитостатики, глюкокортикоиды, плазмаферез) эффективны у 70—80% больных в стадии обострения, однако стабилизировать процесс и предотвратить последующую экзацербацию не удается [2]. Более того, иммуносупрессивная терапия практически неэффективна при прогредиентном течении PC. В связи с этим исследование роли цитокинов в патогенезе PC и иммунокоррекция цитокиновых нарушений препаратами интерферона являются огромным достижением последнего десятилетия [1, 5, 10].

Цитокины, представляющие собой растворимые полипептидные молекулы, играют особую роль в ЦНС как в эмбриогенезе, так и в зрелой нервной ткани. Реализация Т-клеточного иммунного ответа — одна из основных функций цитокинов. Среди наиболее изученных выделяют провоспалительные — фактор некроза опухоли-ос (ФНО), интерферон-γ (ИФН-γ), интерлейкин-1 α и β (ИЛ-1), интерлейкин-2 (ИЛ-2), интерлейкин-6 (ИЛ-6). К иммуномодулирующим, способным тормозить иммунопатологические реакции в ЦНС, относятся интерфероны а и ß (ИФН-α и ИФН-ß), интерлейкин-4 (ИЛ-4), интерлейкин-10 (ИЛ-10) и трансформирующий ростковый фактор ß (ТРФ) [7, 9].

Содержание цитокинов при PC определено различными исследователями в крови и ликворе прижизненных биоптатах мозга и на аутопсийном материале. Итогом этих работ является представление о ФНО-α, ИЛ-1 и ИФН-γ как об основных факторах активации и прогрессирования демиелинизирующего процесса при PC. Достоверно высокий уровень ФНО-α  зарегистрирован в крови и ликворе у больных PC в стадии экзацербации и при грубом неврологическом дефиците [11]. Неуклонно прогрессирующее течение при PC связывают с прямым цитотоксическим действием ФНО-α на олигодендроцит и индукцией апоптоза этих клеток при PC. В активных бляшках при PC выявлено высокое содержание ФНО-α, который экспрессируется макрофагами, микроглией и астроцитами [12].

Повреждающее действие ФНО-α также связано с индукцией экспрессии молекул адгезии, соответственно с нарушением проницаемости ГЭБ и активации NOS (синтазы окиси азота) микроглией и астроцитами и образованием NO и других свободнорадикальных соединений (пероксинитрит) [3].

Содержание ИФН-γ в биологических жидкостях больных практически не регистрируется, так как он является коротко живущим соединением, однако клетки крови и ликвора продуцируют повышенное содержание ИФН-γ, особенно при обострении PC. ИФН-γ регулирует экспрессию молекул МНС класса II, активирует макрофаги, усиливает экспрессию адгезивных молекул. Содержание ИЛ-1 повышено при PC на всех стадиях процесса, особенно в экзацербацию. ИЛ-1 активирует астроциты и усиливает экспрессию ими ФНО-α и ИЛ-6, а также NOS. Меньшая роль отводится ИЛ-2 и ИЛ-6.

Иммуномодулирующие цитокины, обладающие защитным действием, ФНО-α и ß, ИЛ-10 и ТРФ-ß экспрессируются клетками крови и ликвора при PC на всех стадиях демиелинизирующего процесса, но в большей степени у больных при ремиссии с мягким доброкачественным течением PC, при минимальном неврологическом дефиците [6]. Защитное действие этих цитокинов связано с подавлением секреции ИФН-γ и ФНО-α, активацией натуральных киллеров и в меньшей степени Т-супрессоров.

В связи с имеющимися нарушениями цитокинового обмена разрабатываются различные терапевтические подходы к их коррекции, направленные на увеличение содержания защитных цитокинов (препараты ИФН-α и ß) либо на подавление активности провоспалительных цитокинов с использованием антител против ИФН-γ, ФНО-α, ИЛ-1 или растворимых рецепторов к ним, способных связывать их в биологических жидкостях, а также природный агонист ИЛ-1, рецепторы и антитела против молекул адгезии [4, 8]. Любое из этих направлений кажется перспективным и внушает оптимизм для клиницистов, занимающихся проблемой PC.

Целью нашей работы являлось изучение цитокиновых нарушений у больных с ремиттирующим течением PC и оценка эффективности длительного приема препарата человеческого лейкоцитарного интерферона (ЧЛИ) у этих больных.

Нами были обследованы 77 больных (мужчин — 33, женщин 44) с ремиттирующим течением PC. Больные были в возрасте от 16 до 53 лет (средний возраст — 28,5 года). Длительность заболевания колебалась от 6 месяцев до 30 лет (в среднем 5,7 года). Контрольную группу составили 50 здоровых доноров. На момент обследования у 55 больных была стадия обострения, у 22 — ремиссия. Длительность обострения колебалась от 3 дней до 2 месяцев, ремиссии — от 6 месяцев до 5 лет. У всех больных состояние системы ИФН-α и ИФН-ß определяли по уровню продукции лейкоцитами, выделенными из периферической крови и индуцированными 5 ТЦД50 ВБН (ИФН-α или 10 мкг/мл ФГА-Р (ИФН-γ, ФНО-α). Активность ИФН-α и ИФН-γ определяли в культуре человеческих диплоидных клеток М-19 по задержке цитопатического действия вируса везикулярного стоматита, взятого в дозе 100 ТЦД50. Активность ФНО-α определяли в культуре мышиных фибробластов L-929 по цитотоксическому действию в присутствии актиномицина Д.

При изучении уровня индуцированной активности ИФН-α, ИФН-γ и ФНО-α в крови больных выявлены достоверные различия при обострении и ремиссии: соответственно ИФН-α — 301,0±22,0 и 378,0±45,0 ед. (Р<0,05), ИФН-γ — 43,3±3,8 и 29,0±3,4 ед. (Р<0,01), ФНО-α — 40,4±5,0 и 19,3±6,1 ед. (Р<0,01). Обострение характеризовалось повышением ИФН-γ и ФНО-α с одновременным снижением ИФН-α, что соответствует современным представлениям об участии цитокинов в формировании активного патологического процесса при PC. Низкий уровень ИФН-α способствует усилению продукции ИФН-γ и дальнейшему развитию аутоиммунной агрессии в ЦНС.

Возможность коррекции цитокиновых нарушений в результате длительного использования ЧАИ являлась предметом нашего исследования. В исследуемую группу вошли 58 больных с ремиттирующим течением заболевания, получавших ЧАИ в течение 3 лет (1994—1997 гг.), из них 42 пациента начали лечиться в стадии обострения, 16 — в стадии ремиссии.

ЧАИ — смесь природных ИФН-α, синтезирован в культуре лейкоцитов донорской крови, индуцированных вирусом болезни Нью- кастла, сконцентрирован и очищен химическими иммуноабсорбционными методами до удельной активности 1 млн. ME на мг белка. Препарат разработан в НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи. Курс лечения состоял из двух этапов — интенсивного и поддерживающего.

В 1994—1995 гг. все больные получали интенсивный курс —10 млн. ME в месяц, затем поддерживающую терапию — 1—2 млн. ME в месяц. Начиная с 1996 г. дозы были значительно увеличены: при интенсивном курсе до 28—36 млн. ME в месяц и поддерживающем до 4—16 млн. ME в зависимости от степени неврологического дефицита. Повторные интенсивные курсы проводились каждые 6—12 месяцев. Эффективность препарата оценивали по результатам динамического клинического наблюдения с оценкой неврологического статуса по шкале Куртцке (Expanded Disability Status Scale, EDSS) каждые 6 месяцев. Однако интервалы между обследованиями могли сокращаться в случае развития обострений у наблюдаемых больных. Кроме того, о препарате судили по данным динамического комплексного иммунологического обследования, которое вклю- 60

чало изучение цитокинового профиля (спонтанной и индуцированной активности ИФН-α, ИФН-γ и ФНО-α) по методу, описанному выше, и исследование клеточного звена иммунитета (общего числа лейкоцитов, лимфоцитов, CD3+-клеток, их субпопуляций Т-хелперов или CD4 + , Т-супрессоров или СВ8 + , натуральных киллеров (NK) или CD16 + ) методом стандартных тестов, рекомендованным ВОЗ (1987) и проблемной комиссией М3 РФ.

Анализ динамики неврологического дефицита у больных показал достоверное его снижение в целом по группе с 3,13 баллов до 1,75. У 42 больных, начавших лечение ЧАИ в стадии обострения, неврологический дефицит снизился с 3,3 до 1,9 баллов. У 16 больных в стадии ремиссии средняя степень неврологического дефицита составляла 2,7 балла до лечения и 1,4 балла после лечения.

Больные были разделены на две группы: в первую вошли 38 пациентов со стойкой полной или неполной ремиссией на фоне лечения ЧАИ, во вторую — 20 больных, у которых на фоне лечения были отмечены периоды обострения. Анализ иммунологических показателей у больных первой группы выявил достоверное снижение активности ИФН-ГГ и ФНО-α у больных как при полной ремиссией, так и при неполной. Так, при полной ремиссии до лечения активность ИФН-γ была рав на 41,0±4,0, после лечения — 25,0±2,0 (Р<0,001), ФНО-α — соответственно 42,0±8,0 и 2,О±1,0 (Р<0,001), при неполной ремиссии до лечения активность ИФН-γ составляла 47,0±6,0, после лечения — 27,0±2,0 (Р<0,01), ФНО-α — со ответственно 60,0±22,0 и 2,0±1,0 (Р<0,001). По другим показателям достоверных различий не получено.

У 20 больных (вторая группа) на фоне приема ЧАИ наблюдались периоды экзацербаций с частотой 1,8 в год, что было достоверно ниже, чем у этих же больных до начала лечения ЧАИ, когда частота обострений составляла 2,7 в год. При анализе условий развития обострений у больных на фоне лечения были отмечены следующие тенденции: обострение развивалось либо через 2—3 месяца после перехода на низкие поддерживающие дозы препарата (1—2 млн. ME в месяц), либо при самопроизвольной отмене препарата.

Вновь развившиеся обострения были купированы у 17 больных проведением курса общеукрепляющей терапии и увеличением дозы ЧАИ до 30 млн. ME в течение месяца с переходом в последующем на поддерживающие дозы от 4 до 16 млн. ME. У 3 больных острое развитие грубой неврологической симптоматики явилось основанием для проведения пульс- терапии солю-медролом. Анализ предыдущей терапии обострений у 20 больных показал, что за последние 2 года до начала лечения ЧАИ 10 больных получали глюкокортикоиды, что свидетельствовало об эффективности больших доз ЧАИ в периоде экзацербации.

Анализ иммунологических показателей у больных этой группы выявил определенную коррекцию цитокиновых нарушений: у 10 больных с полной ремиссией отмечено достоверное повышение активности ИФН-α (208,0±30,0 и 400,0±65,0 ед.; Р<0,01) и снижение активности ФНО-α (45,0±1,0 и 4,0±2,0; Р<0,001). Однако уменьшение абсолютного числа CD-8- клеток (534,0±71,0 и 303,0±86,0; Р<0,05) может быть неблагоприятным прогностическим фактором.

У 7 больных с неполной ремиссией достоверно снизилась активность ИФН-γ (59,0±12,0 и 25,0±3,0; Р<0,01) и ФНО-α (22,0±11,0 и 1,0±1,0). Однако прослеживалась также тенденция к снижению абсолютного количества CD-8-клеток (461,0±161,0 и 113,0±28,0; Р<0,05), а также относительного и абсолютного числа NK (568,0±73,0 и 246,0±88,0; Р<0,01).

У больных с выраженной отрицательной динамикой и нарастанием неврологического дефицита отмечено лишь достоверное снижение ФНО (59,0±29,0 и 0; Р<0,001). Изменений активности ИФН-α и ИФН-γ и содержания клеточных субпопуляций не выявлено.

Таким образом, в результате проведенного исследования становятся очевидными роль цитокинов в патогенезе PC и целесообразность применения ЧАИ в комплексной терапии PC с ремиттирующим течением.

About the authors

I. A. Zavalishin

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

В. Т. Khaidarov

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

М. N. Zakharova

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

L. S. Adarcheva

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

А. S. Niyazbekova

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

V. P. Kuznetsov

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

D. L. Belyaev

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

А. А. Babayants

Research Institute of Neurology, Russian Academy of Medical Sciences; NIIEM named after N.F. Gamalei RAMS

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow; Moscow

References

Supplementary files