Исследование специфической активности и безвредности одновременного введения вакцин при комплексной иммунопрофилактике опасных инфекционных заболеваний

Полный текст

Введение. Анализ инфекционной заболеваемости в различных регионах Российской Федерации показывает, что уровень заболеваемости воздушно-капельными (грипп, острые респираторные инфекции, менингит и др.) и кишечными инфекциями (дизентерия, брюшной тиф, вирусный гепатит А и др.) в настоящее время остается наиболее высоким [3–6]. В воинских коллективах, дислоцирующихся в южных и юго-восточных регионах, эти инфекции иногда могут возникать и протекать одновременно или параллельно, так как военнослужащим в силу профессиональных особенностей службы часто приходится действовать в неблагоприятных эпидемических условиях, сталкиваться с нарушениями санитарно-гигиенических правил, употреблением некачественных продуктов питания, питьевой воды и др. Кроме того, подобные ситуации могут иметь место в ходе локальных конфликтов, а также вследствие передислокации личного состава войск в эпидемически неблагополучные по тем или иным инфекционным заболеваниям регионы.

В этих условиях наиболее эффективным средством профилактики инфекционных заболеваний является одновременная (комплексная) вакцинация против наиболее часто встречающихся нозологических форм. Она крайне востребована в период, когда возникнет необходимость в кратчайшие сроки привить значительные контингенты войск и населения одновременно от нескольких инфекций (мобилизация, угроза применения биологического оружия, осложнение эпидемической обстановки и др.) [2].

Однако в настоящее время в инструкциях по применению практически всех вакцин, входящих в Национальный календарь профилактических прививок и Календарь профилактических прививок по эпидемическим показаниям, разрешено вводить одновременно разными шприцами и в разные места тела только инактивированные вакцины, а живые вакцины вводить либо запрещено, либо информация об этом отсутствует. Кроме того, ни в Национальном календаре профилактических прививок, ни в инструкциях по их применению нет четкой информации по допустимым сочетаниям и количеству прививок, которые можно вводить одновременно одному прививаемому [7, 8].

Цель исследования. Исследование специфической активности и безвредности одновременного (комплексного) применения нескольких вакцин для иммунопрофилактики опасных инфекционных заболеваний.

Материалы и методы. Оценку токсичности и специфической активности вакцин при комплексном применении проводили на белых беспородных мышах массой 16–18 г, а иммуногенности и безвредности – на морских свинках массой от 200 до 300 г и кроликах породы «шиншилла» массой 2–2,5 кг. Все животные были получены из питомника «Рапполово» Российской академии наук (Ленинградская обл.) и проходили обязательный карантин в условиях клиники экспериментальных биологических моделей Государственного научно-исследовательского испытательного института военной медицины Министерства обороны (РГНИИИ ВМ МО РФ, г. Санкт-Петербург). Для моделирования инфекций использовали вирулентные штаммы возбудителей из рабочей коллекции ГНИИИ ВМ МО РФ:

– Salmonella typhimurium, штамм 4446 – культивировали на плотной питательной среде Мюллера–Хинтона фирмы «Лабораториос КОНДА С.А.», (Испания) при 37^оС в течение 24 ч.; после типирования выросших колоний готовили по стандарту мутности на стерильном физиологическом растворе заражающую взвесь микроорганизма до разведения 10⁵ микробных клеток (мк. кл.) в 1 мл; полученную взвесь в объеме 0,5 мл вводили внутрибрюшинно подопытным животным;

– Shigella sonne II – культивировали на плотной питательной среде Мюллера–Хинтона фирмы «Лабораториос КОНДА С.А.» (Испания) при 37^оС в течение 24 ч; после типирования выросших колоний готовили по стандарту мутности на стерильном физиологическом растворе заражающую взвесь микроорганизма до разведения 10⁹ мк. кл. в 1 мл; полученную взвесь в объеме 0,5 мл вводили внутрибрюшинно подопытным животным;

– вирус желтой лихорадки, штамм «Дакар» – культивировали в головном мозге 3–5-дневных мышей-сосунков. Первоначально готовили от трех до пяти последовательных десятикратных разведений вируссодержащей суспензии. Из каждого разведения вводили по 0,02 мл суспензии в мозг мышам-сосункам. За животными устанавливали наблюдение в течение 5–7 сут. При появлении симптомов заболевания сосунков усыпляли эфиром, извлекали головной мозг и хранили (по три образца в пробе) при температуре минус 20^оС. Для моделирования желтой лихорадки готовили 10% суспензию вируссодержащего материала, которую в объеме 0,8 мл вводили взрослым мышам внутрибрюшинно.

Экспериментальных животных иммунизировали следующими вакцинами:

– вакцина брюшнотифозная Ви-полисахаридная «Вианвак» (БТВ) для подкожного введения Общества с ограниченной ответственностью «Гритвак» (Россия);

– вакцина дизентерийная против шигелл Зонне «Шигеллвак» (ДВ), полисахаридная, для подкожного или внутримышечного введения Общества с ограниченной ответственностью «Гритвак» (Россия);

– вакцина гепатита А «Альгавак М» (ВГА), культуральная очищенная концентрированная адсорбированная инактивированная жидкая, для внутримышечного введения Закрытого акционерного общества «Вектор БиАльгам» (Россия);

– вакцина менингококковая «Менактра» (ВМ), полисахаридная (серогрупп А, С, Y и W-135) конъюгированная с дифтерийным анатоксином, раствор для внутримышечного введения фирмы «Санофи Пастер Инк.» (Соединенные Штаты Америки);

– вакцина желтой лихорадки живая сухая (ВЖЛ) для подкожного введения фирмы «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова» (Россия).

Животным опытных групп все вакцины вводили одновременно (комплексно) разными шприцами в разные участки тела. Каждую вакцину вводили однократно рекомендованным способом (подкожно или внутримышечно): белым мышам – в объеме 0,1 мл (подкожно) или 0,2 мл (внутримышечно) в дозе, эквивалентной 0,25 человеческой дозы (ч. д.); морским свинкам и кроликам – в объеме 0,5 мл в дозе, эквивалентной 0,5 ч. д.

Специфическую активность вакцин при одновременном применении изучали в соответствии с требованиями Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств [9] на мышиных моделях инфекций брюшного тифа, дизентерии и желтой лихорадки по показателям выживаемости подопытных животных после заражения (%) и величине средней продолжительности жизни животного в течение срока наблюдения (сут).

Иммуногенность (иммунологическую активность) вакцин оценивали по повышению уровня (титра) спе-цифических антител (АТ) в сыворотке крови иммунизированных животных. Кровь для получения сывороток с целью выявления в них специфических АТ к каждой вакцине брали у морской свинки из сердца путем его пункции до иммунизации, на 7–14-е и 21–28-е сут поствакцинального периода. Для получения сыворотки пробирки с кровью помещали в штатив и оставляли при комнатной температуре в течение 1–2 ч с целью более эффективного свертывания и получения максимально возможного количества сыворотки. По истечении этого времени пробирки с кровью выдерживали в холодильнике при температуре плюс 4 ^оС в течение 16–18 ч, отбирали сыворотку в специальные пробирки и помещали для хранения в низкотемпературный холодильник при температуре минус 20^оС до серологического исследования. Специфические антитела выявляли с использованием соответствующих коммерческих тест-систем и антигенных диагностикумов в реакциях непрямой гемагглютинации, связывания комплемента, пассивной гемагглютинации, торможения гемагглютинации и иммуноферментного анализа (ИФА). Результаты обрабатывали и представляли в виде обратного значения среднегеометрических титров антител.

Оценку острой токсичности вакцин при комплексном применении проводили на лабораторных животных двух видов обоего пола: белых беспородных мышах и кроликах породы «шиншилла». Характеристики острой токсичности определяли при однократном применении вакцин в дозах 0,1; 0,25; 0,5 ч. д – для мышей, и 0,5–1 ч. д. – для кроликов. Регистрировали симптомы интоксикации, проводили оценку общего состояния, повышение температуры и динамику массы тела в течение периода наблюдения. Методом пробит-анализа по Финни рассчитывали пороговые, среднелетальные и абсолютно летальные дозы для животных обоих видов. Выживших животных выводили из опыта через 7 сут после комплексного введения вакцин. У всех животных проводили макроскопическое исследования внутренних органов.

Оценку хронической токсичности вакцин при комплексном применении проводили после их ежедневного введения мышам и кроликам в течение 7 сут. Исследование хронической токсичности проводили в условиях применения вакцин в дозах 0,1; 0,25 и 0,5 ч.д. для мышей и 0,5–1 ч. д. – для кроликов. В процессе срока наблюдения (14 сут) оценивали изменения массы тела иммунизированных животных, показатели потребления ими воды и пищи, а также биохимические показатели крови. Влияние вакцин на функциональное состояние печени иммунизированных животных оценивали по результатам пробы с гексеналом, а на центральную нервную систему – по результатам пробы с налтрексоном (аналог коразола).

Иммунологическую безопасность вакцин при комплексном применении изучали путем постановки стандартных тестов определения общей анафилаксии (анафилактический шок), активной кожной анафилаксии и конъюнктивальной пробы, а функциональное состояние иммунокомпетентных клеток – по выраженности у иммунизированных животных реакции гиперчувствительности замедленного типа, фагоцитарной активности макрофагов и устойчивости к гетерологичной инфекции.

Применительно к каждому возбудителю величину латентного периода (ЛД)₅₀ оценивали на белых беспородных мышах с расчетом этого критерия по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева [10]. Эффективность изучаемых препаратов определяли по сопоставлению величин показателей выживаемости животных в опытных и контрольных группах в процентах по таблицам В.С. Генеса [1].

Статистический анализ результатов исследования проводили с помощью компьютерной программы статистической обработки данных Statistica 6.0 for Windows. Для оценки количественных показателей определялись стандартные количественные характеристики: среднее значение выборки (Х), медиана (Ме), среднее квадратичное (стандартное) отклонение (Sx), стандартная ошибка средней (Ip), доверительный интервал для 95% вероятности (Х±I₉₅). Сравнение количественных данных проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при p≤0,05.

Результаты и их обсуждение. Для оценки специфической активности вакцин при комплексном применении на моделях инфекций брюшного тифа, дизентерии и желтой лихорадки были сформированы экспериментальные группы для каждой указанной инфекции по 10 мышей в каждой: 1 группа вакцинировалась комплексом вакцин; 2 – только моновакцинами БТВ, ДВ или ВЖЛ; 3 – контрольная группа животных, которым подкожно вводили физиологический раствор.

Способ и объем введения вакцин каждому опытному животному был следующий: БТВ – подкожно в объеме 0,1 мл в дозе, эквивалентной 0,25 ч. д/особь; ДВ – подкожно в объеме 0,1 мл в дозе, эквивалентной 0,25 ч. д/особь; МВ – внутримышечно в объеме 0,2 мл в дозе, эквивалентной 0,25 ч. д/особь; ВГА – внутримышечно в объеме 0,2 мл в дозе, эквивалентной 0,25 ч. д/особь; ВЖЛ – подкожно в объеме 0,1 мл в дозе, эквивалентной 0,25 ч. д/особь.

Заражение животных проводили на 14-е сутки после иммунизации путем внутрибрюшинного введения 0,5 мл суспензии культуры одного из возбудителей: Salmonella typhimurium – в дозе 10 ЛД₅₀ (10⁵ мк. кл. в 1 мл); Shigella sonne II – в дозе 10 ЛД₅₀ (10⁹ мк. кл. в 1 мл); желтой лихорадки – примерно 5 ЛД₅₀ (0,8 мл 10% суспензии вируса).

После заражения за животными осуществляли ежедневное наблюдение в течение 14–21 сут с регистрацией количества живых и павших мышей (табл. 1–3).

 

Таблица 1

Выживаемость животных, инфицированных возбудителем брюшного тифа, на 14-е сутки после комплексной иммунизации

Группа	Препарат для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Количество выживших животных, гол.	Выживаемость, % (доверительный интервал)
1-я	Комплекс вакцин	10	7	70 (35–93)*
2-я	Моновакцина БТВ	10	7	70 (35–93)*
3-я	Контроль	10	0	0 (0–31)

Примечание: * – различия с контролем, p<0,05.

 

Таблица 2

Выживаемость животных, инфицированных возбудителем дизентерии, на 21-е сутки после комплексной иммунизации

Группа	Препарат для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Количество выживших животных, гол.	Выживаемость, % (доверительный интервал)
1-я	Комплекс вакцин	10	10	100 (69÷100)*
2-я	Моновакцина ДВ	10	7	70 (35÷93)*
3-я	Контроль	10	0	0 (0÷31)

Примечание: * – различия с контролем, p<0,05.

 

Таблица 3

Выживаемость животных, инфицированных возбудителем желтой лихорадки, на 14-е сутки после комплексной иммунизации

Группа	Препарат для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Количество выживших животных, гол.	Выживаемость, % (доверительный интервал)
1	Комплекс вакцин	10	10	100 (69÷100)*
2	Моновакцина ВЖЛ	10	10	100 (69÷100)*
3	Контроль	10	3	30 (7÷65)

Примечание: * – различия с контролем, p<0,05.

 

Установлено, что комплексное введение вакцин обеспечивало формирование достаточно напряженного иммунитета к брюшному тифу, дизентерии Зонне и желтой лихорадке, защитный уровень которого практически не отличался от такового у животных, иммунизированных соответствующими вакцинами в моноварианте. При этом заметного снижения протективной активности вакцин при их комплексном введении не наблюдалось, что свидетельствовало об отсутствии каких-либо антагонистических или конкурентных взаимоотношений между антигенами вакцин при их совместном применении.

Оценку иммуногенности вакцин при их комплексном введении проводили в сравнении с иммуногенностью соответствующей вакцины, вводимой отдельно, по повышению средних (Ме) титров специфических антител в сыворотке крови иммунизированных морских свинок через 14, 21 и 28 сут после иммунизации (табл. 4–8).

 

Таблица 4

Титры специфических противодизентерийных антител в сыворотке крови морских свинок, иммунизированных комплексом вакцин и моновакциной ДВ

Группа	Препарат для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Средние титры специфических антител до и после иммунизации, Ме (крайние значения ряда)
			до иммунизации	через 14 сут после иммунизации	через 28 сут после иммунизации
1-я	Комплекс вакцин	10	0	1/16 (1/4÷1/32)*	1/16 (1/8÷1/32)*
2-я	Моновакцина ДВ	10	0	1/16 (1/8÷1/32)*	1/16 (1/8÷1/32)*
3-я	Контроль	7	0	0	0

Примечание: * – различия средних титров противодизентерийных антител в сыворотке крови иммунизированных животных по сравнению с контролем, p<0,05.

 

Таблица 5

Титры специфических брюшнотифозных антител в сыворотке крови морских свинок, иммунизированных комплексом вакцин и моновакциной БТВ

Группа	Препарат для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Средние титры специфических антител до и после иммунизации, Ме (крайние значения ряда)
			до иммунизации	через 14 сут после иммунизации	через 28 сут после иммунизации
1-я	Комплекс вакцин	10	0	1/16 (1/4÷1/32)*	1/64 (1/32÷1/64)*
2-я	Моновакцина БТВ	10	0	1/16 (1/4÷1/16)*	1/16 (1/8÷1/32)*
3-я	Контроль	7	0	0	0

Примечание: * – различия средних титров брюшнотифозных антител в сыворотке крови иммунизированных животных по сравнению с контролем, p<0,05.

 

Таблица 6

Титры специфических антител к возбудителю вирусного гепатита А в сыворотке крови морских свинок, иммунизированных комплексом вакцин и моновакциной ВГА

Группа	Препарат для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Средние титры специфических антител до и после иммунизации, Ме (крайние значения ряда)
			до иммунизации	через 14 сут после иммунизации	через 21 сут после иммунизации
1-я	Комплекс вакцин	10	0	1/128 (1/32÷1/128)*	1/256 (1/64÷1/256)*
2-я	Моновакцина ВГА	10	0	1/32 (1/16÷1/32)*	1/64 (1/32÷1/128)*
3-я	Контроль	7	0	0	0

Примечание: * – различия средних титров антител к возбудителю вирусного гепатита А в сыворотке крови иммунизированных животных по сравнению с контролем, p<0,05.

 

Таблица 7

Титры специфических антител к возбудителю менингококковой инфекции в сыворотке крови морских свинок, иммунизированных комплексом вакцин и моновакциной МВ

Группа	Препарат для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Средние титры специфических антител до и после иммунизации, Ме (крайние значения ряда)
			до иммунизации	через 14 сут после иммунизации	через 21 сут после иммунизации
1-я	Комплекс вакцин	10	Серо. гр. А – 0 Серо. гр. С – 0	1/16 (1/8÷1/16)* 1/8 (1/4÷1/16)*	1/128 (1/32÷1/256)* 1/32 (1/16÷1/32)*
2-я	Моновакцина МВ	10	Серо. гр. А – 0 Серо. гр. С – 0	1/16 (1/8÷1/16)* 1/8 (1/4÷1/32)*	1/128 (1/64÷1/128)* 1/32 (1/8÷1/32)*
3-я	Контроль	7	Серо. гр. А – 0 Серо. гр. С – 0	0 0	0 0

Примечание: * – различия средних титров антител к возбудителю менингококковой инфекции в сыворотке крови иммунизированных животных по сравнению с контролем, p<0,05.

 

Таблица 8

Титры специфических антител к возбудителю желтой лихорадки в сыворотке крови морских свинок, иммунизированных комплексом вакцин и моновакциной ВЖЛ

Группа	Препараты для иммунизации	Количество животных в группе, гол.	Средние титры специфических антител до и после иммунизации, Ме (крайние значения ряда)
			до иммунизации	через 14 сут после иммунизации	через 21 сут после иммунизации
1	Комплекс вакцин	10	0	1/32 (1/8÷1/64)*	1/32 (1/16÷1/64)*
2	Моновакцина ВЖЛ	10	0	1/32 (1/8÷1/64)*	1/32 (1/16÷1/64)*
3	Контроль	7	0	0	0

Примечание: * – различия средних титров антител к возбудителю желтой лихорадки в сыворотке крови иммунизированных животных по сравнению с контролем, p<0,05.

 

Выявлено, что иммуногенность вакцин, вводимых в комплексе, не уступает таковой, определенной при их применении в моноварианте, а в некоторых случаях даже превосходит её. В частности, иммуногенность вакцин БТВ и ВГА, вводимых в комплексе, оказалась в четыре раза выше, чем при их применении в моноварианте, что может говорить о наличии определенного адъювантного эффекта со стороны других компонентов комплекса. Таким образом, отрицательного влияния вводимого комплекса вакцин на иммуногенность входящих в него компонентов не зарегистрировано, в том числе и со стороны вакцины желтой лихорадки, относящейся к живым вакцинам.

При изучении острой и хронической токсичности комплекса вакцин, вводимого кроликам и морским свинкам, показано, что входящие в него вакцины при одновременном применении не оказывали токсического действия на организм привитых животных, в частности, патоморфологические исследования внутренних органов иммунизированных животных не выявили каких-либо патологических изменений, свидетельствующих о негативном влиянии комплекса вакцин на их органы и системы. При этом отмечены лишь незначительные специфические иммуноморфологические изменения в лимфоидных тканях на фоне отсутствия патологических проявлений со стороны других органов и систем организма иммунизированных животных.

Результаты оценки выраженности общих прививочных реакций у морских свинок, привитых комплексом вакцин, так и моновакцинами по отдельности, показали, что случаев выраженной лихорадочной реакции, снижения массы тела, изменений поведенческих реакций, а также гибели иммунизированных животных в ответ на иммунизацию ни в одной из подопытных групп животных не зарегистрировано. Местные реакции в месте введения каждого компонента комплекса также практически отсутствовали. Аналогичные результаты были получены и при исследованиях на кроликах, что фактически свидетельствует о ареактогенности испытанного комплекса прививок. При этом не было отмечено отрицательного влияния препаратов друг на друга. Следовательно, вводимый комплекс вакцин по критериям общей и местной реактогенности характеризуется удовлетворительной переносимостью.

Изучение гематологических показателей крови свидетельствовало о наличии изменений в формуле крови подопытных животных в поствакцинальном периоде. Отклонениям от фоновых значений подверглись показатели клеточных элементов крови: лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов, гранулоцитов, тромбоцитов. Однако эти изменения формулы крови варьировали в пределах допустимой физиологической нормы и были обусловлены спецификой течения вакцинального процесса. Биохимические показатели крови в поствакцинальном периоде изменялись разнонаправленно, однако эти изменения не выходили за пределы физиологической нормы для конкретного вида животных.

Результаты оценки влияния комплекса вакцин на функциональное состояние печени (по результатам пробы с гексеналом) и центральную нервную систему (по результатам пробы с налтрексоном) иммунизированных животных показали, что под его влиянием не происходит угнетение детоксицирующей функции печени и отрицательное влияние комплексных прививок на функцию центральной нервной системы.

При оценке иммунологической безопасности комплексной вакцинации установлено, что иммунизация экспериментальных животных отдельными вакцинами или в составе комплекса не влияла отрицательно на функциональное состояние иммунокомпетентных клеток. В основном выявленные изменения свидетельствовали о стимулирующем влиянии комплексных прививок на исследованные параметры иммунной системы. В частности, активировалась фагоцитарная функция фагоцитов, значительно увеличивалась активность неспеци-фических эстераз, и повышался уровень лизоцима внутри фагоцитов по сравнению как с исходными (до вакцинации) их значениями, так и аналогичными показателями у животных, иммунизированных каждой вакциной в отдельности. Кроме того, изучение клеточного состава и функциональной активности перитонеальных макрофагов у мышей показало, что комплексные прививки и вакцины, вводимые отдельно, разнонаправленно воздействовали на активность упомянутых клеток: либо под влиянием комплексных прививок повышалась их функциональная активность без изменения клеточной реакции, что в итоге обеспечивало стимуляцию системы в целом к 3–7-м сут поствакцинального периода, либо клеточная реакция резко повышалась на фоне незначительного снижения активности отдельного макрофага.

Следовательно, комплексные прививки не оказывали негативного влияния на функциональное состояние клеток, участвующих в начальном этапе иммуногенеза. Отсутствие негативного влияния комплексных прививок на компоненты неспецифической резистентности организма практически полностью было подтверждено в условиях заражения иммунизированных животных вирусом гриппа, то есть при моделировании гетерологичной инфекции. Кроме того, иммунизация комплексом вакцин не приводила к аллергизации организма животных, что подтверждалось отсутствием каких-либо проявлений аллергических реакций или анафилактической активности.

Заключение. Установлено, что одновременное введение пяти вакцин (БТВ «Вианвак», ДВ «Шигеллвак», ВГА «Альгавак-М», МВ «Ментактра» и живой ВЖЛ) является безопасным и характеризуется хорошей переносимостью, ареактогенностью, отсутствием аллергизации организма и патологического влияния комплексных прививок на органы и ткани иммунизированных животных, а также их иммунологической безопасностью, сопоставимой с таковой, полученной при применении этих вакцин в отдельности. Кроме того, иммунизация животных комплексом вакцин обеспечивала формирование достаточно напряженного иммунитета, защитный уровень которого практически не отличался от такового у животных, иммунизированных соответствующими вакцинами в моноварианте, в частности против брюшного тифа, дизентерии Зонне и желтой лихорадки. При этом иммуногенность вакцин, вводимых в комплексе, в некоторых случаях даже превосходила таковую, определенную при применении вакцин, вводимых отдельно. В частности, иммуногенность вакцин БТВ и ВГА, вводимых в комплексе, оказалась в четыре раза выше, чем при отдельном введении, что может говорить о наличии определенного адъювантного эффекта со стороны других вакцин, а также об отсутствии антагонизма или конкурентных взаимоотношений при их совместном применении.

Об авторах

Н. П. Хирина

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Автор, ответственный за переписку.
Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

В. М. Добрынин

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

А. В. Степанов

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

Н. Н. Степанов

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

С. В. Попов

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

О. В. Хлопунова

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

И. А. Добрынина

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

В. В. Щелгачев

Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины

Email: dob1955@mail.ru
Россия, Санкт-Петербург

Список литературы

Дополнительные файлы