COMPARATIVE CHARACTERISTICS OF IMMUNOLOGICAL PARAMETERS IN PATIENTS WITH ISOLATED CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE AND CHRONIC OBSTRUCTIVE PULMONARY DISEASE IN COMBINATION WITH BRONCHIAL ASTHMA

Full Text

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Изучить иммунологические показатели у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) тяжелого течения и ХОБЛ в сочетании с бронхиальной астмой (БА) тяжелого течения. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена в дизайне простого открытого рандомизированного клинического исследования в клинике под руководством академика РАМН, д. м. н., профессора В. И. Петрова. В исследование после проведения рандомизации был включен 51 пациент в возрасте (60,42 ± 12,43) лет с установленным диагнозом ХОБЛ тяжелой степени (n = 13) (согласно рекомендациям GOLD, 2008) давностью не менее 1 года, имеющих функциональные изменения - объем форсированного выдоха за 1 секунду (ОФВ1) не более 50 и не менее 30 % от должных величин и соотношение ОФВ1 к форсированной жизненной емкости легких (ФЖЕЛ) менее 70 %, -добровольно подписавших согласие на участие в исследовании [1, 4]. Среди 38 пациентов с сочетанием ХОБЛ и БА в анамнезе первым дебютировала БА, причем у 36 пациентов (96,67 %) средняя продолжительность БА, протекавшей изолированно, составила 20 лет. При ретроспективной оценке было установлено, что все пациенты в дебюте БА получали «неадекватную» тера- пию согласно рекомендациям GINA, 2009. В соответствии с данными анамнеза, клинической картины и результатов инструментального и лабораторного методов обследования был выставлен диагноз БА тяжелого течения [2, 4, 6]. Статистический анализ проводился с использованием пакета программ «Microsoft Office Excel 2007» и «Statistica 6.0» (Stat Soft, USA). Анализ субпо-пуляционного состава лимфоцитов проводили с помощью проточной цитометрии на цитофлюориметре FACScan (Becton Dickinson, США) по стандартной методике, используя моноклональные антитела к поверхностным рецепторам лимфоцитов, меченные FITC, РЕ фирмы «Caltag laboratories» (Канада) по стандартной панели: CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD22+. Фагоцитарное число (ФЧ30) определяли путем деления поглощенных дрожжевых клеток на число «активных» нейт-рофилов через 30 минут инкубации с дрожжами, что соответствует среднему числу поглощенных нейтрофи-лом дрожжевых клеток. Число фагоцитирующих нейт-рофилов через 30 минут инкубации обозначают как фагоцитарный показатель (ФП). Постановку теста нитро-синего тетразолия (НСТ-тест) проводили в спонтанном и стимулированном пирогеналом вариантах. Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови определяли методом преципитации комплекса антиген-антитела в полиэтилгликоле (Фримель И. С., 1987). Фотокалометрирование проводили при длине волны 450 нм. По плотности образующегося преципитата судили о количестве ЦИК. Результаты выражали в единицах оптической плотности [3, 5]. О состоянии гуморального иммунитета судили по содержанию иммуноглобулинов A, M, G в сыворотке крови, которые определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по Manchini G., используя антитела НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи (Москва). Метод основан на измерении кольца преципитации, образующегося при внесении исследуемой сыворотки в лунки, вырезанные в слое агара с диспергированными в нем специфическими антисыворотками против соответствующих классов иммуноглобулинов. Определение общего иммуноглобулина Е проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов фирмы «ДИАплюс» (Москва). Определение концентрации интерлейкина (ИЛ)-5, интерферона-гамма (ИФ-у) в крови проводилось иммуноферментным методом с использованием моноклональных антител с помощью лабораторных наборов «BenderMedSystems» (США). Определение содержания ИЛ-8 в сыворотке крови проводилось иммуноферментным способом с помощью набора реагентов для определения ИЛ-8 ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Изменения иммунного статуса при любых хронических воспалительных заболеваниях имеют доминирующее значение. В связи с этим нами был проведен сравнительный анализ показателей различных звеньев иммунитета при тяжелом течении ХОБЛ и ХОБЛ в сочетании с БА, который представлен в табл. Сравнивая уровень лейкоцитов, относительного и абсолютного количества лимфоцитов у больных с ХОБЛ тяжелого течения и ХОБЛ в сочетании с БА тяжелого течения, достоверных различий не выявили (р > 0,05). Относительный уровень лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD3+-маркер, достоверно не различался, а абсолютное их количество было достоверно ниже во второй группе на 30,56 % (р < 0,001). Недостоверными оказались и различия между и относительным, и абсолютным уровнем CD4+-лим-фоцитов между сравниваемыми группами пациентов (р > 0,05). Уровень CD8+-лимфоцитов статистически значимо был ниже у пациентов с сочетанием ХОБЛ и БА: относительный-на 48,89 % (р < 0,001), а абсолютный-на 46,41 % (р < 0,001) по сравнению с группой с изолированной ХОБЛ тяжелого течения, что привело к статистически значимому повышению коэффициента CD4+/CD8+ в группе пациентов с сочетанной патологией-на 76,74 % (р < 0,001). Анализируя относительный и абсолютный уровень лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD^-маркер, достоверных различий не выявили. Статистически значимые различия выявлены на уровне CD22+-маркеров лимфоцитов: у больных с сочетанной патологией относительный уровень изучаемого признака ниже на 39,89 % (р < 0,001), а абсолютный - на 45,12 % (р < 0,001) по сравнению с изолированной патологией. Показатели иммунитета у больных ХОБЛ тяжелой степени и ХОБЛ в сочетании с БА тяжелой степени Показатели ХОБЛ тяжелой степени (n = 13) ХОБЛ и БА тяжелой степени (n = 38) А % Me [Q1;Q3] Me [Q1;Q3] Лейкоциты, кл/мкл 7900 [7200; 8700] 7900 [7425; 8400] 0 Лимфоциты, % 42[38; 44] 40 [37; 43, 25] 4,76 Лимфоциты, кл/мкл 3306 [3034; 3397] 3160 [2808; 3452] 4,42 CD3+, % 57 [51; 58] 56 [52; 60] 1,75 CD3+, кл/мкл 1820,4 [1653; 1997, 6] 1264 [1071, 1; 1503, 06]** 30,56 CD4+, % 38[34; 40] 36 [34; 40] 5,26 CD4+, кл/мкл 1256,28 [1031, 56; 1425, 6] 1130,4 [979, 3; 1386, 64] 10,02 CD8+, % 45 [39; 47] 23 [20, 75; 28, 75]** 48,89 CD8+, кл/мкл 1388,52 [1291, 95; 1556, 64] 744,15[625, 18; 915, 84]** 46,41 CD4+ / CD8+ 0,86 [0, 81; 0, 9] 1,52 [1, 32; 1, 73]** 76,74 CD16+, % 20 [16;23] 20 [18;23, 5] 0 CD16+, кл/мкл 728,64 [504; 760, 38] 626,4 [561, 5; 695, 03] 14,03 CD22+, % 18 [17; 22] 11 [8; 13]** 38,89 CD22+, кл/мкл 606,8 [516, 78; 704, 88] 333 [242, 2; 460, 4]** 45,12 IgA, г/л 3,32[2, 99; 4, 01] 3,08[2, 88; 3, 64] 7,23 IgM, г/л 2,5 [1, 39; 2, 74] 1,61 [1, 25; 2, 28]* 35,6 IgG, г/л 15,8 [14, 24;18, 95] 16,32 [14, 56;17, 91] 3,29 IgE, МЕ/мл 143 [132; 153] 154 [133, 25; 351]* 7,69 ФП, % 46 [39; 48] 46,5 [40, 75; 54, 75] 1,09 ФЧ, м. т. 0,75 [0, 68; 1, 88] 1,56 [0, 94; 1, 93]* 108 НСТ, % 11 [4; 12] 17,5 [15; 20]** 59,09 НСТ (П), % 18 [7; 23] 27 [23, 25; 30, 5]** 50,00 ЦИК, у. е. 48 [47; 50] 47 [33; 48]* 2,08 ИЛ-5, пг/мл 49 [40; 55] 112 [90; 136, 5]** 128,57 ИЛ-8, пг/мл 86 [79; 90] 85 [77; 90] 1,16 ИФ-у, пг/мл 313 [300; 337] 299,5 [288; 321, 5] 4,31 ^Достоверность различий приведена по отношению к показателям группы с изолированной ХОБЛ p < 0,05; **p < 0,001. ЩШгорСз [ЩсмгПГКЩ Уровень IgA и IgG не имел достоверных различий между двумя группами пациентов (р > 0,05). Уровень IgM был достоверно ниже в группе пациентов с сочетанной патологией на 35,6 % (р < 0,05) по сравнению с уровнем изучаемого показателя у пациентов с изолированной патологией. Содержание IgE было статистически значимо выше в группе пациентов с сочетанием ХОБЛ и БА на 7,69 % (р < 0,05) по сравнению с группой пациентов с изолированной ХОБЛ, участвующем в патогенезе бронхиальной астмы. На уровне ФП достоверных различий в сравниваемых группах выявлено не было, а ФЧ оказалось статистически значимо выше на 108 % (р < 0,05) в группе пациентов с сочетанием ХОБЛ и БА. Средний уровень НСТ и НСТ(П)-теста достоверно выше в группе лиц с сочетанием ХОБЛ и БА: исходно - на 59,09 % (р < 0,001), а после стимуляции пирогеналом - на 50 % (р < 0,001) по сравнению с уровнем изучаемых показателей среди пациентов с изолированной ХОБЛ. Содержание ЦИК оказалось достоверно ниже в группе пациентов с сочетанной патологией лишь на 2,08 % (р < 0,05) по сравнению с изучаемым признаком у больных с изолированной ХОБЛ. Уровень ИЛ-5 оказался достоверно выше в группе пациентов с сочетанной патологией на 128,57 % (р < 0,001) по сравнению с показателями в группе изолированного течения ХОБЛ тяжелой степени. Достоверных различий между уровнем ИЛ-8 и ИФ-у у пациентов с тяжелым течением изолированной ХОБЛ и ХОБЛ в сочетании с БА выявлено не было (р > 0,05), что говорит о повышенной активности нейтрофилов и активном воспалительном процессе в дыхательных путях в обеих группах пациентов. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, при тяжелом течении ХОБЛ и ХОБЛ в сочетании с БА выявлены незначительные различия на разных уровнях показателей иммунитета. У пациентов с тяжелой ХОБЛ относительный уровень клеток значительно выше на уровне лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD8+-маркер, что свидетельствует об увеличении их способности подавлять активность других клеток иммунной системы, а также CD22+-маркер, а абсолютное их количество имело достоверно более низкие значения на уровне CD3+, CD8+ и CD22+-лимфоцитов у пациентов с сочетанием ХОБЛ и БА. Различия в гуморальном иммунитете проявлялись в более низком уровне IgM, что, вероятно, указывает на отсутствие остроты первичного аллергенного воздействия, а также повышенном IgE у пациентов с сочетанной патологией. ФЧ НСТ и НСТ(П)-теста значительно снижено при тяжелом течении ХОБЛ, что косвенно свидетельствует о некотором снижении функциональной активности нейтрофилов периферической крови и, соответственно, об уменьшении генерации активных форм кислорода, обеспечивающих наработку биоокислителей с бактерицидным действием. Уровень ИЛ-5 значительно повышен при сочетанной патологии, что свидетельствует о стимулировании пролиферации и дифференцировке предшественников эозинофилов, активно участвующих в патогенезе бронхиальной астмы. На уровне остальных изучаемых показателей значимых различий выявлено не было. Анализируя все исследуемые показатели, можно говорить о существовании фенотипа ХОБЛ в сочетании с БА.

About the authors

V. I. Petrov

O. V. Polyakova

Email: olvlpolyakova@gmail.com

N. V. Malyuzhinskaya

E. Y. Blinkova

References

Supplementary files