MORPHOMETRIC CHARACTERIZATION OF HEPATOCYTES IN EXPERIMENTAL REPRODUCTION OF WEST NILE FEVER

Full Text

Трансмиссивные вирусные инфекции, такие как лихорадка Западного Нила, представляют интерес для изучения в связи с резким расширением своего ареала и периодическими сезонными вспышками данной лихорадки не только на юге России, но и на территории Волгоградской области. Сезонные эпидемические вспышки лихорадки Западного Нила характеризуются массовым охватом за короткий срок значительных групп населения. Возможность возникновения эпидемических вспышек, масштабы распространения, «агрессивность» болезни» (вероятность летальных исходов у определенных групп населения) делают это заболевание одной из актуальных проблем здравоохранения [5-7]. Лихорадка Западного Нила протекает остро с симптомами общей интоксикации, головными и мышечными болями, часто с развитием серозного менингита и ме-нингоэнцефалита. Вирус лихорадки Западного Нила наряду с выраженным нейротропным действием оказывает и гепатотропное воздействие [2, 8, 9]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение морфометрических изменений гепатоцитов печени экспериментально зараженных животных. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Моделирование лихорадки Западного Нила (ЛЗН) было произведено в лаборатории арбовирусных инфекций ГУ НИИ вирусологии РАМН им. Д. И. Ивановского. В работе использовали 25 беспородных мышей массой (10 ± 2) г в возрасте 30 суток, которые были заражены вирусом Западного Нила (штамм 986) внутрибрю-шинно по 0,3 мл (22 животных). Контролем служили ложноинфицированные мыши (3 животных). После заражения животные содержались в обычных лабораторных условиях, с обычным режимом кормления, движения и освещения. Экспериментальных животных выводились из эксперимента в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», начиная с 3-х суток и до 16-х суток после заражения. На основании наблюдения за клинической картиной заболевания данных мышей исследуемые животные были разделены на несколько групп: 1-я группа - инкубационный период (3-5-е сутки после заражения, 6 животных); 2-я группа - разгар клинических проявлений заболевания, умершие животные (6-9-е сутки после заражения, 4 животных); 3-я группа - разгар клинических проявлений заболевания, больные животные (6-9-е сутки после заражения, 6 животных); 4-я группа - зараженные животные без клинических признаков заболевания (по 16-е сутки эксперимента, 6 животных). Контрольной группой были 3 здоровых белых беспородных мыши в возрасте 30 суток, не зараженные вирусом Западного Нила и содержавшиеся в аналогичных лабораторных условиях, в которых находились зараженные животные. Экспериментальный материал был любезно предоставлен сотрудниками лаборатории на кафедру патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета для дальнейшего морфологического исследования. Фрагменты ткани печени фиксировались в 10%-м нейтральном формалине, заливались в парафин по стандартной методике. Парафиновые срезы после депарафинизации окрашивались гематоксилином и эозином. Окрашенные гистологические препараты ткани печени исследовались методом световой микроскопии (окуляр х 10, объектив х 40) в 10 полях зрения на микроскопе Micros Austria с использованием фотонасадки фотоаппаратом Olympus. Дальнейшее морфометрическое изучение полученных снимков проводилось с помощью программы PhotoM121, оценивалась площадь ядер гепатоцитов и площадь гепатоцитов в микрометрах (мкм). Статистическая обработка полученных данных производилась с помощью программного приложения «Microsoft Office Excel» (США). DseunpOs [©©сш^ТМЩ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследовав перечисленные выше группы животных, получили следующие результаты. Морфометрическая характеристика гепатоцитов при экспериментальном воспроизведении ЛЗН Г руппы Площадь ядер гепатоцитов, в мкм, M ± m Площадь гепатоцитов, в мкм, M ± m Ядерно-цитоплазматическое соотношение, M ± m Контроль 42,39 ± 2,29 208,54 ± 17,80 0,20 ± 0,12 1 43,89 ± 1,82 221,5 ± 8,8* 0,2 ± 0,2 2 44,46 ± 2,31 208,54 ± 11,80 0,21 ± 0,19 3 40,78 ± 1,80* 170,17 ± 15,00* 0,24 ± 0,12 4 45,22 ± 1,21 197,25 ± 9,30* 0,23 ± 0,13 *Различия достоверны по сравнению с группой умерших животных при р < 0,05. Из приведенной выше табл. видно не только уменьшение площади ядер и гепатоцитов печени в группе больных животных по сравнению с группой животных инкубационного периода, но и увеличение площади ядер в группе умерших животных. Площадь ядра в группе животных без клинических проявлений болезни была больше по сравнению с другими группами животных. Необходимо также отметить, что в группе умерших животных отмечался выраженный полиморфизм как клеток, так и ядер гепатоцитов (присутствие большого количества клеток и ядер с площадью как наименьшего значения, так и наибольшего). Исходя из имеющихся данных о площади ядер гепатоцитов и площади гепатоцитов, вычислили ядерноцитоплазматическое отношение в гепатоцитах печени экспериментальных животных. Ядерно-цитоплазматическое отношение - отношение между площадями цитоплазмы и ядра клетки - важная морфологическая характеристика, позволяющая оценить уровень метаболизма, выявить проявление компенсаторных реакций [1]. По представленным в табл. данным видно, что ядерно-цитоплазматическое отношение в гепатоцитах в группе умерших животных в разгар клинических проявлений заболевания было несколько больше, чем в группе животных в инкубационном периоде и у животных контрольной группы. Самый высокий показатель данного ядерно-цитоплазматического отношения был в группе больных животных в разгаре клинических проявлений заболевания. При этом ядерно-цитоплазматическое отношение в гепатоцитах зараженных животных без клинических признаков заболевания было больше по сравнению с другими группами животных. Наблюдаемые колебания показателя ядерно-цитоплазматического отношения в исследуемых группах связаны непосредственно с морфологической картиной заболевания. Показатель ядерно-цитоплазматического отношения в гепатоцитах у группы животных в инкубационном периоде был невысоким, по сравнению с другими группами, в связи со слабовыраженными дистрофическими изменениями гепатоцитов при внедрении вируса. Показатель ядерно-цитоплазматического отношения в гепатоцитах у группы умерших животных в разгар клинических проявлений заболевания был невысоким из-за срыва механизма иммунологической защиты и истощения компенсаторно-приспособительных механизмов, что соотносится с морфологическими данными экспериментального исследования по воспроизведению ЛЗН (выраженная экспрессия антигенов вируса ЛЗН в клетках в сочетании с выраженными воспалительными, дистрофическими, некробиотическими изменениями на фоне нарушения кровообращения). Показатели ядерноцитоплазматического отношения в гепатоцитах у группы больных животных в разгаре клинических проявлений заболевания и у группы зараженных животных без клинических признаков заболевания были больше, чем в остальных группах, в связи с включением механизма иммунологической защиты и формированием компенсаторно-приспособительных реакций, а также, возможно, механизма клеточной памяти клетки [9, 10]. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Полученные результаты морфометрического исследования гепатоцитов могут являться свидетельством воздействия вируса Западного Нила на гепатоциты печени, что соотносится с данными литературы о светооптических изменениях ядер гепатоцитов как при ЛЗН, так и при хронических вирусных гепатитах, что имеет значение для изучения поражения печени при различных вирусных инфекциях [4, 11] .

About the authors

N. V. Grigorieva

Email: ngrigorievavsmu@gmail.com

E. I. Stolnova

Ju. S. Vosko

L. I. Aleksandrova

V. I. Danilenko

V. S. Zamaraev

E. I. Gubanova

P. A. Chloponin

D. A. Malanin

References

Supplementary files