IMMUNOTROPIC EFFECT OF ANTIBODIES TO CD4 AND HUMAN GAMMA-INTERFERON IN TREATMENT OF HIV-INFECTED PATIENTS WITH ASSOCIATED TUBERCULOSIS

Full Text

Распространение инфекции, вызванной вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), осложняет глобальную борьбу с туберкулезом во всем мире. Туберкулез является лидирующей предотвратимой причиной смерти людей, живущих с ВИЧ [4]. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), более 30 % населения планеты инфицировано микобактериями туберкулеза и ежегодно регистрируется до 8 миллионов новых случаев [3, 4]. При этом наличие ВИЧ у больных туберкулезом значительно ухудшает течение болезни и ведет к повышению смертности, а риск заражения туберкулезом у ВИЧ-инфицированных лиц повышен более чем в 100 раз [3], что связано с взаимно отягощающим действием этих инфекций. В последнее годы появились новые лекарственные препараты, способные усилить эффективность антиретровирусной терапии [1]. Один из таких препаратов создан на основе поликлональных аффинно очищенных антител к CD4 и гамма-интерферону человека. Препарат оказывает стимулирующее действие на различные звенья иммунитета. В связи с этим представляет научно-практический интерес эффективность использования этого препарата в схеме терапии ВИЧ-инфицированных пациентов с ассоциированным туберкулезом. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Сравнительное изучение изменений клеточного звена иммунитета и цитокинового статуса у ВИЧ-инфи цированных лиц с ассоциированным туберкулезом и ВИЧ-инфицированных пациентов без туберкулеза после проведения комплексной терапии в сочетании с антителами к CD4 и гамма-интерферону человека. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Для достижения поставленной цели было обследовано 64 пациента [в среднем (34 + 8) лет] с ВИЧ-инфекцией, находившихся на лечении в ГУЗ «Волгоградский областной центр по профилактике и борьбе со СПИД и ИЗ» Волгограда, из которых 28 больных [в среднем (36 + 9) лет] с диагностированным туберкулезом легких. Диагноз туберкулез подтверждался бактериоско-пическими, бактериологическими и клинико-рентгенологическими исследованиями. В исследуемых группах преобладала инфильтративная форма туберкулеза легких (57 % от общего числа ВИЧ-инфицированных с ассоциированным туберкулезом - 16 чел.), диссемени-рованный выявлен у 7 (25 %) пациентов, очаговый - 5 (18 %). В результате рандомизации были сформированы 4 группы пациентов: 1-я группа - ВИЧ-инфицированные лица без туберкулеза (базовая АРВТ); 2-я группа - ВИЧ-инфицированные лица без туберкулеза (базовая АРВТ в сочетании с курсовым приемом антител к CD4 и гамма-интерферону); 3-я группа - ВИЧ-инфицированные лица с ассоциированным туберкулезом (базовая АРВТ); 4-я группа - ВИЧ-инфицированные лица с ассоциированным туберкулезом (базовая АРВТ в со 38 Выпуск 3 (47). 2013 ©згшірСа ©ШгС четании с курсовым приемом антител к CD4 и гамма-интерферону). В группы ВИЧ-инфицированных пациентов без туберкулеза входили лица, сопоставимые по полу, возрасту, стадиям заболевания ВИЧ, без острых патологий, вирусных заболеваний, перенесенных за последние 6 месяца, и без выявленного туберкулеза. Исследуемые группы находились на амбулаторном лечении. Продолжительность лечения составляла 3 месяца. Исследовались состав периферической крови (CD3+, CD4+, CD8+) и цитокиновый статус (IL-2, IL-4, INF-y). Периферическая кровь забиралась утром натощак из локтевой вены, центрифугировалась, замораживалась и хранилась при температуре -76 оС. Уровень CD4+ Т-лимфоцитов определялся на цитофлюориметре FACS^unt (Becton Dickinson, США) методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител. Концентрации цитокинов определялись методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем («Biosource», Invitrogen, США) согласно прилагаемым протоколам. Результаты получали фотометрически при длине волны 450 нм на многоканальном автоматическом анализаторе Dynex DSX. Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием программных пакетов «Statistica 8.0». Достоверность различий между сравниваемыми показателями определялась с использованием f-критерия Стьюдента (при нормальном распределении, для зависимых и независимых выборок), непараметрических критериев Вилкоксона и Манна-Уитни (при отсутствии нормального распределения данных, для зависимых и независимых выборок). Для данных, подчиняющихся закону нормального распределения, приводили значения среднего и ошибки среднего. Данные, не подчиняющиеся закону нормального распределения, описывали значением медианы (Me), первого и третьего квартилей (Q1, Q3). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исходно между больными с ассоциированным туберкулезом и без были выявлены достоверные различия по CD3+: у больных без ассоциированного туберкулеза их концентрация оказалась достоверно (р < 0,05) выше. По остальным показателям группы оказались сопоставимы. В результате терапии произошло достоверное изменение уровней CD3+, CD4+, CD8+, IL2, IL4, y-INF (табл. 1). При этом между группами больных был отмечены ряд достоверных отличий. Так, в группе больных туберкулезом, после терапии антителами к CD4 и гамма-интерферону человека уровни CD3+ (р < 0,05), CD4+ (р < 0,01), y-INF (р < 0,05) были достоверно выше не только чем у больных, не получавших исследуемый препарат, но и у больных без ассоциированного туберкулеза. В ходе исследования также отмечено повышение содержания в периферической крови разных субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+) (рис. 1). Рис. 1. Изменения уровней CD4+T-лимфоцитов до и после проведения исследования Таблица 1 Динамика основных изменений показателей клеточного иммунитета у больных ВИЧ и ВИЧ/ТБ, получавших и не получавших препарат антитела к CD4 и гамма-интерферону человека Антитела ВИЧ (АРВТ) ВИЧ (АРВТ+антитела) ВИЧ/ТБ (АРВТ) ВИЧ/ТБ (АРВТ+антитела) исходно 3 мес. исходно 3 мес. исходно 3 мес. исходно 3 мес. CD3+, кл/мкл 1169,50 ± 254,60 1246,63 ± 256,89 1200,13 ± 259,19 1285,31 ± 255,92 1104,21 ± 103,72 1153,14 ± 85,48 917,29 ± 183,39 973,29 ± 168,05 А = 7,00 % (3,39; 8,05) А = 7,43 % (4,22; 10,69) А = 3,83 % (-2,80; 13,08) А = 6,33 % (-0,63; 11,29) CD4+, кл/мкл 364,81 ± 147,23 ± * CD 35 со 054 81 3 376,00 ± 103,39 399,31 ± 91,24 249,00 ± 144,62 260,14 ± 151,77 269,71 ± 118,16 ± * 2 72 02 91 2 А = 6,39 % (2,27; 8,91) А = 8,38 % (3,99; 10,57) А = 4,10 % (2,99; 9,46) А =8,60 % (4,49; 12,83) CD8+, кл/мкл 685,13 ± 187,38 ± 4 § ° со о CNCN 653,88 ± 136,96 671,81* ± 122,19 589,43 ± 184,90 655,43 ± 234,83 730,79 ± 199,51 721,57 ± 225,19 А = 6,59 % (-1,82; 18,30) А = 2,50 % (1,72; 5,50) А = 9,68 % (2,07; 14,93) А = 3,45 % (-14,69; 13,63) CD4+/ CD8+ 0,52 ± 0,13 | 0,53 ± 0,07 0,60 ± 0,19 | 0,62 ± 0,18 0,38 ± 0,17 | 0,36 ± 0,16 0,36 ± 0,13 | 0,40 ± 0,14 А = 1,52 % (-9,26; 10,74) А = 4,69 % (1,97; 7,60) А = -3,35 % (-11,02; 2,17) А = 3,53 % (-6,04; 20,67) "Достоверные различия с исходными показателями (р < 0,05). Выпуск 3 (47). 2013 39 В первых двух группах антитела к CD4 и гамма-интерферону человека по увеличению уровней CD4+ оказались эффективнее: 1-я группа - 6,39 % [2, 27; 8, 91], 2-я - 8,38 % [3, 99; 10, 57]). По уровням CD3+, CD8+ достоверных различий после терапии исследуемым препаратом не обнаружено. В группах с туберкулезом в 4-й группе уровень CD4+ достоверно повышался на 8,60 % [4, 49; 12, 38] (3-я группа - 4,10 % [2, 99; 9, 46]). При сравнении цитокинового профиля групп пациентов было выявлена стимуляция секреции y-INF при приеме антител к CD4 и гамма-интерферону человека (2-я группа - 8,61 % [6, 20; 23, 53]) на фоне снижения уровней y-INF при применении лишь базовой терапии (1-я группа--1,79 % [-8,34; 3,56], 3-я группа -3,91 % [-7,62; 2,02]). В группе с туберкулезом после приема исследуемого препарата уровень y-INF увеличился на 15,06 % [8, 78; 21, 05]. Также отмечались изменения уровней IL2, IL4. Причем антитела к CD4 и гамма-интерферону человека стимулировали выработку IL2 в группе без туберкулеза (10,71 % [5, 85; 18, 01]), а в группе с туберкулезом -незначительное повышение на 4,64 % [1, 37; 13, 48]. Уровень же IL4 в 4-й группе с туберкулезом после приема препарата вырос на 19,31 % [10, 84; 35, 71], а в отсутствие препарата лишь на 1,92 % [-24,68; 26,85] (рис. 2, табл. 2). Таким образом, антитела к CD4 и гамма-интерферону человека оказывают стимулирующее действие на выработку эндогенного y-INF и функционально сопряженных с ним цитокинов IL2, IL4 на фоне увеличения числа СD4+T-лимфоцитов, тем самым усиливая влияние базовой АРВТ. Косвенно оказывая влияние на патогенетический механизм развития бактериального заболевания туберкулеза, тормозя его прогрессирование. В группах с применением исследуемого препарата не было зарегистрировано ни одного случая нежелательных лекарственных реакций. Рис. 2. Изменения уровней цитокинов до и после проведения исследования Динамика основных изменений цитокинового профиля у больных ВИЧ и ВИЧ/ТБ, получавших и не получавших антитела к CD4 и гамма-интерферону человека Таблица 2 Цитокины ВИЧ ВИЧ, Полиферон ВИЧ/ТБ ВИЧ/ТБ, Полиферон исходно 3 мес. исходно 3 мес. исходно 3 мес. исходно 3 мес. IL2, пг/мл 8,75 (7,15; 9,30) 8,90 (7,18; 9,20) 7,91 (6,58; 9,43) 8,99 (7,75; 10,25) 8,80 (7,18;9,85) 8,25 (7,38; 8,90) 8,55 (7,78; 8,85) 9,05# (8,83; 9,18) А = 1,19 % (-3,31; 9,88) А = 10,71 % (5,85; 18,01) А = -6,78 % (-12,27; 8,71) А= 4,64 % (1,37; 13,48) IL4, пг/мл 2,39 (1,58; 4,13) 2,75 (1,78; 5,70) 2,14 (1,58; 3,99) 2,75 (1,80; 4,60) 2,30 (1,55; 2,78) 2,40* (1,75; 2,78) 2,10 (1,70;2,68) 2,65* (2,10; 3,10) А = 17,71 % (9,60; 38,63) А = 18,71 % (5,17; 45,43) А = 1,92 % (-24,68; 26,85) А = 19,31 % (10,84; 35,71) y-INF, пг/мл 4,80 (4,30; 5,40) 4,45* (4,00; 5,10) 4,75 (4,38; 5,58) 5,55 (4,98; 6,45) 5,20 (4,80; 5,40) 5,00 (4,63; 5,18) 5,05 (4,63; 5,30) 5,35*# (5,10; 6,28) А = -1,79 % (-8,34; 3,56) А = 8,61 % (6,20; 23,53) А = -3,91 % (-7,62; 2,02) А = 15,06 % (8,78; 21,05) "Достоверные различия с исходными показателями (p < 0,05); #значимые различия между исследуемыми группами (p < 0,05). 40 Выпуск 3 (47). 2013 ЗАКЛЮЧЕНИЕ В результате работы была проведена сравнительная оценка изменений клеточного звена иммунитета и цитокинового статуса у ВИЧ-инфицированных лиц с ассоциированным туберкулезом и ВИЧ-инфицированных пациентов без туберкулеза после проведения базовой терапии в сочетании с антителами к CD4 и гамма-интерферону человека. Полученные данные свидетельствуют о достоверном восстановлении функциональных резервов мо-нонуклеарных клеток периферической крови, улучшении показателей цитокинового статуса, что говорит об иммуностимулирующем действии антител к CD4 и гамма-интерферону человека у ВИЧ-инфицированных пациентов с туберкулезом легких. Более того, изменения показателей на фоне комбинированной терапии с исследуемым препаратом были более значимыми, чем на фоне базовой терапии. Таким образом, препарат на основе антител к CD4 и гамма-интерферону человека может быть рекомен дован для включения в состав комплексной терапии у больных данной категории.

About the authors

A. S. Klyausov

Email: ak-flash@mail.ru

References

Supplementary files