THE STRUCTUREAND CONTENT OF PHENOLCOMPOUNDS IN OVERGROUND PART BALLOTA NIGRA GROWING IN VOLGOGRAD REGION

Full Text

Белокудренник черный (Ballota nigra L) - многолетнее травянистое корневищное растение семейства Lamiaceae, высотой 25-125 см. Стебель четырехгранный, ветвистый, опушен мягкими волосками, зеленый или красно-фиолетовый. Листья продолговато-яйцевидные с неглубоко сердцевидным основанием, с заостренной или острой верхушкой, острозубчатые, с обеих сторон опушены волосками, сверху-темно-зеленые, снизу - более светлые. Произрастает в европейской части России, в Предкавказье и Дагестане, в Сибири и на Дальнем Востоке [1]. Белокудренник черный нормализует работу нервной системы, оказывает транквилизирующее, седативное, антиаритмическое, спазмолитическое, антисептическое, противорвотное и диуретическое действие [4]. Согласно данным отечественных и зарубежных литературных источников химический состав белокудренника черного представлен соединениями различной природы (терпеновыми, стероидными, фенольными и другими) [2, 5]. Химический состав белокудренника черного остается малоизученным, информация о нем фрагментарна, противоречива и не дает сколько-нибудь полного представления об этом виде. На территории Российской Федерации из-за не изученности химического состава и отсутствия соответ ствующих нормативных документов он не является официнальным растением и не используется в достаточной мере. Хотя уже давно белокудренник черный применяется в научной медицине многих стран и входит в их Фармакопеи [4], что послужило основанием для исследования его состава. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение качественного состава фенольных соединений надземной части белокудренника черного. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Объектом исследования служила высушенная надземная часть белокудренника черного - Ballota nigra. L. семейства Губоцветных (Lamiaceae), заготовленная в июне-июле 2012 г. в фазу цветения от дикорастущих популяций в разных районах Волгоградской области (Дубовском, Городищенском) и Малодербетов-ском районе Республики Калмыкия. Для проведения качественного анализа был приготовлен водно-спиртовый экстракт надземной части белокудренника черного на 70%-м спирте этиловом. Наличие флавоноидных соединений определяли в эти-лацетатных фракциях и водных извлечениях из исследуемого объекта с помощью качественных реакций [3]: 70 Выпуск 4 (48). 2013 ©згйирСз [ЩсоЩгІГІЩІ цианидиновая реакция (основана на восстановлении их в кислой среде с образованием окрашивания, к 2 мл извлечения добавляли 5-7 капель концентрированной хлористоводородной кислоты и 10-15 мг металлического цинка, нагревали на водяной бане в течение 2- 3 мин до появления розовой окраски), цианидиновая реакция по Брианту (позволяет определить агликоно-вую или гликозидную природу исследуемого вещества; к окрашенному продукту цианидиновой реакции добавляли 1/3 часть бутанола по объему, разбавляли водой, встряхивали. При этом пигменты гликозидов обнаруживались в воде, а агликоны - в слое органического растворителя; при добавлении к извлечению 1-2 капли 10%-го спиртоводного раствора натрия гидроксида раствор желтел). В результате проведенных качественных реакций в исследуемых образцах были обнаружены флавоноидные соединения. Детальное исследование состава фенольных соединений проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе (ВЭЖХ) фирмы «GILSTON» (модель 305, Франция) с ручным инжектором (модель RHEODYNE 7125, США) в изократическом режиме с последующей компьютерной обработкой результатов с помощью программы «Multichrom for Windows». В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6 х 250 мм KROMASIL С18 с величиной частиц 5 микрон, в качестве подвижной фазы-метанол-вода-фосфорная кислота концентриро-ванная-тетрагидрофуран, в соотношении 370:570:5:60. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента составляла 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа составила 60 мин. Регистрация осуществлялась при помощи УФ-детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151 при длине волны 254 нм. Для изучения состава фенольных соединений воздушно-сухое сырье (траву белокудренника черного) измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм (по ГОСТ 214-83). 1,26 г сырья помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли по 20 мл спирта этилового 70%-го, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спиртоводной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу объемом 25 мл и доводили спиртом этиловым 70%-м до метки (исследуемый раствор А). Параллельно готовили серию 0,05%-х растворов сравнения в 70%-м спирте этиловом: рутина, кверцетина, дигидрокверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, кемпферола, нарингенина, гиперозида, геспередина, апи-генина, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, неохло-рогеновой кислоты, коричной кислоты, цикориевой кислоты, феруловой кислоты, галловой кислоты, танина, эпика-техина, катехина, кумарина, дикумарина. Объем вводимой исследуемых растворов (А) и растворов сравнения (В) составлял 50 мкл. Идентификацию разделяемых веществ проводили путем сопоставления времени удерживания компонентов смеси со временем удерживания стандартных образцов. Количественное определение идентифицированных веществ в исследуемом образце проводили по площади пика, используя метод внутренней нормализации. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Результаты проведенных исследований приведены в табл. В результате проведенных исследований методом ВЭЖХ в траве белокудренника черного (рис.) установлено присутствие 15 веществ фенольной природы, из которых 3 идентифицированы как дубильные вещества (танин, катехин, эпикатехин), 1 как фенолкарбоновые кислоты (галловая кислота), 4 как флавоноиды (лютео- Результаты ВЭЖХ анализа фенольных соединений травы белокудренника черного № п/п Идентифицированные вещества Время удерживания, мин Площадь, мв*с Содержание в смеси, % (метод внутренней нормализации) 1 Таннин 2,958 13091,51 23,69 2 Катехин 3,892 2352,78 4,26 3 Эпикатехин 5,753 1513,43 2,74 4 Галловая кислота 3,289 4053,95 7,34 5 Изоферуловая кислота 4,081 6612,12 11,96 6 Хлорогеновая кислота 5,177 1828,79 3,31 7 Цикориевая кислота 6,414 4414,17 7,99 8 Феруловая кислота 14 990,45 1,79 9 Коричная кислота 28,83 1271,61 2,30 10 Лютеолин 7-гликозид 17,68 359,71 0,65 11 Лютеолин 15,31 631,70 1,14 12 Дигидрокверцетин 11,38 382,32 0,69 13 Рутин 20,56 865,69 1,57 14 Дикумарин 9,972 1576,88 2,85 15 О-метоксикумарин 34,11 332,80 0,60 Выпуск 4 (48). 2013 71 лин 7-гликозид, лютеолин, рутин, дигидрокверцитин), 2 как кумарины (дикумарин, о-метоксикумарин) и 5 как гидроксикоричные кислоты (изоферуловая, феруловая, цикориевая, хлорогеновая, коричная кислота). Методом внутренней нормализации установлено, что среди гид-роксикоричных кислот преобладает изоферуловая кислота, из флавоноидных соединений - рутин. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Исследование состава фенольных соединений белокудренника черного методом ВЭЖХ позволило идентифицировать флавоноиды: лютеолин 7-гликозид, лютеолин, рутин, дигидрокверцитин; фенолкарбоновые (галловая кислота) и гидроксикоричные (изоферуловая, феруловая, цикориевая, хлорогеновая, коричная кислота) кислоты, а также соединения, относящиеся к группе дубильных веществ (танин, катехин, эпикатехин). Таким образом, изученный качественный состав полифенольных соединений методом ВЭЖХ показал разнообразный состав и перспективность дальнейших исследований белокудренника черного в качестве источника нового лекарственного растительного сырья.

About the authors

A. V. Yanitskaya

I. Yu. Mitrofanova

Email: I.U.Mitrofanova@yandex.ru

References

Supplementary files