EXPLANATION OF PATHOFENICITY OF ORAL MICROORGANISMS DURING INFLAMMATORY PERIODONTAL DESEASE THERAPY WITH PROBIOTICS

Full Text

В этиологии воспалительных заболеваний паро- человека определяет необходимость ее исследования донта и в возникновении их осложнений ведущая роль не только в условиях нормы, но и при патологических принадлежит микроорганизмам полости рта [11]. процессах. Многообразие функций микробного биоценоза пи- В диагностическом плане при выявлении дисбиощеварительного тракта выражается в сложных взаим- за (дисбактериоза), а также для рационального обосноных связях микрофлоры с макроорганизмом, обеспе- вания коррегирующей бактериотерапии, изучение чивающих постоянство микробного пейзажа. Роль мик- свойств микробного спектра полости рта имеет перворофлоры в сохранении эубиоза (гомеостаза) организма степенное значение. 76 Выпуск 1 (49). 2014 ©зшірСз [ЩсоШтСІМЩ ЦЕЛЬ РАБОТЫ Целью нашего исследования являлось изучение факторов патогенности выделенных микроорганизмов (свойств персистенции и бактериоциногении) у лиц с генерализованными гингивитами и использование выраженности этих свойств в качестве ориентиров для обоснования эффективности противовоспалительной терапии. Для реализации цели нами были поставлены следующие задачи: 1. Разработать способы определения дисбиоза микрофлоры полости рта для использования их в качестве индикатора состояния микробиоценоза пациентов при заболеваниях пародонта: а) скрининговая оценка дисбиоза по выявлению в мазках со слизистой полости рта персистирующих бактерий с антилизоцимной (АЛА) и антиинтерферонной (АИА) активностями; б) выявление клонов с выраженной бактериоци-ногенностью (БЦГ) в смешанных популяциях микрофлоры полости рта пациентов с гингивитами. 2. Изучение фенотипической экспрессии свойств персистенции (АЛА и АИА), а также БЦГ микроорганизмов полости рта пациентов с гингивитами до и после лечения пробиотиками. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Были исследованы мазки со слизистой десен 43 пациентов с выраженными гингивитами, диагноз у которых подтвердился клиническими проявлениями - гиперемией, отечностью, кровоточивостью, болезненностью и др. Контрольную группу составляли 40 клинически здоровых лиц. В основу скринингового метода определения дис-биоза микрофлоры полости рта положены способы определения АЛА [5] и АИА [6], а также принцип «отсроченного антагонизма», применяемый для выявления бактериоциногенных свойств бактерий [7]. Мазки у исследуемых лиц брали стерильными ватными тампонами, смоченными агаризованным (0,1%-м) физиологическим (0,8%-м NaCl) раствором. Содержимое мазков засевали отпечатками на поверхность 1,5% агара Хоттингера в чашках Петри. Для определения АЛА агар Хоттингера содержал 5 и 10 мкг/мл препарата лизоцим (Олайнский завод химреактивов, объединения «Мосмедпрепараты» им. Л.Я. Карпова) с минимальными бактериоцидными концентрациями (МБК) для тест-культуры Micrococcus lysodecticus (штамм № 2665 ГИСК им. Т.А. Тарасевича). Для определения АИА в агар Хоттингера вносили человеческий лейкоцитарный интерферон (ЧЛИ) (НПО «Биомед», Пермь) в количестве 2МБК для тест-культуры Corinebacterium xerosis ГИСК № 181. Посевы инкубировали в термостате 24-48 ч при 37 оС. Бактерии в выросших макроколониях - бляшках исследуемых проб убивали парами хлороформа в течение 30 мин. После обработки хлороформом на микроколонии исследуемых проб наливали вторым слоем 3 мл 0,7%-й агаровой питательной среды Хоттингера, смешанной с 0,1 мл. 1-миллиардной взвеси суточной агаровой индикаторной для определения АИА тест-культуры C. xerosis 181, а для определения АЛА и бактериоциногенности исследуемых микроорганизмов -тест-культуры M. lysodecticus 2665. Выраженность свойств АИА, АЛА и бактериоциногенности микроорганизмов полости рта пациентов с гингивитами определяли до и после лечения (через 3-5 дней) пробиотиком «споробактерин жидкий», сконструированном на основе штамма Bacillus subtilis РАС КМ-115 [2], проявляющего ингибирующую активность по отношению к патогенным видам микроорганизмов и обладающего множественной лекарственной устойчивостью. Во всех случаях, как в группе пациентов с гингивитами, так и у здоровых лиц, количественная оценка выраженности персистирующих свойств микробного спектра осуществлялась в миллиметрах. Наличие АЛА, АИА и БЦГ < 1 мм считали отрицательным показателем, а 1-3 мм и > 3 мм - положительным показателем теста. Лечение препаратом «Споробактерин жидкий» проводили согласно Приказу № 231 Министерства здравоохранения РФ [10] в алгоритме 2 мл 2 раза в день за 20-30 мин до еды в течение 7-14 дней. Применительно к нашим наблюдениям мы ориентировались на устранение таких клинических проявлений, как гиперемия и отечность десен, кровоточивость, болезненность, изменение клинических симптомов путем определения индексных показателей состояния тканей пародонта, а также на исчезновение из микрофлоры пациентов микроорганизмов, обладающих АЛА, АИА и выраженной бактериоциногенностью. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с использованием общепринятых методов расчета средних арифметических величин, их средних ошибок, доверительных интервалов. Достоверность различий оценивали критерием Стьюдента при его величине менее 0,05 [1]. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Характеристика микрофлоры полости рта, регистрируемая в виде АЛА, АИА и БЦГ, у пациентов по своей выраженности была различной. Обнаруженные нами различия регистрируемых проявлений АЛА, АИА и бактериоциногенности сведены в табл. 1. В табл. отдельно не представлены материалы повторного определения АЛА, АИА и БЦГ микрофлоры полости рта пациентов через 3-5 дней после терапии пробиотиком, поскольку эти показатели достоверно не отличались от показателей контрольных групп. Как видно из табл. 1, уровень различий регистрируемых признаков у больных и здоровых лиц значителен. Наблюдаемые отклонения показателей являются статистически достоверными (р < 0,05). В 2 случаях выпадающие значения (табл. 1) контрольной Выпуск 1 (49). 2014 77 ©SSTOpßS ©ôffiïff Таблица 1 Выраженность свойств АЛА, АИА и БЦГ микрофлоры полости рта у пациентов с гингивитами и у здоровых лиц Группы Регистрируемый показатель Число обследованных Выраженность признака обследованных <1мм 1-3 мм >3 мм пациентов абс. % абс. % абс. % 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Больные гингивитом АЛА 43 12 27,9 26 60,4 5 11,6 здоровые 40 31 77,5 8 20 1* 2,5 Больные гингивитом АИА 30 9 30 19 63,3 2 6,7 здоровые 27 18 66,6 9 33,4 0 - Больные гингивитом 29 8 27,5 17 58,6 4 13,9 здоровые БЦГ 20 19 95 0 - 1 ** 5 *Выраженность АЛА микрофлоры больного ангиной; **выраженность БЦГ микрофлоры больного бронхитом. группы при определении АЛА* и БЦГ** могли быть обусловлены заболеваниями ангиной и бронхитом, что отразилось на характеристиках персистенции бактерий, направленной на преодоление механизмов резистентности хозяина. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий в современной литературе охарактеризованы широко [3]. Сохранение жизнеспособности микробных популяций в биоценозе осуществляется за счет приобретения (селекции) ими антагонистических эффектов, выражающихся в устойчивости к защитным механизмам макроорганизма [4]. Фенотипическая выраженность свойств персистенции АЛА и АИА, а также БЦГ микроорганизмов полости рта пациентов с гингивитами была изучена не только до, но и после лечения пробиотиком. Для доказательства эффективности применения препарата при хронических генерализованных гингивитах мы ориентировались на результаты проявления персистирующих свойств микробиоценоза и клинические показатели у пациентов в опытной и контрольной группах. Установлено, что применение споробактерина [8, 9] в течение 7-14 дней приводило к исчезновению в микробиоценозе полости рта пациентов микроорганизмов, обладающих АЛА, АИА и БЦГ, в резуль тате чего спектр микроорганизмов у излеченных и здоровых по выраженности свойств персистенции статистически не отличался. Данный период применения препарата оказался достаточным для нормализации изученных нами признаков микрофлоры полости рта, хотя не исключено, что полного очищения от патогенной флоры при применении монотерапии пробиотиком не происходило. Клинические наблюдения показали, что после лечения споробактерином у пациентов объективно устранены такие клинические проявления, как гиперемия и отечность десен, кровоточивость, зуд и жжение в области десен, то есть эффективность применения пробиотика подтверждена и по клиническим признакам. Для объективной оценки состояния пародонта до и после лечения пробиотиком «Споробактерин жидкий» определяли следующие индексы [12]: > индекс папиллярно-маргинально-альвеолярный (РМА); > числовое значение пробы Шиллера-Писарева (йодное число Свракова); > пародонтальный индекс (ПИ). Полученные нами данные динамики индексных показателей состояния тканей пародонта у пациентов с гингивитами сведены в табл. 2. Таблица 2 Динамика индексных показателей состояния тканей пародонта у пациентов с гингивитами Наименование группы Число больных Динамика показателей индекс РМА числовое значение пробы Шиллера-Писарева пародонтальный индекс (ПИ) до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения Основная (опытная) 43 1,996 0,0194 p < 0,001 2,76 0,042 p < 0,001 2,15 0,013 p < 0,001 78 Выпуск 1 (49). 2014 ©зшірСз [ЩсоШтСІМЩ По нашему мнению, основное фармокотерапев-тическое действие пробиотика проявляется на уровне пищеварительного тракта, оказывая антагонистическое действие в отношении патогенной микрофлоры и способствуя нормализации микробного спектра макроорганизма. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Нами изучена информативность методов выявления антилизоцимной и антиинтерферонной активности персистирующих бактерий в мазках со слизистой полости рта пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта. Кроме того, проведена оценка уровня бактериоциногенности клонов из популяции микробиоты полости рта пациентов с гингивитами. Предложенные способы выявления дисбиоза могут быть использованы в качестве индикатора состояния микробиоценоза полости рта пациентов. Обоснована целесообразность оценки свойств персистирующих бактерий для характеристики эффективности противовоспалительной терапии пробиотиком на основе B. subtilis - спо-робактерином. Достоинства методов (простота, доступность, неинвазивность) дают возможность рекомендовать их для использования в клинической стоматологии.

About the authors

I. A. Petrova

E. S Temkin

Email: elot@list.ru

N. I Matveeva

A. V Lipnitskiy

References

Supplementary files