EFFECT OF ORIGINAL SUBSTANCE 4-CHLOROPHENYL-2-HYDROXY-4-OXO-2-BUTENOATE THIAZOLINEAMMONIUM ON BLOOD CLOTTING AND THE DURATION OF BLEEDING

Full Text

Общим показанием к применению антикоагулянтов является опасность тромбообразования. Их широко используют в хирургической и терапевтической практике. Однако у применяемых в настоящее время пря мых антикоагулянтов имеются недостатки, которые ограничивают их использование. Так, основными недостатками стандартного нефрак-ционированного гепарина являются низкая биодоступ- Выпуск 1 (49). 2014 89 ность, отсутствие достоверной связи между величиной дозы и выраженностью эффекта. Отсюда возникает необходимость частых повторных определений показателей гемостаза. При применении гепарина возможны реакции в местах инъекций (уплотнение, раздражение, боль, гематома, некрозы кожи), головная боль, озноб, гипертермия, тошнота, рвота, запор. При введении препарата более 3 дней - развитие иммунной тромбоцитопении и остеопороза, существует риск возникновения гиперкали-емии за счет угнетения синтеза альдостерона, усиление тромбообразования после отмены препарата [5, 6]. Главным недостатком низкомолекулярных гепа-ринов является высокая стоимость лечения и риск развития геморрагических осложнений [5, 6]. При использовании фондапаринукса сообщалось о возникновении гематом, сыпи или зуда в местах подкожных инъекций, обратимом бессимптомном увеличении уровня аминотрансфераз в сыворотке крови, тромбоцитопении, возникновении головной боли, озноба, гипертермии, тошноты, запора, бессонницы, аллергических реакций [6]. Ингибиторы тромбина прямого действия с осторожностью следует применять при хронической почечной недостаточности даже умеренной степени (КК 30-50 мл/ мин), у пациентов пожилого возраста (старше 75 лет), массой тела менее 50 кг. Среди частых побочных эффектов препаратов этой группы являются кровотечения, абдоминальный синдром, повышение активности печеночных трансаминаз, послеоперационная серома, колебания артериального давления, инфекции, задержка мочи [6]. Кроме того, эти препараты являются дорогостоящими. Поэтому поиск новых соединений, обладающих антикоагулянтной активностью, является актуальным. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Исследование влияния впервые синтезированного вещества 4-хлорфенил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутено-ата тиазолинаммония (ФС 169) на свертывание цельной крови кроликов in vitro и in vivo и продолжительность кровотечения у мышей. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Исследование свертывания цельной крови проводилось с помощью коагулометра «Минилаб 701» [1]. Использовали цитратную (3,8 %) кровь беспородных кроликов. Для определения активности in vitro в кювету помещали 100 мкл крови и добавляли 100 мкл 0,2%-го раствора соединения ФС 169, для контроля вместо вещества добавляли 100 мкл изотонического раствора хлорида натрия. В качестве препарата сравнения использовали гепарин (1 ЕД/мл крови в 100 мкл изотонического раствора хлорида натрия). Затем пробы инкубировали в течение 60 с. Добавляли 100 мкл 1 %-го раствора хлорида кальция и приступали к измерению. Определение острой токсичности соединения ФС 169 проведено на беспородных мышах массой 18-30 г при внутрижелудочном введении [4]. ЛД_0 исследуемого соединения составила 3550 (2900-4200) мг/кг. Исследования in vivo проведены на беспородных кроликах массой 2-3 кг. Соединение ФС 169 вводили внутрижелудочно через зонд в дозе 90 мг/кг (1/40 ЛД^ при пероральном введении). Забор крови производили до введения и через 30, 60, 90 и 120 мин после введения соединения. Исследование влияния соединения ФС 169 на длительность кровотечения проводили по методу L. Stella [2] на беспородных мышах массой 20-25 г. Соединение ФС 169 вводили внутрижелудочно в дозе 355 мг/кг (1/10 от ЛД_0). После дозированного ранения (хвост мыши обрезался на 5 мм) вытекающую кровь осушали фильтровальной бумагой через каждые 15 с. О длительности кровотечения судили по времени от момента среза до прекращения кровотечения. Фиксировалось время окончания кровотечения до введения соединения и через 1 и 2 ч после введения. При повторных исследованиях удаляли струп с поверхности раны. Результаты обработаны статистически способом вариационной статистики по методу Фишера-Стьюдента [2]. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ При исследовании влияния на свертывание цельной крови in vitro были получены следующие данные (табл. 1). Как видно из табл. 1, соединение ФС 169 in vitro значительно удлиняет время свертывания крови. Его эффективность сопоставима с уровнем активности гепарина. Данные, полученные при внутрижелудочном введении соединения ФС 169, представлены в табл. 2. Результаты свидетельствуют о том, что соединение действует при внутрижелудочном введении, достаточно быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта. Максимальная активность отмечается после 30 мин после введения и равна 133,0 % от исходного уровня свертывания крови. Продолжительность эффекта составляет 120 мин. При исследовании влияния соединения ФС 169 на длительность кровотечения получены результаты, приведенные в табл. 3. Таблица 1 Влияние соединения ФС 169 и гепарина на свертывание крови in vitro Исследуемое Время свертывания, с; контроль Время свертывания, с; опыт % изменения Количество Р вещество свертываемости исследований (n) ФС 169 141,30 ± 7,28 540,10 ± 88,82 -282,2 6 <0,01 Гепарин 145,70 ± 9,64 618,30 ± 55,88 -324,4 9 <0,001 Примечание. Р. - в сравнении с контролем. 90 Выпуск 1 (49). 2014 Таблица 2 Влияние соединения ФС 169 на свертывание крови при внутрижелудочном введении Интервал Время свертывания, с % изменения свертываемости n Р Исходная свертываемость 111,7 ± 4,66 10 30 мин 260,30 ± 8,41 -133,0 10 <0,001 60 мин 232,30 ± 21,18 -108,0 10 <0,001 90 мин 223,70 ± 27,37 -100,3 10 <0,01 120 мин 134,50 ± 5,32 -20,4 10 <0,01 Примечание. Здесь и далее: Р. - в сравнении с исходной свертываемостью. Таблица 3 Влияние соединения ФС 169 на длительность кровотечения Показатель Длительность кровотечения, с % изменения продолжительности кровотечения n Р Исходная длительность кровотечения, контроль, с 455,6 ± 32,81 8 Через 1 час после введения ФС 169 1225,0 ± 57,94 -168,9 8 <0,001 Через 2 часа после введения ФС 169 613,1 ± 49,54 -34,6 8 <0,05 Результаты, представленные в табл. 3, свидетельствуют о том, что данное соединение достоверно увеличивает длительность кровотечения после внутриже-лудочного введения мышам на 168,9 % через 1 ч после введения и на 34,6 % через 2 ч после введения. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, полученные в результате исследования данные свидетельствуют о том, что вещество ФС 169 относится к 3-му классу токсичности, то есть является умеренно токсичным. Оказывает действие при внутрижелудочном введении. Действует в организме кроликов и мышей. Достаточно быстро всасывается. Наиболее выраженный эффект на свертывание цельной крови при внутрижелудочном введении отмечается уже через 30 мин после введения соединения. Вещество значительно замедляет свертывание крови. Продолжительность эффекта соединения ФС 169 при внутрижелудочном введении сохраняется в течение 2 ч. Следовательно, данное вещество является перспективным для дальнейших углубленных исследований.

About the authors

A. V Starkova

Email: allaperm@list.ru

B. Ya Syropyatov

F. V Sobin

N. A Pulina

References

Supplementary files