USING HPLC AND CAPILLARY ELECTROPHORESIS FOR QUANTIFYING COSTUNOLIDE AND DEHYDROCOSTUSLATONE IN LAUREL LEAVES

Full Text

Наличие столь ценных фармакологических свойств у костунолида и дегидрокостуслактона позволяет рассматривать сырье, их содержащее, как перспективное для внедрения в медицинскую практику. При создании нормативной документации на лекарственное растительное сырье важнейшим этапом является разработка методики количественного определения основных биологически активных веществ [5, 6]. Накоплено большое количество данных о высокой фармакологической активности сесквитерпеновых лактонов [2, 3, 4]. Особый интерес вызывают костунолид и дегидрокостуслактон (рис. 1), которые содержатся в различных растениях (лавр благородный, соссю-рея горькая, соссюрея лопуховидная и др.). Это связано с высокой активностью их при лечении рака, вирусных и микробных инфекций, язв и способностью проявлять антисептический, противовоспалительный, ранозаживляющий и глистогонный эффект [1, 7-10]. Рис. 1. Химическая структура костунолида (А) и дегидрокостуслактона (В) ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение возможности использования ВЭЖХ и капиллярного электрофореза для количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона в растительных объектах. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ В качестве объектов исследования использовали высушенные листья лавра благородного, собранные на территории Краснодарского края (г. Геленджик) и в Рес- 18 Выпуск 4 (52). 2014 A B 2 2 публике Абхазия (г. Сухуми) в 2014 г. В качестве стандартных образцов использовали костунолид и дегид-рокостуслактон производства компании Sigma, с содержанием действующих веществ не менее 97 и 98 % соответственно. Для количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона методом ВЭЖХ использовали хроматографическую систему для ВЭЖХ «Стайер» (компания «Аквилон», Россия). В работе применялась колонка Luna С 8 «Phenomenex, USA». Размер колонки 250 X 4,6 мм. Ввод пробы осуществлялся с помощью петлевого дозатора. Объем пробы 20 мкл. Элюирование проводилось в изократическом режиме. Элюент А- ацетонитрил, элюент B - 0,05 М раствор кислоты фосфорной, в соотношении 60 : 40. Расход подвижной фазы 1 мл/мин. Детектирование проводилось спектрофотометрически при 210 нм. Для количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона использовался также метод капиллярного электрофореза. Работу проводили на системе капиллярного электрофореза Капель 105 (группа компаний «Люмэкс», Россия). В работе применялся термостатируемый кварцевый капилляр с рабочей длиной 65 см и диаметром 75 мкм. Ввод пробы осуществлялся гидродинамически при 150 мБар х с. Опыт проводили при температуре 20 оС и напряжении 20 кВ (блок положительной полярности). Детектирование осуществляли спектрофотометрически при 210 нм. Учитывая нейтральный характер изучаемых соединений (рис. 1), эксперимент проводили в условиях мицеллярной элект-рокинетической хроматографии (МЭКХ), при этом в качестве ведущего электролита использовали раствор, содержащий натрия тетрабората декагидрат (концентрация 2 мг/мл), натрия додецилсульфат (концентрация 10 мг/мл) и мочевину (концентрация 400 мг/мл). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Предварительно было установлено, что двойная экстракция метанолом при соотношении сырья - экстрагент 1 : 250 обеспечивает максимальный выход определяемых веществ. Методика количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона. Точную навеску (около 0,1 г) листьев лавра благородного, высушенных и измельченных до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром пор 3 мм, помещали в коническую колбу, прибавляли 25 мл метанола и кипятили с обратным холодильником в течение 30 мин. Полученное извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 50 мл. Операцию повторяли, объединяя полученные извлечения, и доводили тем же растворителем до метки. Затем 1 мл полученного извлечения переносили в пробирки типа Эппендорф, центрифугировали при 8000 мин-1 в течение 10 мин и использовали для анализа (в случае ВЭЖХ). Типичная хроматограмма извлечения из листьев лавра благородного представлена на рис. 2. Рис. 2. Хроматограмма метанольного извлечения из листьев лавра благородного При анализе капиллярным электрофорезом 1 мл полученного по приведенной выше методике метанольного извлечения выпаривали в токе теплого воздуха и растворяли в 1 мл смеси электролит - вода (1 : 10). После чего центрифугировали при 8000 мин-1 в течение 10 мин и использовали для анализа. Типичная электро-фореграмма извлечения из листьев лавра благородного представлена на рис. 3. Рис. 3. Электрофореграмма извлечения из листьев лавра благородного Количественное определение изучаемых сескви-терпеновых лактонов в исследуемых образцах проводили методом сравнения со стандартными образцами. Результаты количественного определения косту-нолида и дегидрокостуслактона в листьях лавра благородного, собранных в Абхазии (г. Сухуми) и Краснодарском крае (г. Геленджик), в пересчете на абсолютно сухое сырье, представлены в таблице. Результаты количественного определения костунолида и дегидрокостуслактона в образцах листьев лавра благородного в пересчете на абсолютно сухое сырье Место сбора Содержание, % ± SD костунолид дегидрокостуслактон ВЭЖХ КЭ ВЭЖХ КЭ г. Геленджик 0,99 ± 0,05 0,97 ± 0,06 0,11 ± 0,01 0,12 ± 0,01 г. Сухуми 0,99 ± 0,05 0,92 ± 0,06 S'S О О) 1+ 0,24 ± 0,01 Выпуск 4 (52). 2014 19 ЩШгорСз [ЩсмеТКЩ Таким образом, данные, полученные методом капиллярного электрофореза, достоверно подтверждают результаты ВЭЖХ-анализа костунолида и дегидрокостуслактона в листьях лавра благородного, что свидетельствует об их достоверности. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Показана возможность использования как ВЭЖХ, так и капиллярного электрофореза в анализе костунолида и дегидрокостуслактона. При этом на примере листьев лавра благородного обоими методами получены сопоставимые по количественному содержанию результаты.

About the authors

S. P. Senchenko

N. M. Nasuhova

L. A. Agova

D. A. Konovalov

Email: d.a.konovalov@pmedpharm.ru

References

Supplementary files