EMBRYO-FETOTOXIC ACTION OF NEW PURINE NUCLEOSIDE ADENOSINE WITH ANTIDEPRESSANT ACTIVITY

Full Text

Pregnant female rats, organogenesis, fetogenesis, nucleoside derivative, psychotropic drugs. Новое соединение с антидепрессивной активностью является ароматическим аналогом пуринового нуклеозида аденозина, под лабораторным шифром ВМА 99-82 [6]. В экспериментальных исследованиях у данного соединения, наряду с антидепрессивной активностью [5], выявлено анксиолитическое и противовирусное действие [4-6]. По результатам токсикологических исследований было показано, что вещество ВМА 99-82 относится к 3-му классу умеренно токсичных соединений (ГОСТ 12.1.007.76), ЛД_0 которого при внутрижелудочном введении крысам составляет 4811,7 мг/кг [1, 2, 3, 8]. В настоящее время решается вопрос о дальнейшем более углубленном изучении вещества ВМА 99-82. По данным литературы известно, что использование препаратов с антидепрессивной (трициклические антидепрессанты, селективные ингибиторы обратного захвата серотонина и ИМАО) и анксиолити-ческой активностью (бензодиазепины) в течение беременности не повышает риск пороков развития и уродств [10]. Учитывая важность изучения на доклиническом уровне процессов репродукции и эмбриогенеза, сочли целесообразным исследовать данные аспекты действия у нового аналога пуринового нуклеозида аденозина под лабораторным шифром ВМА-99-82. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение влияния вещества ВМА 99-82 на процессы эмбрио- и фетогенеза, регистрируемые в антенатальный период развития плодов. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 140 беспородных вир-гинных белых крысах самках 4-мес. возраста, доставленных из специлизированного питомника Государственного унитарного предприятия научно-исследовательского института гигиены труда и профпатологии МЗ РФ г. Волгограда (НИИ ГТиП, г Волгоград) и прошедших 2-недельный карантин в виварии НИИ фармакологии. Содержание животных и проведение на них манипуляций соответствовало нормативным требованиям, изложенным в «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (Часть первая). - М.: Гриф и К, 2012 [7]. При проведении экспериментов забеременевших крыс-самок, накануне ссаженных с интактными крыса-ми-самцами, делили на 4 опытные и 3 контрольные группы. Опытным группам крыс-самок вещество ВМА 99-82 вводили внутрижелудочно в различные периоды беременности. В период органогенеза (с 6-го по 16-е дни беременности) вводили вещество ВМА 99-82 в дозах 10 мг/кг (составляет 1 /480 от ЛД_0 и соответствует терапевтически эффективной дозе - 1-я опытная группа) и 150 мг/кг (составляет 1 /32 от ЛД_0 и превышает терапевтически эффективную дозу в 15 раз-2-я опытная группа). В период имплантации и плацентации (с 1-го по 6-й день беременности) и фетогенеза (с 16-го по 19-е дни беременности) вводили вещество ВМА 99-82 в дозе 150 мг/кг (соответственно 3-я и 4-я опытные группы). Контрольным группам крыс самок в эти же периоды беременности вводили внутрижелудочно дистиллированную 70 Выпуск 3 (59). 2016 воду в объеме 20 мл /кг. Данный объем дистиллированной воды использовался при растворении исследуемого вещества. В период наблюдений у беременных крыс-самок отмечали общее состояние, поведение, массу тела (г). На 20-й день беременности крыс самок подвергали эвтаназии (метод дислокации шейных позвонков), [7]. На вскрытии у них выделяли яичники и рога матки. В яичниках подсчитывали число желтых тел беременности, а в рогах матки - количество живых, мертвых и резорбированных плодов. На основании полученных данных вычисляли пред- и постимплантационную гибель плодов [7]. Выделенные из рогов матки плоды тщательно осматривали на предмет обнаружения внешне видимых аномалий и уродств развития, измеряли их краниокаудальные размеры (см) и массу тела (г). Результаты экспериментов подвергали статистической обработке с использованием пакета программ Microsoft Exœl и Statistika 6.0. О достоверности изменений судили с помощью /-критерия Стьюдента. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ По результатам наблюдений общего состояния беременных крыс в опытных и контрольных группах существенных различий не выявлено. При этом шерстный покров у них был гладкий и лоснящийся, слизистые оболочки - прозрачными и видимые кожные покровы - чистыми. Вместе с тем, в период введения вещества ВМА 99-82 в поведении у беременных крыс-самок отмечались тенденции седации, которые более ярко прослежи вались у 2-й опытной группы беременных крыс-самок. При этом реакции на внешние раздражители (болевые, слуховые, тактильные) у 1-й и 2-й опытных групп беременных крыс-самок не отличались от данных контроля. По результатам наблюдений за динамикой прироста массы тела у беременных крыс-самок опытных групп достоверных различий относительно контрольных групп не обнаружено. Вместе с тем, обращает на себя внимание тенденция дозозависимого снижения прироста массы тела у крыс-самок, получавших вещество ВМА 99-82 в период органогенеза (табл. 1). Снижение прироста массы тела у этих животных прослеживалось после отмены введения вещества (с 16-го по 20-й дни беременности). За этот период прирост массы тела у крыс-самок в контроле составил 35 г, а в 1-й и 2-й опытных группах - 27 г и 18,4 г (соответственно). Можно предположить, что снижение прироста массы тела у беременных крыс после отмены введения вещества ВМА 99-82 обусловлено наличием эффектов привыкания к препарату. Данное предположение в какой-то степени согласуется с более ранними исследованиями [4-6], которые установили в основе механизма активирующее влияние на серотонин-, норадре-налин- и дофаминергическую системы мозга. При этом, по результатам изучения прироста массы тела крыс-самок, получавших вещество ВМА 99-82 в периоды эмбрио- и фетогенеза, подобного эффекта не было обнаружено. Результаты вскрытия крыс-самок на 20-й день беременности, получавших вещество ВМА 99-82 в период органогенеза, представлены в табл. 2. Таблица 1 Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 6-16 дни беременности) на прирост массы тела (г) беременных крыс (М ± m) Периоды измерений, дни Варианты опытов, дозы веществ контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 1 вещество ВМА 99-82 (10 мг/кг) опытная группа 2 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг) Исход 210,20 ± 2,03 209,70 ± 1,19 208,8 ± 1,2 6 227,20 ± 2,69 224,90 ± 2,16 225,00 ± 1,86 16 260,40 ± 3,01 260,90 ± 2,75 261,00 ± 2,77 20 295,00 ± 4,03 287,4 ± 4,8 279,40 ± 3,32* *p < 0,01 результаты достоверны относительно контрольной группы 1. Таблица 2 Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 6-16 дни беременности) на процессы эмбрионального развития плодов (М ± m) Исследуемые параметры (на 1 самку) Варианты опытов (дозы веществ) контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 1 вещество ВМА 99-82 (10 мг/кг) опытная группа 2 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг) Желтые тела (количество) 12,60 ± 0,22 11,2 ± 0,4* 12,80 ± 0,52 Места имплантаций (количество) 10,90 ± 0,53 10,20 ± 0,36 10,20 ± 0,73 Резорбции (количество) 0,30 ± 0,13 0,20 ± 0,08 0,50 ± 0,18 Доимплантационная гибель (%) 12,90 ± 4,19 8,60 ± 1,93 20,50 ± 4,81 Послеимплантационная гибель(%) 2,50 ± 1,04 1,40 ± 0,75 5,90 ± 2,24 Количество плодов 10,60 ± 0,52 10,10 ± 0,35 9,70 ± 0,76 Размеры (см) 3,10 ± 0,04 3,10 ± 0,02 3,10 ± 0,03 Масса (г) 2,30 ± 0,05 2,40 ± 0,06 2,30 ± 0,06 *p < 0,01 результаты достоверны относительно контрольной группы 1 Выпуск 3 (59). 2016 71 ЩШгорСз [ЩсмеТКЩ Из представленных в таблице данных видно, что относительно контрольных групп у крыс-самок опытных групп произошло снижение количества желтых тел беременности в 1-й опытной группе на 11,1 % (p < 0,01), тогда как у крыс самок 2-й опытной группы различий не обнаружено. При этом количество мест имплантаций в рогах матки у данных опытных групп животных существенно не различалось с таковыми у контрольной группы. Однако в рогах матки у животных 2-й опытной группы отмечено повышение количества резорбиро-ванных плодов (66,7 %, p > 0,05), тогда как у 1-й опытной группы данные практически не отличались относительно контрольных величин. В этой связи у крыс самок 1-й опытной группы общая эмбриональная гибель была ниже контрольных значений, а у крыс самок 2-й опытной группы данные показатели были, наоборот, выше: доимплантационной гибели на 58,9 % (p > 0,05) и постимплантационной гибели плодов - в 2,4 раза (p > 0,05). При анализе вещества ВМА 99-82, вводимого беременным крысам-самкам с 1-го по 6-й и с 16-го по 19-е дни беременности, не отмечено каких-либо повреждающих эффектов. Вместе с тем у беременных крыс-самок 3-й опытной группы отмечена недостоверная тен денция снижения мест имплантаций, резорбций и количества плодов относительно контроля (табл. 3). В связи с этим у самок данной опытной группы доимплантационная гибель плодов была достоверно повышена на 90,5 % (p < 0,05), тогда как постимпланта-ционная гибель плодов практически не отличалась от контрольных значений. У беременных крыс самок 4-й опытной группы число желтых тел беременности, мест имплантаций и резорбций, а также и плодовитость были на уровне контрольных значений (табл. 4). В этой связи у самок данной опытной группы доимплантационная гибель плодов не изменялась, а по-стимплантационная гибель плодов недостоверно снижалась на 59,4 % (p > 0,05). При визуальном обследовании плодов от самок опытных и контрольных групп не выявлено внешне видимых аномалий развития и уродств, а также не зарегистрировано и погибших плодов. Вместе с тем, при осмотре внешнего состояния плодов от самок 1-й и 2-й опытных групп различий с контролем не обнаружено, но было отмечено дозозависимое снижение количества плодов в рогах матки и отсутствие изменений по краниокаудальным размерам и по массе тела. Внешнее состояние плодов от самок 3-й опытной группы Таблица 3 Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 1-6 дни беременности) на процессы эмбрионального развития плодов (М ± m) Исследуемые параметры (на 1 самку) Варианты опытов (дозы веществ) контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 3 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг) Желтые тела (количество) 11,7 ± 0,7 12,00 ± 0,58 Места имплантаций (количество) 10,4 ± 0,6 9,60 ± 0,54 Резорбции (количество) 0,30 ± 0,14 0,20 ± 0,09 Доимплантационная гибель (%) 10,60 ± 3,07 20,20 ± 2,34* Послеимплантационная гибель (%) 1,90 ± 1,05 2,10 ± 1,05 Количество плодов 10,10 ± 0,55 9,40 ± 0,54 Размеры (см) 3,10 ± 0,05 3,20 ± 0,04* Масса (г) 2,10 ± 0,07 2,30 ± 0,05** *p < 0,05; **p < 0,01 результаты достоверны относительно контрольной группы 2. Таблица 4 Влияние вещества ВМА 99-82 (внутрижелудочно, 16-19 дни беременности) на процессы эмбрионального развития плодов (М ± m) Исследуемые параметры (на 1 самку) Варианты опытов (дозы веществ) контрольная группа вода дистиллированная (20 мл/кг) опытная группа 4 вещество ВМА 99-82 (150 мг/кг) Желтые тела (количество) 10,6 ± 0,6 10,40 ± 0,64 Места имплантаций (количество) 9,50 ± 0,73 9,30 ± 0,55 Резорбции (количество) 0,20 ± 0,12 0,20 ± 0,08 Доимплантационная гибель (в %) 12,40 ± 3,76 10,00 ± 2,92 Послеимплантационная гибель(в %) 2,40 ± 1,45 1,50 ± 0,81 Количество плодов 9,30 ± 0,72 9,10 ± 0,54 Размеры (см) 3,20 ± 0,03 3,20 ± 0,02 Масса (г) 2,30 ± 0,03 2,30 ± 0,03 72 Выпуск 3 (59). 2016 также не различалось с контролем, но было отмечено недостоверное снижение количества плодов и достоверное повышение массы тела (12,1 %, p < 0,01) и их краниокаудальных размеров (4,9 °%, p < 0,05). У плодов от самок 4-й опытной группы внешнее состояние, плодовитость, а также краниокаудальные размеры и масса тела не различались с контрольными величинами. Таким образом, из результатов проведенных исследований можно заключить, что ароматический аналог пуринового нуклеозида аденозина, вещества под лабораторным шифром ВМА 99-82, при внутрижелудоч-ном введении беременным крысамсамкам в периоды: органогенеза в дозах 10 и 150 мг/кг; имплантации и пла-центации, фетогенеза в дозе 150 мг/кг не обладает эм-бриотоксическим и тератогенным действием. При этом вещество ВМА 99-82 в различные периоды беременности не оказывает патологического влияния на общее состояние крыс самок, а также и на процессы эмбрио-, органо- и фетогенеза, регистрируемые в антенатальном периоде развития плодов крыс. Вместе с тем не отмечено отрицательного влияния вещества ВМА 99-82 на качество антенатального развития плодов, общей эмбриональной гибели, плодовитости и процессов фе-тогенеза. При этом у плодов под действием вещества ВМА 99-82 не отмечено уродств и внешне видимых аномалий развития. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 1. Новый ароматический аналог пуринового нуклеозида аденозина, вещество под лабораторным шифром ВМА 99-82, не обладает эмбрио- и фетотоксическим действием, регистрируемым в антенатальном периоде развития плодов крыс. 2. Новый ароматический аналог пуринового нук-леозида аденозина при внутрижелудочном введении беременным крысам (вещество ВМА 99-82) в дозах 10 и 150 мг/кг не вызывает уродств и внешне видимых аномалий развития и не угнетает качество антенатального развития плодов крыс. ЛИТЕРАТУРА

About the authors

T. D. Denisova

Volgograd State Medical University

Email: tanyaddenisova@mail.ru

J. A. Mazanova

Volgograd State Medical University

L. I. Bugaeva

Volgograd State Medical University

A. A. Ozerov

Volgograd State Medical University

References

Supplementary files