ISOLATION AND IDENTIFICATION OF THE COMPONENT COMPOSITION OF THE AERIAL PARTS OF INULA BRITANNICA L

Abstract

The article presents the results of the isolation and identification of the major groups of biologically active substances in the aerial parts of Inula britannica L. by using a preparative thin-layer chromatography followed by a spectrophotometry. We identified two biologically active substances, a chlorogenic acid and luteolin.

Full Text

Выделение и идентификация отдельных компонентов сложного химического состава растительных объектов становится все более актуальным и наиболее перспективным направлением научных исследований современной фармакогнозии. Изучение растительных объектов с точки зрения позиционирования в качестве возможных источников получения лекарственных препаратов предполагает проведение крупномасштабных и полноценных исследований их химического состава. Выделение основных групп биологически активных веществ позволяет прогнозировать фармакологическую активность сырья. В настоящее время большое внимание уделяется растительным объектам - источникам фенилпропа-ноидов. Гидроксикоричные кислоты обладают широким спектром фармакологической активности. В частности, обуславливают адаптогенный, тонизирующий и иммуномодулирующий эффекты таких официнальных растений, как эхинацея пурпурная, родиола розовая, элеутерококк колючий, лимонник китайский и т. д., гепатоп-ротекторные и антиоксидантные свойства расторопши пятнистой, седативные свойства мелиссы лекарственной [1, 2, 3, 5, 6]. Количество растений, содержащих в своем составе фенилпропаноиды, невелико, в связи с чем рас ширение сырьевой базы представляется актуальным. В настоящее время ведутся интенсивные исследования в данной области [1, 4]. По предварительным скрининговым исследованиям, надземная часть девясила британского (Inula britannica L.) содержит в своем составе флавоноиды и гидроксикоричные кислоты [7]. По количественному характеру данные группы биологически активных веществ являются доминирующими. В связи с этим, перспективным является более подробное изучение индивидуальных компонентов указанных групп веществ с целью разработки методики количественного определения и стандартизации растительного сырья, а также прогнозирования возможной фармакологической активности. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Выделение и идентификация основных групп биологически активных веществ надземной части девясила британского методом препаративной тонкослойной хроматографии с последующим спектрофотометрическим анализом. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Материалом для исследования служила надземная часть (воздушно-сухое сырье) девясила британского, за 126 Выпуск 3 (59). 2016 готовленная на территории Кумылженского района Волгоградской области в июне-августе 2015 года. Сырье было заготовлено в фазу полного цветения в местах естественного произрастания растительных объектов от дикорастущих популяций и высушено естественным путем. Для исследования растительное сырье было предварительно измельчено до размеров частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм. Определение компонентного состава надземной части девясила британского проводили методом препаративной хроматографии. Для этого точную навеску (1,0 г) измельченного растительного сырья помещали в колбу вместимостью 250 мл, добавляли 70%-й спирт этиловый, присоединяли обратный холодильник и нагревали на водяной бане в течение 30 минут с момента закипания смеси. По истечении времени содержимое колбы охлаждали и полученный экстракт фильтровали. Одновременно готовили растворы стандартных образцов флавоноидов (рутина, кверцетина, лютеолина, ци-нарозида) и фенилпропаноидов (кофейной и хлорогено-вой кислот). Препаративное выделение проводили методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ», которые предварительно выдерживали в сушильном шкафу при температуре около 100 оС в течение 1 часа для активации сорбента. Хроматографирование проводили в системе растворителей хлороформ : этиловый спирт : вода в соотношении 26 : 16 : 3. Результаты разделение компонентов оценивали при просмотре хроматограмм в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм. Идентификацию отдельных компонентов проводили методом спектрофотометрического анализа в диапазоне длин волн 200-600 нм. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В результате исследования компонентного состава надземной части девясила британского были обнаружены 12 зон (рис. 1). Зона 1 - наиболее ярко выраженная зона соответствовала хлорогеновой кислоте. При снятии УФ-спек-тра данная зона имела характерные пики поглощения при длинах волн 217, 243, 290 и 330 нм (рис. 2). При просмотре в УФ-свете при длине волны 366 нм данная зона имела характерную и довольно яркую флуоресценцию. По количественным характеристикам можно говорить, что данное вещество является доминирующим. Зоны № 2 и 3 имели характерную бирюзовую флуоресценцию. При снятии УФ-спектра обнаруживался основной пик при 328 нм. Можно предполагать о наличии производных кофейной кислоты. Зона 4-зона предполагаемых флавоноидов (гли-козидной природы). На УФ-спектре обнаруживались два пика при длинах волн 257 и 335 нм. При добавлении 3%-го спиртового раствора алюминия хлорида наблюдается сдвиг в более длинноволновую область на 430 нм (рис. 3). Зоны 5, 6 и 7-также зоны предполагаемых флаво-ноидов. Визуально не обнаруживаются, однако при наблюдении в УФ-свете имеют выраженную флуоресценцию. Восьмая зона - зона, видимая визуально, также является зоной предполагаемых флавоноидов. В УФ-свете наблюдалась яркая коричневая флуоресценция. При снятии УФ-спектра обнаруживались пики при длинах волн 258 и 355 нм. При добавлении 3%-го спиртового раствора алюминия хлорида наблюдается небольшой сдвиг до 269 нм. Поскольку сдвиг незначительный, можно говорить о присутствии агликонов. Параллельно снимали УФ-спектры растворов ГСО кверцетина и лютеолина. По результатам анализов делаем вывод о наличии лютеолина (рис. 4). Зоны 9 и 10 - зоны фенилпропаноидов. В УФ-свете имеют голубую и фиолетовую флуоресценцию. Можно предполагать наличие производных коричной либо кумаровой кислот. Одиннадцатая зона соответствует зоне каротино-идов. При снятии УФ-спектра наблюдались пики при Рис. 1. Хроматограмма состава надземной части девясила британского - = Выпуск 3 (59). 2016 127 ІШторСз [ЩсміППЩІ длинах волн 400 и 450 нм, что свидетельствует о наличии ß-каротина (рис. 5). Рис. 2. Спектр поглощения водно-спиртового экстракта надземной части девясила британского (зона 1 - хлорогеновая кислота) Рис. 3. Спектр поглощения зоны 4 - предполагаемых флавоноидов: 1 - водно-спиртовой экстракт надземной части девясила британского; 2 - экстракт с добавлением 3%-го спиртового раствора алюминия хлорида Рис. 5. Спектр поглощения водно-спиртового экстракта надземной части девясила британского (зона 11 - каротиноиды) Двенадцатая зона визуально видимая - зона хлорофилла. При снятии УФ-спектра наблюдались пики при длинах волн 400 и 680 нм (рис. 6). Рис. 4. Спектр поглощения водно-спиртового экстракта надземной части девясила британского (зона 8 - лютеолин) Рис. 6. Спектр поглощения водно-спиртового экстракта надземной части девясила британского (зона 12 - хлорофилл) ЗАКЛЮЧЕНИЕ