ANALYTICAL AND CLINICAL ASPECTS OF MEASURING URINARY CYSTATIN C LEVELS IN PREGNANT WOMEN

Full Text

Cystatin C, pregnancy, preeclampsia, renal tubular injury. Беременность, осложненная преэклампсией, приводит к увеличению как материнской, так и неонатальной заболеваемости и смертности. Клинические проявления болезни чрезвычайно многообразны, протекать она может неделями до того как будет установлен диагноз. Существующие методы ранней диагностики риска развития заболевания (на сроке 11-14 недель) далеки от совершенства [4], в то время как своевременно не распознанный риск вносит в материнскую смертность значительную долю из-за не соответствующего клиническому случаю лечения. В настоящее время определение содержания цистатина С в сыворотке (или плазме) крови признано как ценный подтверждающий тест при хронических заболеваниях почек [1, 2, 5]. Повышение уровня этого белка в сыворотке крови отмечается также при беременности (с особенностями при преэклампсии во 2-3 триместрах [6]). Однако данные о возможности использования этого маркера для ранней диагностики преэклампсии достаточно неоднозначны [8]. В норме, цистатин С практически полностью разлагается в почках после фильтрации и в моче содержится лишь в незначительных количествах (~0,1 мг/л), так же как и при гломерулярной дисфункции, в то время как при тубулярной дисфункции его содержание в моче может повышаться до (4,31 ± 3,85) мг/л. Однако данные о клинической значимости этого показателя также весьма неоднозначны [7, 9]. При определении цистатина С могут быть использованы 2 иммунохимических метода: турбидиметричес-кий (анализ проводится на обычных клинических биохимических анализаторах) и, более точный, нефеломет-рический (необходимо специальное оборудование) [10]. Это, наряду с высокой биологической вариабельностью показателя и асимметрией его распределения, вызывает также вопрос о значении диагностического порога при использовании того или иного способа определения цистатина С в моче. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Расчет аналитических характеристик иммунотур-бидиметрического метода определения концентрации цистатина С и исследование его содержание в моче беременных. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Определение концентрации цистатина С в моче иммунотурбидиметрическим методом [10] проводили с использованием коммерческого набора фирмы «DiaSys» для сыворотки крови. Измерения проводили через 1 сутки после калибровки прибора «Sapphire 400» (Hirose Electronic Systems, Japan). Для определения предела обнаружения согласно ГОСТ-Р-ИСО-11843-2-2007 (ПО1) использовали 6 разведений калибровочного раствора цистатина С («DiaSys») физиологическим раствором (I = 6, в диапазоне концентраций от 0,05 до 0,45 мг/л) в 5 приготовлениях (J = 5). При исследовании влияния матрицы калибровочный раствор разводили нативной или депротеинизированнй мочой. Депротеи-низированную мочу получали путем центрифугирования нативной мочи в пробирках «Vivaspin 15R 5000 MWCO» (Vivascience AG). Для определения предела обнаружения согласно ГОСТ-Р-ИСО-11843-3-2007 (соответствует рекомендациям IFCC) в качестве «малых концентраций» использовали концентрации аналита 0,05 мг/л (ПО2) и 0,1 мг/л (ПО3). Все измерения проводились дважды (L и K = 2). Выпуск 4 (60). 2016 121 ІШторСз Определение содержания цистатина C проводили в утренней порции мочи беременных, полученных МУЗ «Женская консультация №1» г. Волгограда в течение 2 календарных недель при первом или плановом обращении. Характер течения беременности был прослежен в 60 случаях. Из них: 15 беременных I триместра (в последующем - преэклампсия у 3, без особенностей - 11); 24 беременных II триместра (в последующем - преэклампсия у 1, без особенностей - 21); 21 беременная III триместра (1 с диагнозом преэклампсия, без особенностей - 9). К анализу привлекались только результаты, полученные при первом обращении беременной в женскую консультацию в данном триместре. Для определения параметров уравнения линейной регрессии и параметров распределения беременных по уровню цистатина C в моче (медиана, 2,5%, 25%, 75%, 97,5% квантили) использовали функции программы Excel. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Аналитические характеристики метода. Результаты исследования функции отклика метода приведены в табл. Поскольку коэффициент детерминации (R2) превышал 0,97, то для расчета предела обнаружения вполне применим метод ГОСТ-Р-ИСО-11843-2-2007 (ПО1). Результаты расчетов предела обнаружения по ГОСТ-Р-ИСО-11843-3-2007 (ПО2 и ПО3, табл.) для матриц, свободных от аналита, близки значениям ПО1. Вместе с тем, значения, полученные при использовании в качестве матрицы нативной мочи, значительно выше. То есть, корректный расчет предела обнаружения по ГОСТ-Р-ИСО-11843-3-2007 возможен только тогда, когда возможно получить матрицу, свободную от аналита. Полученные оценки предела обнаружения для турбидиметрического метода (ПО1, табл.), в том числе для случая депротеинизированной мочи, были кратно больше значений, установленных для нефелометричес-кого метода (0,008 мг/л). Далее, в качестве порога обнаружения, использовали максимальное значение ПО1, полученное в условиях разведения калибратора нативной мочой (0,065 мг/л). Анализ зависимости смещения измеренного значения показателя от приготовленного (В% = 100 * (С - С ) / С ) и коэффициента v измеренная приготовленная7 приготовленная7 ~г ~г “і вариации (КВ) от концентрации (рис. 1) показал, что при концентрациях аналита 0,1 мг/л и выше B % не превосходит 5 %, а КВ % -15 %. Судя по характеру зависимости (рис. 1), значения КВ % становятся меньше 10 %, начиная с концентраций аналита ~ 0,17 мг/л, вне зависимости от типа матрицы. Рис. 1. Зависимость смещения и коэффициента вариации метода от концентрации цистатина С Исследование содержания цистатина С в моче беременных. Результаты измерения концентрации цистатина С в утренней порции мочи беременных женщин приведены на рис. 2. Предел обнаружения 15%>КВ>10% Преэклампсия I тр.: Без особенностей - f а -Р ЮС / -а ^-н - - * * □ ! 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 Измеренная концентрация цистатина С, мг/л Рис. 2. Распределение беременных по уровню цистатина С в моче с учетом диагноза в амбулаторной карте и триместра беременности. Особенности отдельных клинических случаев: А - анемия; П - пиелонефрит; Г - гломерулонефрит; #беременная без особенностей в анамнезе с повышенным уровнем цистатина С Параметры зависимости (C = a + b * С ) и пределы обнаружения (мг/л) ~ ~ ' измеренная приготовленная7 г п г/ \ / иммунотурбидиметрического метода определения цистатина C в моче* Матрица a (M ± m) b (M ± m) ПО1 ПО2 ПОэ 0,9% NaCl 0,005 ± 0,004 0,975 ± 0,016 0,036 0,043 0,044 Депротеинизированная моча 0,005 ± 0,004 1,00 ± 0,02 0,040 0,049 0,041 Нативная моча** 0,096 ± 0,007 0,979 ± 0,03 0,065 0,28 0,29 *R2 > 0,97 для всех 3 матриц; "измеренный уровень аналита в образце, использованном для разведения калибратора (M ± m), (0,14 ± 0,01) мг/л. 122 Выпуск 4 (60). 2016 Отметим, что при использованном нами сочетании оборудования и реагентов в 36 случаях (60 %) результат измерения оказался ниже установленного предела обнаружения. Однако параметры распределения для женщин без особенностей в течение беременности оказались близки к параметрам контрольных групп, полученным в других исследованиях [3, 9]. В противовес характеру динамики цистатина С в плазме или сыворотке крови, где рост содержания этого белка повышается во 2 и 3 триместрах, более высокие значения показателя были получены для мочи беременных 1 триместра. Несколько повышенные (выше 0,25 мг/мл) уровни белка были обнаружены только в 2 случаях: 1 - у беременной с диагнозом «пиелонефрит» и 1 - у беременной 3 триместра без особенностей в диагнозе. В целом же, уровень белка у женщин с преэклампсией и гломерулярным пиелонефритом находился в пределах, характерных для женщин с нормальным течением беременности (рис. 2). Это наблюдение полностью согласуется с данными литературы [3], где преэклампсия даже в тяжелых случаях (интерквартильный размах альбумина составлял 151-1164 мкг/мг креатинина) сопровождалась лишь незначительным статистически не достоверным повышением цистатина С в моче. ЗАКЛЮЧЕНИЕ В результате проведенной работы было установлено, что для беременных характерно увеличение содержания цистатина С в моче в 1 триместре. Получен референтный интервал цистатина С в моче для беременных, равный 0,17-0,25 мг/л. Следует отметить, что выдвинутая гипотеза о повышении уровня цистатина С в моче беременных с преэклампсией не оправдалась. Нами не были найдены диагностически значимые различия по содержанию цистатина С мочи в группах беременных, следовательно, он не может быт

About the authors

A. N. Trifonova

Email: Aleksandra-ok@rambler.ru

O. V. Ostrovskiy

V. E. Verovskiy

A. A. Kareva

References

Supplementary files