HEALING OF BLEEDING EXPERIMENTAL DEFECTS OF THE STOMACH WITH TOPICAL ANILOVIN AND PLATELET-RICH PLASMA

全文:

Одной из проблем абдоминальной хирургии является кровоточащая гастродуоденальная язва и эндоскопический гемостаз, по-прежнему, не удовлетворяющий медиков [1, 2, 4, 5, 6]. Решающим в исходе заболевания являются два фактора: то, насколько быстро удается достигнуть стойкого гемостаза и насколько скоро заживает язвенный дефект как источник кровотечения [3, 7, 8, 9]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучить морфологические особенности заживления кровоточащих дефектов желудка при местном лечении биологически активным дренирующим сорбентом аниловином и обогащенной тромбоцитами плазмой в эксперименте. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Экспериментальное исследование проведено на 12 беспородных собаках обоего пола массой от 10 до 15 кг на основании разрешения Этического комитета ФГБОУ ВО ВГМУ им. Н. Н. Бурденко Минздрава России от 26.05.2016 г. Все исследования проводились в строгом соответствии с законодательством Российской Федерации, положениями Директивы 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях (Статья 27), а также требованиями и рекомендациями Руководства по содержанию и использованию лабораторных животных. В результате прове денного исследования ни одно животное не пострадало. После завершения эксперимента все животные были возвращены в питомник. Каждому лабораторному животному (собаке) под внутривенным наркозом (золетил 100 - 7,5 мг/кг массы тела животного) проводилась фиброгастродуоденос-копия, во время которой в области малой кривизны желудка воспроизводили по два кровоточащих дефекта желудка, один из которых был опытным, другой - контрольным. Таким образом, исследования были проведены на 24 экспериментальных кровоточащих дефектах желудка. В 12 опытных дефектах остановку кровотечения производили путем нанесения на кровоточащую дефект желудка биологически активного дренирующего сорбента нового поколения - аниловина с последующей аппликацией на него обогащенной тромбоцитами аутоплазмы (ОТП) животного (заявка на изобретение № 2016148270). Лечение опытных язв аниловином и ОТП проводили животным через день. В 12 контрольных дефектах желудка оценивали время самопроизвольной остановки кровотечения и сроки заживления. Для изучения морфологических особенностей заживления опытных и контрольных экспериментальных дефектов желудка животным через день производилась динамическая фиброгастроскопия с обязательным взятием гастробиопсий из краев и дна дефектов желудка. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином для обзорных целей. Коллагеновые волокна 130 Выпуск 2 (62). 2017 üssmipEs ©шПГ выявлялись с использованием пикро-фуксина по методике Ван Гизона, нейтральные гликопротеиды - при помощи ШИК-реакции, ретикулиновые волокна - с использованием азотнокислого серебра. Окрашенные срезы микроскопировали при увеличении х 100 и х 400. Результаты исследования обрабатывали в программном пакете MSExcel. Рассчитывали показатели описательной статистики: среднее, среднеквадратическое отклонение, среднюю ошибку средней арифметической, моду, медиану. Достоверность различий между двумя исследуемыми группами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ В ходе эксперимента в опытных дефектах желудка сразу после пневмоинсуффляции на кровоточащий дефект аниловина и аппликации ОТП наступала быстрая остановка кровотечения. Превратившись в защитный слой гидрогеля, лекарственный состав надежно защищал образовавшийся тромб и дефект желудка от агрессивных факторов желудочного содержимого. Под этим эластичным гидрогелевым слоем происходило заживление опытных дефектов желудка. Повторную лечебную эндоскопию в опытных язвах осуществляли через день. На основе морфологического исследования гастробиопсий, полученных из 24 экспериментальных дефектов желудка у собак, представлена динамика заживления моделированных язв в условиях их лечения аниловином и ОТП. У животных, получавших эндоскопическое лечение аниловином и обогащенной тромбоцитами плазмой, на (3,50 ± 0,19) сутки р < 0,01) наблюдения воспалительные изменения в виде отека, полнокровия сосудов и смешанно-клеточной инфильтрации сохранялись, однако степень их выраженности была гораздо меньшей, чем в первый день исследования. НГП располагались в основном в средней части слизистого слоя крупными группками. У контрольных животных в эти сроки исследования видимых изменений не выявлено: сохранялся выраженный отек, отмечалась очагово-диффузный стромальный отек и смешанно-клеточная инфильтрация, состоящая из примерно равного числа лимфоцитов и нейтрофилов. В опытных дефектах желудка уже на (3,42 ± 0,29) сутки р < 0,01) лечения наблюдались признаки регенерации покровно-ямочного эпителия: были видны кистозно-расширенные железы с признаками сосочковой пролиферации их эпителиальной выстилки, в части микропрепаратов в слизистом и поверхностных отделах подслизистого слоя отмечалось большое количество полнокровных тонкостенных сосудов с очаговым скоплением лимфоцитов и нейтрофилов вокруг. Данная морфологическая картина говорит о наличии грануляционной ткани в опытных язвах (рис. 1а). В контрольных дефектах желудка в эти сроки наблюдения сохранялись признаки язвенного повреждения в виде участков десквамации и изъявления, на поверхности были видны участки скопления фибрина с примесью гемолизированных эритроцитов и лейкоцитов, сохранялись признаки острого воспалительного процесса, о чем говорило увеличение количества ней-трофилов в соединительно-тканной строме (рис. 1б). На (8,08 ± 0,19) сутки р < 0,01) лечения анилови-ном и обогащенной тромбоцитами плазмой в опытных дефектах морфологическая картина биопсийного материала представлена слизистой обычного строения без видимых признаков патологических изменений. Анализ клеточного и волоконного компонентов показал признаки развития репаративных процессов, которые характеризовались увеличением абсолютного и относительного количества фибробластов и увеличением количества нежных ретикулярных волокон преимущественно в под-эпителиальном слое. Клетки, богатые нейтральным а б Рис. 1. Морфологическая картина опытной (а) и контрольной (б) язв желудка. 5 день наблюдения. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. х 100 Выпуск 2 (62). 2017 131 ІШторСз гликопротеидами, располагались как в поверхностных, так и в глубоких слоях слизистой оболочки. В контрольных дефектах в эти же сроки наблюдения в толще слизистого слоя определялись большое количество кистозно-расширенных желез, эпителий в них был частично десквамирован в просвет, заполненный плотными розоватыми массами, по морфологии сходными со слизью. В подслизистом слое определялось разрастание соединительно-тканных волокон. На (12,50 ± 0,23) сутки наблюдения в микропрепаратах контрольных язв под эпителиальной выстилкой видны участки с очагами отека и кровоизлияния. В подслизистом слое отмечается разрастание рыхлой и плотной соединительной ткани. Среди клеточного компонента преобладали фибробласты, а среди волоконного-кол-лагеновые волокна (рис. 2а). В микропрепаратах контрольных язв желудка лишь на (15,50 ± 0,31) сутки (р < 0,01) наблюдения определялась слизистая оболочка относительно сохран ного вида с выраженным фиброзом в подслизистом слое. Этот факт свидетельствует о формировании грубого рубцового дефекта на месте заживления (рис. 2б). Динамика заживления моделированных язв желудка в условиях их лечения аниловином и ОТП представлена в таблице. Динамика морфологических процессов заживления в опытных и контрольных язвах желудка у собак, сут. Показатели Опытные язвы (М ± m) Контрольные язвы, (М ± m) p-level Появление грануляций 3,42 ± 0,29 6,50 ± 0,19 p < 0.01 Стихание воспаления 3,50 ± 0,19 9,25 ± 0,25 p < 0.01 Начало эпителизации 4,17 ± 0,24 9,42 ± 0,26 p < 0.01 Заживление 8,08 ± 0,19 15,50 ± 0,31 p < 0.01 а б Рис. 2. Микропрепарат контрольной язвы желудка на 12 день (а) и 18 день (б). Окраска гематоксилин-эозин. Ув. х 100 ЗАКЛЮЧЕНИЕ Экспериментальные исследования по применению аниловина в сочетании с обогащенной тромбоцитами плазмой для местного лечения моделированных кровоточащих язв желудка у собак позволили заклю чить, что они обладают как гемостатической активностью,

作者简介

E. Cherednikov

Voronezh State Medical University named after N.N. Burdenko

Department of Faculty Surgery

S. Barannikov

Voronezh State Medical University named after N.N. Burdenko

Email: svbarannikov@rambler.ru
Department of Faculty Surgery

K. Fursov

Voronezh State Medical University named after N.N. Burdenko

Department of Faculty Surgery

G. Polubkova

Voronezh State Medical University named after N.N. Burdenko

Department of Faculty Surgery

V. Danilenko

Voronezh State Medical University named after N.N. Burdenko

Department of Faculty Surgery

D. Stepanov

Voronezh State Medical University named after N.N. Burdenko

Department of Faculty Surgery

参考

补充文件