EXTRACTION-PHOTOMETRIC DETERMINATION OF PYRIDOSTIGMINE BROMIDE AS A METABOLITE IN MODEL MIXTURES

Full Text

Extraction and photometric determination, pyridostigmine bromide, 1-methyl-3-pyridone, tropeoline 00, forensic medical examination. Экстракционно-фотометрическое определение лекарственных веществ, содержащих третичный атом азота, достаточно широко используется в фармацевтическом анализе. Разработаны методики определения действующих веществ как в лекарственных формах, так и биологических жидкостях, что позволяет использовать их в судебно-медицинской экспертизе, в том числе при несмертельных отравлениях, где высоки требования к экспрессности исследования. Метод имеет преимущество в тех случаях, когда непосредственное определение вещества невозможно, а выделение из сложных смесей затруднено тем, что вещества имеют близкие физико-химические свойства [1, 2, 4, 5]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Разработка методики количественного определения экстракционно-фотометрическим методом азотсодержащего лекарственного средства в биологических жидкостях в виде метаболита. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Объектом исследования являлся 1-метил-3-пири-дон, основной продукт метаболизма пиридостигмина бромида [3], полученный в результате щелочного гидролиза препарата. В предварительных испытаниях было установлено, что 1-метил-3-пиридон хорошо растворим в воде, этиловом спирте, максимум поглощения в водно-спиртовой среде при рН = 3 регистрировался при длине волны (290 ± 2) нм [6]. Раствор бромфенолового синего водорастворимого и раствор тропеолина 00 готовили путем растворения 0,01 г красителя в водно-спиртовой среде, приготовленной в соотношении 1:1, в мерной колбе вместимостью 100 мл с последующим доведением объема той же смесью растворителей до метки. рН буферных растворов контролировали с помощью иономера лабораторного И-160МИ. Спектры поглощения и оптическую плотность измеряли на спектрофотометре Shimadzu UV-1800 (Япония) в кюветах Выпуск 3 (63). 2017 23 ІШторСз кварцевого стекла толщиной слоя 10 мм. В качестве растворителя ионных ассоциатов выбрали хлороформ, который обладает наибольшей экстрагирующей способностью. Аликвоты раствора 1-метил-3-пиридона концентрацией 5,06 • 10-5 г/мл помещали в мерные колбы вместимостью 50 мл, в каждую добавляли около 20 мл водноспиртовой смеси, буферный раствор, раствор красителя и хлороформ, интенсивно встряхивали в течение 5 мин и доводили водно-спиртовой смесью до метки, после чего снова встряхивали в течение 3 мин. По истечении 1020 мин наблюдали полное разделение водной и органической фаз, отделяли хлороформный слой и измеряли оптическую плотность исследуемого раствора в интервале длин волн от 250 до 700 нм. В качестве раствора сравнения использовали хлороформ. Для приготовления модельных смесей с биологическими жидкостями использовали мочу. К аликвоте биологической жидкости добавляли навеску препарата (120 мг), настаивали в течение 45 мин, затем к смеси добавляли 1,0 г NaF и настаивали еще в течение 15 мин. По истечении времени в стакан прибавляли 30 мл этилового спирта 95%-го и настаивали в темном месте 30 мин. Извлечение центрифугировали и сливали в фарфоровую чашку. Затем центрифугат выпаривали досуха на водяной бане. Сухой остаток гидролизовали 30%-м раствором NaOH на водяной бане в течение 30-40 мин, затем снова выпаривали досуха. После охлаждения остаток смывали смесью спирта этилового 96%-го и воды (1:1), центрифугировали, фильтровали через бумажный фильтр «белая лента» в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили до метки смесью спирта этилового 96% и воды (1:1), создавали pH = 2,7 одномолярным раствором H2SO4. 5 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили до метки смесью спирта этилового 96%-го и воды (1:1), поддерживая значение pH = 2,7. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Образование ионных ассоциатов 1-метил-3-пири-дона и выбранных красителей происходило в кислой среде (рН = 2,7 или рН = 4,0) (рис. 1.), причем при рН = 2,7 степень извлечения комплекса в органический слой была максимальной. При рН = 8 и рН = 11 образование ионных ассоциатов не происходило, что подтверждалось отсутствием максимумов поглощения на спектрах хлороформных экстрактов и окраской растворов. Максимумы поглощения комплекса 1-метил-3-пи-ридона и бромфенолового синего регистрировали при X = 283 нм и X = 425 нм. Максимум поглощения комплекса с тропеолином 00 регистрировали при длине волны 420 нм (рис. 2.). Оптимальное соотношение водной и органической фаз составило 2:1. Изменение времени экстракции от 10 до 40 минут и температуры в интервале 15-25 °С не влияло на полноту экстракции образующегося комплексного соединения красителя с метаболитом. Рис. 1. Спектры хлороформных извлечений из растворов при рН = 2,7: 1 - раствор бромфенолового синего; 2 - ионный ассоциат 1-метил-3-пиридона с бромфеноловым синим; 3 - раствор 1-метил-3-пиридона Рис. 2. Спектр хлороформного извлечения из раствора ионного ассоциата 1-метил-3-пиридона с тропеолином 00 при рН = 2,7 Установлено, что в пределах концентраций метаболита 0,01012 • 10-5-0,1518 • 10-5 г/мл оптическая плотность хлороформных экстрактов ионных ассоциатов метаболита и красителя тропеолин 00 подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера (рис. 3). Растворы ионных ассоциатов с красителем бромфеноловым синим закону Бугера-Ламберта-Бера не подчинялись. Вероятно, это связано с тем, что в выбранных условиях эксперимента 1-метил-3-пиридон с бромфеноловым синим образует два вида комплексных соединений различного состава, однако это предположение требует дополнительных исследований. Таким образом, для количественного определения метаболита пиридостигмина бромида экстракционно-фотометрическим методом можно использовать краситель тропеолин 00. nm nm 24 Выпуск 3 (63). 2017 ©зеторСз [gofiïijf3 Рис. 3. Градуировочный график для количественного определения 1-метил-3-пиридона в виде ионных ассоциатов с красителем тропеолин 00 При экстракционно-фотометрическом определении метаболита пиридостигмина бромида с красителем тропеолин 00 методом введено-найдено в модельных смесях были получены следующие результаты (табл.). Количественное определение пиридостигмина бромида в виде метаболита в модельных смесях № п/п Найдено Метролгические характе ристики 1-метил-3пиридона, г пиридостигмина бромида, г пиридо стигмина бромида, % 1 1,82 • 10 ‘2 4,32 • 10 ‘2 85,45 X = 81,50 % S = 3,981 Ss = 1,780 АХ = 4,948 2 1,78 • 10 ‘2 4,24 •■ 10 ‘2 83,79 3 1,60 • 10 ‘2 3,79 • 10 ‘2 74,98 4 1,74 • 10 ‘2 4,13 • 10 ‘2 81,62 5 1,74 • 10 ‘2 4,13 • 10 ‘2 81,62 Разработанный метод позволяет определить содержание метаболита азотсодержащего лекарственного средства в модельных смесях в присутствии соэкст-рактивных веществ. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Разработана методика экстракционно-фотометрического определения пиридостигмина бромида в виде метаболита (1-метил-3-пиридона) в модельных смесях с красителем тропеолин 00. Метод характеризуется высокой чувствительностью, простотой выполнения, экспрессно-стью. Относительная ошибка определения, вычисленная с доверительной вероятностью 0,95 на превышает 5 %. ЛИТЕРАТУРА

About the authors

M. I. Aloykhina

Voronezh State Medical University them. N.N. Burdenko

Email: pharmchem.vgma@mail.ru

T. N. Nikitina

Voronezh State Medical University them. N.N. Burdenko

V. K. Schormanov

Kursk State Medical University

References

Supplementary files