ВЛИЯНИЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ АНАЛОГОВ ИНДОЛИЦИДИНА НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИНДЕКСЫ У КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ПАРОДОНТИТОМ

Полный текст

ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение противовоспалительного действия синтетических аналогов АМП индолицидина на основе анализа динамики интегральных гематологических индексов. Пародонтит остается самой частой формой патологии орофасциальной области, и его распространенность среди взрослого населения достигает 75 % [6]. Учитывая ведущую роль пародонтопатогенных микроорганизмов в возникновении пародонтита и недостаточную эффективность антибиотиков при этом заболевании, поиск новых фармакологических средств для коррекции пародонтита остается актуальной проблемой [1]. Большой интерес исследователей вызывают антимикробные пептиды (АМП), которые не только обладают широким спектром антимикробной активности, но и обладают рядом важных свойств: крайне низкая вероятность формирования устойчивости микроорганизмов к АМП в связи с особенностями их механизма действия, а также невозможность их накопления в организме [7, 8]. При исследовании потенциальных антибиотиков возникает необходимость в использовании незатратных и информативных методов, которые адекватно позволяют оценить противовоспалительные эффекты препарата. Таким методом может быть расчет гематологических индексов, которые доказали свою эффективность при прогнозировании тяжести воспалительного процесса и вероятности развития осложнений [3]. Большой интерес исследователей вызывают антимикробные пептиды (АМП), которые не только обладают широким спектром антимикробной активности, но и обладают рядом важных свойств: крайне низкая вероятность формирования устойчивости микроорганизмов к АМП в связи с особенностями их механизма действия, а также невозможность их накопления в организме [7, 8]. ВЕСТНИК Во н ГМУ проверки нормальности распределения изучаемых параметров. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ У крыс контрольной группы установлено снижение индекса Кребса на протяжении всего эксперимента по сравнению с интактными животными (табл.). Так, на 3-и сутки после удаления нити уменьшение указанного индекса составило 15,9 % (р < 0,01), а на 21-е сутки эксперимента такое падение составило 43,2 % (р < 0,001). У крыс с пародонтитом, которым вводили исследуемые аналоги индолицидина № 7 и 8, не установлено статистически достоверных отличий значений указанного индекса по сравнению с животными контрольной группы (р > 0,05). При анализе изменений коэффициента Бредекка только на 21-е сутки после снятия нити установлено существенное увеличение коэффициента Бредекка у контрольных крыс (на 38,5 %, р < 0,05). Отсутствовали статистически достоверные отличия коэффициента Бредекка у животных контрольной и опытных групп на протяжении всего эксперимента. У крыс контрольной группы отмечалось падение ИСНМ на протяжении всего эксперимента. На 3-и сутки падение составило 35,4 % (р < 0,05), а на 21-е сутки - 80,7 % (р < 0,001). Применение аналогов индолицидина № 7 и 8 оказывало влияние на динамику ИСНМ. Так, на 3-и сутки эксперимента у крыс с пародонтитом, которым вводили индолицидины № 7 и 8, показано снижение указанного индекса на 24,2 и 25,8 % соответственно по сравнению с животными контрольной группы (р < 0,05). На 14-е сутки при применении индолицидина № 7 снижение составило 13,7 %, а при использован ии индолицидина № 8 - 15,7 % (р < 0,05). У крыс контрольной группы установлено снижение ИСЛМ на 7-21-е сутки эксперимента. Уменьшение указанного индекса на 7-е сутки составило 49,1 % (р < 0,05), а на 21-й день - 60,6 % (р < 0,01). Не установлено статистически достоверных различий между значениями ИСЛМ у крыс контрольной и опытных групп на протяжении всего эксперимента (р > 0,05). Динамика ИСЛЭ характеризуется следующими особенностями: увеличение показателя в контрольной группе на 7-21-е сутки эксперимента. На 7-й день повышение составило 174,6 % (р < 0,01), а на 21-е -227,2 % (р < 0,001). Применение аналогов индолицидина не оказывало существенного влияния на указанный показатель на протяжении всего периода наблюдения (р > 0,05). МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 32 крысах-самцах Вистар. Животные были разделены на следующие группы: интактная группа - 8 крыс, контрольная группа (моделирование пародонтита и введение физраствора) - 8 крыс, первая опытная группа (моделирование пародонтита и введение индолицидина № 7) -8 крыс, вторая опытная группа (моделирование пародонтита и введение индолицидина № 8) - 8 крыс. Экспериментальный пародонтит моделировали по методу, предложенному Воложиным А.И. и Виноградовой С.И. [1]. Нить оставляли на 14 дней, а затем удаляли. Исследования проводили с соблюдением положений, изложенных в Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации о гуманном отношении к лабораторным животным (2000 г.), директивы Европейского сообщества (86/609EC). Выполнение исследований разрешено Региональным этическим комитетом (протокол № 3 от 27 октября 2015 г.). У оперированных животных забирали периферическую кровь в объеме 0,5 мл на 3, 7, 14 и 21-е сутки эксперимента из хвостовой артерии путем резекции кончика хвоста. Аналогично получали периферическую кровь у интактных крыс. Определяли количество лейкоцитов в камере Горяева и подсчитывали лейкоцитарную формулу в мазках крови, окрашенных по Романовскому - Гимзе. Рассчитывали следующие интегральные гематологические индексы: 1) индекс Кребса (отношение нейтрофилов к лимфоцитам); 2) коэффициент Бредекка (отношение лимфоцитов к палочкоядерным нейтрофилам); 3) индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов (ИСНМ); 4) индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов (ИСЛМ); 5) индекс соотношения лимфоцитов и эозинофилов (ИСЛЭ); 6) лейкоцитарный индекс (ЛИ) (отношение лимфоцитов к нейтрофилам) [5]. Для коррекции пародонтита применяли синтетические аналоги природного индолицидина: пептид № 7 (H--ILe-Leu-Pro-Trp-Lys-Lys-Pro-Trp-Lys-Pro-Trp-Arg-Arg-NH2) и пептид № 8 (H--Ile-Lys-Pro-Trp-Lys-Trp-Pro-Trp-Lys-Pro-Trp-Arg-Arg-NH2) (ООО «НПФ «Верта», Санкт-Петербург, Россия)». Использованные в работе аналоги индолицидина подобно природному пептиду обладают высокой антимикробной активностью, не проявляя, однако, присущее ему гемолитическое действие. Индолицидины № 7 и 8 предварительно растворяли в физиологическом растворе и вводили внутрибрюшинно в дозе 500 мкг/кг в объеме 0,2 мл один раз в день в течение 7 дней, начиная со дня снятия нити. Указанные дозы были выбраны на основании данных литературы и предшествующих экспериментов. Крысам контрольной группы аналогичным образом вводили физиологический раствор. Статистическую значимость различий средних величин вычисляли по t-критерию Стьюдента после между контрольной группой и животными, получавшими индолицидины № 7 и 8, установлены только на 14-е сутки наблюдения: при введении пептида № 7 рост индекса составил 10,8 % (р < 0,05), а пептида № 8 - 12,2 % (р < 0,05). индолицидинов № 7 и 8 [4]. Макрофаги не только выступают в роли фагоцитов, но и секретируют комплекс цитокинов, запускающих реакции пролиферации и заживления в области повреждения [2]. По данным литературы, ИСНМ позволяет судить о соотношении микрофагального и макрофагального звена системы врожденного иммунитета [6]. Полученные нами данные позволяют сделать вывод о стимулирующем влиянии аналогов индолицидина на макрофагальный компонент этой системы. Известно, что ЛИ отражает взаимоотношение гуморального и клеточного звеньев иммунной системы [6]. Его повышение указывает, в первую очередь, на включение гуморальных иммунных механизмов в процессе развития пародонтита. Отсутствие статистически достоверных изменений ИСЛМ у крыс с пародонтитом при введении У животных контрольной группы отмечено статистически достоверное увеличение ЛИ в течение всего эксперимента. Так, на 3-и сутки увеличение составило 17,5 % (р < 0,001), а на 21-е сутки - 72,5 % (р < 0,001). Статистически достоверные отличия ЛИ Полученные нами результаты указывают на закономерные изменения интегральных гематологических индексов в процессе развития экспериментального пародонтита, связанные со сменой нейтрофильной фазы лейкоцитоза на моноцитарную и, в дальнейшем, на лимфоцитарную. Именно уменьшением содержания в крови палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов и повышением в крови моноцитов объясняется снижение индекса Кребса, ИСЛМ, ИСНМ, а также увеличение коэффициента Бредекка и ЛИ. В работе установлено статистически достоверное влияние исследованных аналогов индолицидина на ИСНМ. Подобное действие можно объяснить стимулирующим влиянием индолицидинов на моноцитарно-макрофагальный пул клеток. Ранее нами показано усиление адгезивной способности перитонеальных макрофагов у крыс с пародонтитом под влиянием Гематологические индексы у крыс с пародонтитом контрольной группы и группы крыс, получавших индолицидины № 7 и 8 Показатель Срок эксперимента, сут. Интактная Контрольная Пародонти + Индоли-цидин № 7 Пародонтит + Индоли-цидин № 8 Индекс Кребса (индекс нейтрофилы/ лимфоциты) 3 0,44 ± 0,01 0,37 ± 0,01хх 0,37 ± 0,01 0,38 ± 0,01 7 0,32 ± 0,01ххх 0,31 ± 0,01 0,33 ± 0,01 14 0,30 ± 0,01ххх 0,27 ± 0,01 0,26 ± 0,01 21 0,25 ± 0,01ххх 0,25 ± 0,01 0,25 ± 0,01 Коэффициент Бредекка (индекс лимфоциты/ ПЯ нейтрофилы) 3 24,7 ± 2,5 20,9 ± 1,1 19,7 ± 1,3 19,9 ± 1,4 7 26,9 ± 2,7 22,7 ± 2,2 21,0 ± 1,1 14 25,9 ± 2,6 30,3 ± 2,7 31,1 ± 2,4 21 34,2 ± 2,1х 32,6 ± 2,4 35,8 ± 1,6 Индекс соотношения нейтрофилов и моноцитов 3 19,2 ± 2,8 12,4 ± 0,9х 9,4 ± 0,81 9,2 ± 0,91 7 7,2 ± 0,8ю“ 6,9 ± 0,4 7,6 ± 0,8 14 5,1 ± 0,2ххх 4,4 ± 0,21 4,3 ± 0,21 21 3,7 ± 0,2ххх 3,3 ± 0,1 3,7 ± 0,3 Индекс соотношения лимфоцитов и моноцитов 3 44,2 ± 6,8 31,2 ± 2,2 25,0 ± 2,2 27,6 ± 2,3 7 22,5 ± 2,3х 22,0 ± 1,1 23,2 ± 2,1 14 17,4 ± 0,7хх 16,5 ± 0,9 16,3 ± 0,8 21 14,5 ± 0,8хх 13,3 ± 0,5 14,6 ± 0,8 Индекс соотношения лимфоцитов и эозинофилов 3 21,3 ± 2,1 34,0 ± 7,9 46,2 ± 7,0 52,0 ± 1,7 7 58,5 ± 6,7хх 68,1 ± 4,6 62,9 ± 5,9 14 68,5 ± 4,7ххх 69,9 ± 4,8 65,3 ± 6,2 21 69,8 ± 4,6ххх 69,9 ± 4,7 65,4 ± 6,2 Лейкоцитарный индекс (лимфоциты/ нейтрофилов) 3 2,29 ± 0,03 2,69 ± 0,05ххх 2,69 ± 0,03 2,65 ± 0,06 7 3,13 ± 0,04ххх 3,20 ± 0,06 3,20 ± 0,06 14 3,43 ± 0,08ххх 3,80 ± 0,041 3,85 ± 0,071 21 3,95 ± 0,06ххх 4,00 ± 0,08 4,03 ± 0,05 хр < 0,05 по сравнению с интактной группой, гхр < 0,01 по сравнению с интактной группой, хххр < 0,001 по сравнению с интактной группой, 1р < 0,05 по сравнению с контрольной группой. пептидов № 7 и 8 объясняется увеличением содержания обоих типов клеток. Показано ранее, что этот индекс отражает взаимоотношение аффекторно-го и эффекторного звеньев иммунного ответа [6]. Результаты работы позволяют заключить, что исследованные индолицидины № 7 и 8 оказывают стимулирующее действие как на аффекторное, так и на эффектор-ное звенья иммунного ответа. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, полученные в работе данные позволяют сделать вывод, что противовоспалительное действие аналогов индолицидина связано с повышением активности макрофагального звена врожденного иммунитета, а также аффекторного и эффекторного звеньев гуморального иммунного ответа. При сравнительном анализе не установлено особенностей влияния индолицидина № 7 и 8 на интегральные гематологические индексы у крыс с экспериментальным пародонтитом.

Об авторах

Игорь Валериевич Кутепов

ФГАОУ ВО «Белгородский национальный исследовательский университет»

Email: kutepov-iv@yandex.ru
соискатель кафедры фармакологии и клинической фармакологии Медицинского института

Ю. Д Ляшев

ФГАОУ ВО «Белгородский национальный исследовательский университет»

кафедра фармакологии и клинической фармакологии

М. А Затолокина

ФГБОУ ВО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

кафедра гистологии, эмбриологии, цитологии

Список литературы

Дополнительные файлы