POSTNATAL DEVELOPMENT OF POSTERITIES FROM FEMALE RATS TREATED WITH ADEPROFEN DURING PREGNANCY

Full Text

Новый аналог пуринового нуклеозида аденозина (адепрофен) обладающий антидепрессивной активностью [1] и низкой токсичностью (ЛД50 при внутри-желудочном введении крысам составляет 4 811,7 мг/кг) [2, 3, 4], в раннее проведенных доклинических исследованиях по оценке репродуктивной токсичности показал отсутствие влияния на процессы антенатального развития плодов при условии введения беременным крысам © Бугаева Л.И., Денисова Т.Д., Мазанова Ю.А., Мелихова Н.С., Озеров А.А., 2021 самкам в период органо- и фетогенеза в дозах 10 мг/кг (экспериментально терапевтическая доза) и 150 мг/кг (15-кратная терапевтическая доза) [5]. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Исследовать отдаленное влияние адепрофена при его введении беременным крысам самкам в дозе 150 мг/кг на развитие потомства крыс в онтогенезе. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 40 потомствах крыс, от беременных крыс самок, разделенных на две равные группы: опыт и контроль. Опытной группе беременных крыс субстанцию адепрофена (синтезирована на базе НИИ фармакологии Волгоградского медицинского университета [6]) вводили внутрижелудочно в дозе 150 мг/кг (превышающая в 15 раз терапевтическую дозу) с 6-го дня беременности и до родов. Контрольной группе в эти же сроки внутрижелудочно вводили дистиллированную воду в дозе 10 мл/кг. Данный объем дистиллированной воды соответствовал дозе его введения при растворении субстанции адепрофена. Содержание животных и проведение на них манипуляций проводилось с учетом нормативных правил лабораторной практики, утвержденных МЗ РФ Приказ № 199Н от 10 апреля 2016 г. и методических рекомендаций по изучению репродуктивной токсичности лекарственных средств [7], а также протокола, утвержденного локальным этическим комитетом за № 140-2011 от 11.06.2011 г. После родоразрешения лактирующих самок отсаживали и дальнейшие наблюдения вели за потомствами крысят до достижения ими двухмесячного возраста. В период исследований у крыс самок отмечали общее состояние и прирост массы тела (г). После родов, в каждом помете, у крыс матерей оставляли по 6 крысят. В дальнейшем наблюдения проводили за потомствами крысят, у которых изучали физическое развитие (измерение массы тела (г), оценивали в днях сроки отлипания ушной раковины, появления волосяного покрова, прорезывания резцов, открытия глаз, поднятия JOURNAL ОГ VOLGOGRAD STATE MEDICAL UNIVERSITY головы, опускания семенников и открытия вагины), формирования сенсорно-двигательных рефлексов («переворачивание на плоскости», «отрицательный геотаксис», «мышечную силу» и др.), а также поведенческую активность (тест «открытое поле», на 20-й и 45-й дни) и способности потомства к обучению и памяти (тест «УРПИ» на 60-й день) [7, 8]. Результаты исследований подвергали статистической обработке с использованием пакета программ Microsoft Excel. Достоверность изменений в опытной группе относительно группы контроль оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ По результатам наблюдений у беременных крыс самок в опытной и контрольной группах не отмечено различий в общем состоянии и поведении. Шерстный покров у них был гладкий, белый и лоснящийся, слизистые оболочки прозрачные, видимые кожные покровы чистые. Прирост массы тела беременных крыс был положительным в опытной и контрольной группах, существенных различий не наблюдалось. Различий в этих исследуемых группах крыс самок по особенностям периода их гнездования и отношения к появившемуся потомству не отмечено. Случаев отказа от вскармливания крысой матерью новорожденных крысят не наблюдалось. В исследованиях на потомствах крысят отмечен положительный прирост массы тела в опытной и контрольной группах (табл. 1). В течение первых трех недель наблюдений прирост массы тела у крысят в опытной группе соответствовал приросту массы тела контрольных животных. В дальнейшем, при переходе их на дефинитивное и самостоятельное питание (с 21-й по 30-й дни) прослеживались недостоверные тенденции снижения темпов прироста массы тела в опытной группе, которые в последующем, после пересадки крысят от крыс матерей, были нивелированы и к окончанию 2-месячных наблюдений не отличались от контроля. Таблица 1 Прирост массы тела потомства, от крыс самок, получавших с 6-го дня беременности и до родов адепрофен в дозе 150 мг/кг (М ± m), г Периоды измерений, дни Варианты опытов (дозы веществ) контрольная группа вода дистиллированная опытная группа адепрофен 4 10,60 ± 0,22 10,60 ± 0,14 7 16,50 ± 0,24 17,20 ± 0,38 14 28,60 ± 0,41 27,00 ± 0,44 21 41,4 ± 0,6 40,00 ± 0,58 30 69,30 ± 0,59 69,40 ± 0,53 60 124,10 ± 1,37 127,00 ± 0,87 *Р < 0,05 - различия достоверны относительно контроля. В наблюдениях за физическим развитием у крысят в опытной группе нарушений не обнаружено, тогда как по отдельным параметрам физического развития относительно контроля отмечено статистически значимое опережение сроков отлипания ушной раковины (на 0,4 дня, p < 0,05), открытия глаз (на 0,6 дня, p < 0,05). У потомства крысят в опытной группе относительно контроля прослеживалось опережение формирования сенсорно-двигательных рефлексов в тестах «отрица- JOURNAL OF VOLGOGRAD STATE I MEDICAL UNIVERSITY тельный геотаксис» (на 0,8 дня, p < 0,05), «зрачковый рефлекс» (на 0,6 дня, p < 0,05), «избегания обрыва, вызванное визуальным стимулом» (на 0,8 дня, p < 0,05), «мышечная сила» (на 1,5 дня, p < 0,05) и «переворачивания в свободном падении» (на 0,8 дня, p < 0,05), тогда как по другим параметрам достоверных различий не отмечено (табл. 2). Однако отмеченные тенденции опережения физического развития потомства находились в пределах физиологической нормы [9]. Таблица 2 Физическое развитие и сенсорно-двигательные рефлексы потомства от крыс самок, получавших с 6-го дня беременности и до родов адепрофен в дозе 150 мг/кг (М ± m), дни Исследуемые параметры Варианты опытов (дозы веществ) контрольная группа вода дистиллированная опытная группа адепрофен Отлипание ушной раковины 2,80 ± 0,09 2,40 ± 0,06' Появление волосяного покрова 4,40 ± 0,06 4,50 ± 0,06 Прорезывание резцов 8,00 ± 0,11 7,90 ± 0,12 Открытие глаз 15,80 ± 0,05 15,20 ± 0,13' Опускание семенников 26,0 ± 0,1 26,20 ± 0,18 Открытие вагины 47,00 ± 0,56 47,50 ± 0,34 Переворачивание на плоскости 3,60 ± 0,06 3,80 ± 0,09 Отрицательный геотаксис 6,40 ± 0,06 5,60 ± 0,14' Избегание обрыва 6,90 ± 0,04 6,90 ± 0,13 Зрачковый рефлекс 16,10 ± 0,08 15,50 ± 0,07' Избегание обрыва, вызванное стимулом 16,30 ± 0,09 15,50 ± 0,07' Мышечная сила 18,40 ± 0,13 16,90 ± 0,21' Переворачивание в свободном падении 19,20 ± 0,14 18,40 ± 0,14' *Р < 0,05 - различия достоверны относительно контроля. При изучении поведенческой активности (тест «открытое поле») у крысят в 20-дневном возрасте (табл. 3) относительно контроля статистически значимо повышалось количество горизонтальных передвижений (горизонтальная двигательная активность) на 9,3 % (p < 0,05), заглядываний в напольные отверстия (исследовательская активность) в 2,2 раза (p < 0,05) и актов груминга (54,5%, p < 0,05), тогда как вертикальная двигательная активность и акты дефекаций у этих животных достоверно не различались. Таблица 3 Поведенческая активность (тест «открытое поле») потомства от крыс самок, получавших с 6-го дня беременности и до родов адепрофен в дозе 150 мг/кг (М ± m) Исследуемые параметры (количество актов на 1 особь) Варианты опытов (дозы веществ) контрольная группа вода дистиллированная опытная группа адепрофен 20-дневный возраст Горизонтальная двигательная активность 24,6 ± 0,7 26,90 ± 0,84' Вертикальная двигательная активность 4,2 ± 0,31 4,40 ± 0,35 Исследовательская активность 1,50 ± 0,18 ' ,4 0, +1 ,3 3, Акты груминга 1,1 ± 0,1 1,70 ± 0,18' Акты дефекаций 0,80 ± 0,12 0,6 ± 0,1 45-дневный возраст Горизонтальная двигательная активность 36,00 ± 0,61 35,50 ± 0,58 Вертикальная двигательная активность 13,30 ± 0,51 12,80 ± 0,54 Исследовательская активность 4,50 ± 0,23 5,10 ± 0,21 Акты груминга 1,40 ± 0,32 1,30 ± 0,24 Акты дефекаций 0,70 ± 0,32 0,7 ± 0,2 *Р < 0,05 - различия достоверны относительно контроля. В исследованиях, проведенных у этого потомства крысят в 45-дневном возрасте (табл. 3) относительно контроля, статистически значимых различий не обнаружено. По результатам изучения мнестических реакций (тест «УРПИ») у 2-месячных крысят не обнаружено значимых изменений относительно контрольной группы по воспроизведению памятного следа (табл. 4). При этом латентный период и время нахождения в темной камере крысят в опытной группе практически не различалось с контрольной группой, тогда как количество заходов в темную (опасную) камеру у них недостоверно снижалось. Таблица 4 Исследуемые параметры Контрольная группа вода дистиллированная Опытная группа адепрофен Латентный период, с 166,10 ± 3,85 163,70 ± 5,76 Время нахождения в камере, с 13,90 ± 3,85 16,30 ± 5,76 Количество заходов 0,60 ± 0,12 0,40 ± 0,11 Обучаемость и память (тест «УРПИ») 60-дневного потомства от крыс самок, получавших с 6-го дня беременности и до родов адепрофен в дозе 150 мг/кг (М ± m) Таким образом, из проведенных исследований можно сделать заключение об отсутствии отдаленного влияния субстанции адепрофена (новый аналог пуринового нуклеозида аденозина) в дозе 150 мг/кг на процессы постнатального развития потомства крысят, при условии ее введения крысам самкам в период беременности. Отмечено, что физическое развитие потомства крысят не нарушалось и было полностью сформировано к 2-месячному возрасту. Прирост массы тела был положительным во все периоды измерений, а физическое развитие потомств крысят практически не различалось с контрольными данными и не выходило за рамки физиологической нормы. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Субстанция адепрофена (новый ароматический аналог пуринового нуклеозида аденозина) в дозе 150 мг/кг при введении беременным крысам самкам не оказывает отдаленного влияния на развитие потомства в постнатальном периоде.

About the authors

L. I Bugaeva

Volgograd State Medical University

Email: li_bugaeva@mail.ru

T. D Denisova

Volgograd State Medical University

Email: tanyaddenisova@mail.ru

Y. A Mazanova

Volgograd State Medical University

Email: julja-10@list.ru

N. S Melichova

Volgograd State Medical University

Email: bugnatasha7@mail.ru

A. A Ozerov

Volgograd State Medical University

Email: dds.ozerov@gmail.com

References

Supplementary files