THE VALUE OF PERIPHERAL BLOOD NK CELLS AND EXPRESSION OF TRANSFORMING GROWTH FACTOR BETA-1 IN RECURRENT OVARIAN 157 ENDOMETRIOSIS

Full Text

В последние годы большинство исследователей важную роль в этиопатогенезе эндометриоза отводят трансформирующему фактору роста-Д! (TGF-61) -воспалительному фактору роста, который регулирует клеточную адгезию, миграцию, дифференцировку, апоптоз, инвазию и ангиогенез. Pizzo и соавт. (2002), Young и соавт. (2014) показали, что уровень этого маркера значительно повышается в перитонеальной жидкости, сыворотке крови, эктопическом эндометрии у пациенток с эндометриозом по сравнению с контрольной группой здоровых женщин репродуктивного возраста [1, 2, 3]. Повышенный уровень TGF-61 может быть причиной нарушения иммунного ответа у женщин с эндометриозом из-за его способности снижать активность NK-клеток, что способствует выживанию эктопических клеток эндометрия в брюшной полости и играет ключевую роль в прогрессировании заболевания [4, 5]. NK-клетки представляют собой гетерогенную популяцию и характеризуются естественной цитолитической активностью, способностью продуцировать цитокины и хемокины. В силу этого они относятся к первой линии защиты, участвуя в противовирусном и противоопухолевом контроле [6]. До настоящего времени вопрос о взаимоотношении TGF-61 и NK-клеток остается малоизученным, особенно при рецидивирующем течении заболевания и представляет научный интерес. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучить экспрессию TGF-p1 и значение NK-клеток периферической крови при рецидивирующем течении эндометриоза яичников. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ В исследование вошло 196 пациенток, которым были выполнены органосохраняющие операции лапароскопическим доступом по поводу эндометриоидных кист яичников в период с 2012 по 2018 г. Ретроспективно, в зависимости от отдаленных результатов хирургического лечения было выделено две группы: в основную вошли 45 женщин с рецидивирующим течением заболевания, средний возраст (32,2 ± 6,1) года, в группу сравнения вошла 151 пациентка без рецидива, средний возраст (31,4 ± 7,3) года. Критерии включения в исследование - репродуктивный возраст пациенток, рецидивирующие и впервые выявленные эндометриоидные кисты яичников, подтвержденные результатами гистологического исследования операционного материала. Критериями невключения в исследование были прием гормональных препаратов на момент оперативного вмешательства или в течение шести месяцев до него, наличие сопутствующей гинекологической патологии (миома матки более 3 см в диаметре, аденомиоз, опухоли яичников, воспалительные заболевания придатков матки, гиперпластические процессы эндометрия), хронические аутоиммунные заболевания, хронические вирусные гепатиты, ВИЧ-инфекция, системные заболевания соединительной ткани. Иммунологическое исследование периферической крови проводили 47 пациенткам [по 15 пациенток из группы с рецидивом заболевания (первая и вторая операции) и 17 - без рецидива] методом иммунофенотипирования мембранных антигенов с использованием двухплатформеннои технологии на лазерном проточном цитометре Cytomics FC 500 и гематологическом анализаторе DXH-800 фирмы Beckman Coulter, США c использованием моноклональных антител CD3-CD16/56+ (натуральных киллеров). Оценивали их процентное соотношение и подсчитывали абсолютное число в единице объема. Для ИГХ-исследования операционного материала из фиксированных в нейтральном формалине и залитых в парафин кусочков ткани изготовлялись тонкие срезы толщиной 4-5 мкм на микротоме Leica RM 2235 (Leica Biosystems Nussloch GmbH, Германия), помещали на стекла, покрытые поли^-лизином. Выявление тканевых антигенов проводили авидин-биоти-новым методом, в котором бионитилированные антитела реагируют с соответствующими молекулами пероксидазно-коньюгированного стрептавидина. В качестве первичных иммунных сывороток использовали моноклональные мышиные антитела к TGF-61 sc-130348 (Santa Cruz, США). Экспрессию TGF-61 определяли по интенсивности коричневой окраски в цитоплазме гладкомышечного и сосудистого компонентов тканей. Оценку интенсивности реакции проводили по трехбалльной системе: 0 - негативная, 1 - слабая, 2 -промежуточная, 3 - сильная. Результаты исследования МЕДИЦИНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА определяли в 5 полях зрения c определением среднего значения площади экспрессии в процентах с расчетом ошибки среднего. Для ИГХ-исследования было отобрано 45 наблюдений - по 15 пациенток из группы с рецидивом заболевания (первая и вторая операции) и 15 - без рецидива. Результаты экспрессии TGF-S1 оценивали отдельно в капсуле эндометриоидной кисты и в эндометриальной цитогенной строме. Морфометрический анализ проводили с помощью оптического микроскопа Nikon Eclipse E400, компьютера на базе Intel Pentium 4 и программного обеспечения «Видеотест - Морфология 5.0» Анализ осуществляли при увеличении *100. Микрофотографирование препаратов проводили при помощи цифровой фотокамеры Nikon. Для статистической обработки данных использовали дисперсионный непараметрический анализ по Краскелу - Уоллису. Достигнутый уровень значимости р < 0,05 свидетельствовал о наличии статистически значимых различий между средними 3 групп; что позволяло выполнить их попарные сравнения с помощью критерия Манна - Уитни. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Частота рецидива эндометриоидных кист яичников составила 22,96 %, у 48,87 % пациенток он возник спустя 3-4 года после первой операции. Иммунологическое исследование периферической крови выявило, что рецидив эндометриоидной кисты яичников отличался от безрецидивного течения заболевания и случаев впервые выявленной эндометриомы с последующим рецидивом достоверным снижением процента NK-клеток (CD3-CD16/56+) периферической крови (табл. 1). Результаты иммунологического анализа периферической крови у пациенток с эндометриозом яичников Таблица 1 Показатель Группа 1 Рецидивирующее течение (п - 30) Группа 2 Без рецидива (п - 17) M e [01; 03] Р 1-я операция (п = 15) Me [01; 03] 2-я операция (п = 15) Me [01; 03] CD3-CD16/56+, % (норма 8,0-18,0) 15,74 [14, 02; 18, 44] 7,96 [7, 08; 13, 60] 15,16 [9, 48; 17, 88] < 0,001 CD3-CD16/56+, кл/мкл (норма 123,0-369,0) 294,42 [247, 00; 313, 48] 299,20 [251, 28; 304, 44] 243,60 [169, 50; 372, 48] 0,034 При ИГХ-исследовании положительная экспрессия TGF-S1 была обнаружена в капсуле эндометриоидных кист всех групп исследования. Площадь его экспрессии была значимо большей в операционном материале как первой 22,8 [21, 6; 24, 8], так и второй операции 31,2 [30, 5; 32, 2] при рецидивирующем течении эндометриоза, по сравнению со случаями без рецидива 12,7 [11, 2; 13, 9] р < 0,001) (табл. 2). Кроме того, только в наблюдениях повторного хирургического лечения эндометриоидной кисты положительная экспрессия TGF-S1 была обнаружена в эндометриальной цитогенной строме - 18,7 [18, 0; 19, 7] %, рис. Площадь экспрессии трансформирующего фактора роста-Д1 при эндометриоидных кистах яичников Таблица 2 Область исследования Группа 1 Рецидивирующее течение (п - 30) Группа 2 Без рецидива (п - 15) Me [01; 03] 1-я операция (п - 15) Me [01; 03] 2-я операция (п - 15) Me [01; 03] Капсула кисты 22,8 [21, 6; 24, 8]* 31,2 [30, 5; 32, 2]* 12,7 [11, 2; 13, 9] Цитогенная строма - 18,7 [18, 0; 19, 7] - “Соответствует статистически значимому различию показателем"(р < 0,05) при сравнении показателей в группе 1 и 2. в г Рис. Экспрессия TGF-61 при эндометриозе яичников: а - капсула кисты, рецидив, первая операция; б - капсула кисты, рецидив, вторая операция; в - капсула кисты, без рецидива; г - цитогенная строма, рецидив, вторая операция. ИГХ, х100 ЗАКЛЮЧЕНИЕ Для рецидива эндометриоидных кист яичников характерно снижение процента NK-клеток в периферической крови и повышение площади экспрессии TGF-S1 в капсуле кисты. Участие этого ростового фактора в патогенезе и прогрессировании эндометриоза подтверждается также его экспрессией в цитогенной строме эндометриомы при рецидиве заболевания. Полученные результаты нашего исследования сопоставимы с данными мировой литературы, указывают на значение иммунных нарушений в патогенезе эндометриоза и взаимосвязи экспрессии TGF-S1 и процента NK-клеток периферической крови. Дальнейшее изучение роли иммунных нарушений при эндометриозе открывает перспектива для поиска новых неинвазивных способов его ранней диагностики, прогнозирования рецидивирующего течения и выбора методов эффективной терапии.

About the authors

N. N Petrovskaya

I.I. Mechnikov Northwestern State Medical University

Email: dr.ramzaeva@mail.ru
obstetrician-gynecologist of the Department of Gynecology Saint Petersburg, Russia

V. A Pechenikova

I.I. Mechnikov Northwestern State Medical University

Email: p-vikka@mail.ru
MD, PhD, Professor of the Department of Obstetrics and Gynecology Saint Petersburg, Russia

References

Supplementary files