АНТИТРОМБОТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО ТЕТРАГИДРО[1,3]ДИАЗЕПИНО[1,2-A]-БЕНЗИМИДАЗОЛА СОЕДИНЕНИЯ ДАБ-15 НА МОДЕЛИ АРТЕРИАЛЬНОГО ТРОМБОЗА

Полный текст

Химический класс производных бензимидазола является перспективным для выявления новых соединений с антиагрегантной активностью [1, 2, 5]. В проведенных ранее исследованиях в ряду конденсированных производных диазепинобензими-дазола, выявлено вещество под шифром ДАБ-15, проявляющее высокую активность в отношении ингибирования агрегации тромбоцитов [3]. Инициатором артериальных тромбозов является агрегация тромбоцитов, поэтому уменьшить риск развития тромбов можно, используя методы фармакологического и физико-химического воздействия [4, 10]. В данном исследовании для изучения антитромботи-ческой активности соединения ДАБ-15 была выбрана модель артериального тромбоза, индуцированного электрическим током. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Изучение антитромботических свойств нового антиагрегантного соединения ДАБ-15, являющегося конденсированным производным диазепинобензимидазо-ла, на модели артериального тромбоза у крыс, индуцированного постоянным электрическим током. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 96 белых нелинейных крысах - самцах, массой 350-400 г, содержащихся в условиях вивария (температура 22-24 °С, относительная влажность воздуха 40-50 %) с естественным световым режимом на стандартной диете (ГОСТ Р 50258-92), с соблюдением правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ З 51000.3-96 и 1000.4-96), а также правил и Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997). Изучение антитромботической активности производного 2,3,4,5-тетрагидро[1, 3]диазепино[1,2-а]-бензи-мидазола под шифром ДАБ-15 [НИИ ФОХ ЮФУ] проводили на модели артериального тромбоза у крыс, индуцированного постоянным электрическим током [7] в модификации [6]. В качестве препаратов сравнения использовали ацетилсалициловую кислоту (Sigma, CША), клопидогрел (Плагрил, Dr. Reddy“s, Индия) и тиклопидин (Ratiopharm, Германия). Вещества растворяли в дистиллированной воде в объеме 2 мл. Животные контрольной группы перорально получали растворитель 56 Выпуск 1 (57). 2016 в эквивалентном объеме. Соединение ДАБ-15 вводилось в дозах 4,5; 9; 17 и 33 мг/кг, препараты сравнения ацетилсалициловая кислота - в дозах 19, 25, 50 и 100 мг/кг, тиклопидин - в дозах 32, 60 и 120 мг/кг и плагрил - в дозах 5,5; 11; 22 и 44 мг/кг. Моделирование артериального тромбоза осуществляли спустя 2 часа после перорального введения препаратов животным. Для исследования использовали ультразвуковой компьютеризированный аппарат «Минимакс-Доплер-К» (Санкт-Петербург). Регистрацию кровотока вели до полной окклюзии сосуда (характеризуется отсутствием пульсации сонной артерии выше участка наложения тромбообразующего агента и характерного артериального звукового сигнала). Эффективность соединения ДАБ-15 и препаратов сравнения оценивали по их способности удлинять время полной окклюзии сонной артерии тромбом. Также для исследуемого соединения и препаратов сравнения была рассчитана величина ED50 (концентрация, в которой изученные соединения увеличивают время окклюзии сосуда тромбом по отношению к контролю на 50 %) методом регрессионного анализа в программе Microsoft Excell 2007. Статистическая обработка результатов проводилась в программе GraphPad Prism 5.0 (США) с использованием U-критерия Манна-Уитни. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ На модели тромбоза сонной артерии, индуцированного электрическим током, было показано антитром-богенное действие соединения ДАБ-15. В группе контрольных животных, которым вводился растворитель, среднее время полной окклюзии сонной артерии составило 15,2 минуты, что согласуется с данными, полученными другими авторами [9]. Предварительное введение животным соединения ДАБ-15 и препаратов сравнения пролонгировало данный показатель. Так, соединение ДАБ-15 в дозе 33 мг/кг достоверно удлиняло время наступления полной окклюзии сонной артерии крыс до 40,3 минут, что увеличивало время образования тромба на 165 % (р < 0,005) по сравнению с контрольными значениями (табл., рис.). В дозах 17, 9 и 4,5 мг/кг данное вещество также пролонгировало данный показатель на 86,4 (р < 0,005), 51,3 (р < 0,005) и 40,35 % (р < 0,005) соответственно. ED50 соединения ДАБ-15 при этом составила 7,9 мг/кг. Препарат сравнения, ацетилсалициловая кислота в дозе 20 мг/кг, увеличивал время полной окклюзии сосуда на 33,8 % (р < 0,005). При повышении исследуемых доз до 25, 50 и 100 мг/кг препарат увеличивал время образования тромба в сонной артерии крыс на 61,2 (р < 0,005), 108,3 и 146,7 % (р < 0,005) соответственно (табл., рис.). ED50 ацетилсалициловой кислоты при этом составила 22,4 мг/кг. Тиклид в дозе 32 мг/кг пролонгировал время образования тромба на 28,3 % (р < 0,003). При повыше нии дозы до 60 и 120 мг/кг также увеличивалось время наступления полной окклюзии на 46,9 (р > 0,003) и 133,6 % (р < 0,003) соответственно (табл., рис.). При этом величина ED50 тиклида составила 54,8 мг/кг. Антитромботическая активность соединения ДАБ-15, ацетилсалициловой кислоты, тиклопидина и плагрила на модели артериального тромбоза, индуцированного постоянным электрическим током (M ± m) Вещество Доза, мг/кг А % пролонгирования времени полной окклюзии, (M ± m) ED50, мг/кг ДАБ-15 33 165,0 ± 8,4* 7,9 17 86,4 ± 4,4* 9 51,3 ± 3,8* 4,5 40,35 ± 2,20* Ацетилсали циловая кислота 19 33,8 ± 2* 22,4 25 61,2 ± 3,4* 50 108,3 ± 3* 100 146,7 ± 6* Тиклид 32 28,3 ± 4,4* 54,8 60 46,9 ± 3* 120 133,6 ± 3,7* Плагрил 44 152,2 ± 4,7* 6,9 22 117,1 ± 5,6 11 72,2 ± 2 5,5 39,25 ± 3,14 *Данные достоверны по отношению к контролю (р < 0,005, критерий Манна-Уитни). Рис. Влияние соединения ДАБ-15, ацетилсалициловой кислоты, тиклида и плагрила на время полной окклюзии сонной артерии на модели артериального тромбоза, индуцированного электрическим током Время полной окклюзии сонной артерии под влиянием препарата сравнения плагрил в дозе 44 мг/кг также повышалось на 152,2 % (р < 0,005). При снижении доз до 22, 11 и 5,5 мг/кг происходило уменьшение данного показателя на 117,1 (р < 0,005), 72,2 (р < 0,005) и 39,25 % (р < 0,005) соответственно. ED50 клопидогре-ля при этом составила 6,9 мг/кг (табл., рис.). Таким образом, проведенные исследования вывили преимущество соединения ДАБ-15 перед препаратами сравнения. Так, по ED50 данное вещество превосходит ацетилсалициловую кислоту и тиклид в 2,8 и 6,9 раза. Однако проявляет равноценную в сравнении с плагрилом антитромботическую активность. Выпуск 1 (57). 2016 57 ЩЩпрй [ЩшкПГМЩ Использование анодного тока в качестве индуктора артериального тромбоза широко распространено в экспериментальных исследованиях, в частности, в опытах на крысах [8]. Данный вид тромбоза связан с ключевой ролью активации тромбоцитарного звена гемостаза в начальных механизмах его развития. В ранее проведенных исследованиях in vitro вещество ДАБ-15 проявило высокую антиагрегантную активность, превосходя препарат сравнения ацетилсалициловую кислоту. Полученные данные подтверждаются высокими антитромботическими свойствами соединения ДАБ-15, выявленными в результате экспериментального исследования. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Соединение ДАБ-15 проявило выраженное анти-тромботическое действие на модели артериального тромбоза, индуцированного постоянным электрическим током, превосходя по активности препараты сравнения ацетилсалициловую кислоту и тиклид и оказывало равноценное действие с препаратом плагрил. Таким образом, проведенные исследования позволяют заключить, что новое конденсированное производное диазепинобензимидазола соединение ДАБ-15 улучшает тромбогенный потенциал крови, что указывает на необходимость дальнейшего изучения механизма антиагрегантного действия данного соединения c учетом влияния на различные звенья активации тромбоцитарного звена гемостаза.

Об авторах

А. А. Спасов

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра фармакологии

Виктор Сергеевич Сиротенко

Волгоградский государственный медицинский университет

Email: sirDtenko.vikton@yandex.ru
аспирант кафедры фармакологии

К. А. Гайдукова

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра фармакологии

А. Ф. Кучерявенко

Волгоградский государственный медицинский университет

кафедра фармакологии

А. С. Морковник

НИИ физической и органической химии Южного федерального университета

В. А. Анисимова

НИИ физической и органической химии Южного федерального университета

Л. Н. Диваева

НИИ физической и органической химии Южного федерального университета

Т. А. Кузьменко

НИИ физической и органической химии Южного федерального университета

Список литературы

Дополнительные файлы