MEASUREMENT OF N-DEMETILIVABRADINE/IVABRADINE METABOLIC RATIO FOR CYP3A4 ACTIVITY ASSESSMENT

全文:

Среди всех цитохромов CYP3A4 имеет наибольшее клиническое значение, поскольку метаболизиру-ет более 60 % всех лекарственных средств [4]. В связи с вариабельной активностью этого фермента в популяции результат применения лекарственных препаратов - субстратов CYP3A4 - может варьировать от недостаточной эффективности до развития передозировки. Оценка активности CYP3A4 позволяет прогнозировать фармакологический эффект таких препаратов и широко используется в научных исследованиях [2]. Для определения активности CYP3A4 в настоящее время используют многочисленные маркерные субстраты, однако ни один из них не является универсальным [4]. Появление препарата ивабрадин, метаболизм которого связан исключительно с CYP3A4, его высокая фармакологическая селективность и безопасность применения [5], возможность определения с помощью ВЭЖХ [1] позволяют предложить его в качестве нового маркерного субстрата для оценки активности CYP3A4. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Определить возможность использования метаболического коэффициента N-деметиливабрадин/ ивабрадин для оценки ингибирования/ индукции изоформы CYP3A4. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Исследование выполнено на клинической базе кафедры клинической фармакологии ВолгГМУ и в лаборатории фармакологической кинетики НИИ фармако логии ВолгГМУ, одобрено локальным независимым этическим комитетом (протокол № 147-2011). После подписания информированного согласия в исследование включали некурящих мужчин 18-45 лет с верифицированным диагнозом «здоров» по данным стандартных клинических, лабораторных и инструментальных методов скринингового обследования, массой тела от 50 кг и индексом массы тела (ИМТ) от 18,5 до 29,9 кг/м2. Критериями невключения являлись: отягощенный аллергологический анамнез/ лекарственная непереносимость; хронические заболевания сердечно-сосудистой, бронхолегочной, нейроэндокринной системы, а также заболевания желудочно-кишечного тракта, печени, почек, крови; хирургические вмешательства на желудочно-кишечном тракте (за исключением аппендэктомии); острые инфекционные заболевания менее чем за 4 недели до начала исследования; прием любых лекарственных препаратов и биологически активных добавок, в том числе оказывающих влияние на активность CYP3A4, менее чем за 4 недели до начала исследования. Всем участникам исследования проводили забор образцов крови (6-кратно) из кубитальной вены 4 раза: (1) исходно, (2) после приема грейпфрутового сока (1 л/сут в течение 3 дней) как ингибитора CYP3A4, (3) после 7-дневного «периода отмывания» и (4) через 14 дней приема капсул зверобоя продырявленного травы экстракта сухого по 850 мг 2 р/сут. (Негрустин®, Гексал АГ, Салютас Фарма ГмбХ, Германия) как индуктора CYP3A4. Непосредственно перед забором образцов 30 Выпуск 3 (47). 2013 крови участники исследования принимали 10 мг иваб-радина (Кораксан®, Servier, Франция). Каждый раз после приема ивабрадина все добровольцы 4-кратно собирали мочу в течение 12 ч. Ивабрадин и N-деметиливабрадин в плазме и моче добровольцев определяли на жидкостном хроматографе Shimadzu с флуоресцентным детектором (Япония) на колонке Kromasil LC-18, при длине волны эк-стинкции 283 нм и длине волны эмиссии 328 нм. В качестве внутреннего стандарта использовали домпери-дон (Toronto Research Chemical Inc., Канада). Для расчета модельных параметров (ka, ke, k12, k21, С0) двухкамерной фармакокинетической модели методом наименьших квадратов применяли надстройку «Поиск решения» с использованием программного обеспечения Microsoft Office Excel 2007. Площади под фармакокинетическими кривыми AUC^ рассчитывали методом статистических моментов [3]. Метаболический коэффициент (К) в плазме определяли как отношение площади метаболита (AUCnio м , ) к площади ивабm ' 0-12ч Ы-деметиливабрадина7 1 m радина (АиС0-12ч ивабрадина). Метаболический коэффициент в моче, собранной за 12 ч после однократного приема ивабрадина, рассчитывали по отношению кумулятивной экскреции (концентрация*объем) N-деметиливабрадина к ивабрадину. Статистическую обработку всех результатов исследования проводили с помощью пакета программ SPSS 11.0 и БИОСТАТ. Полученные данные представлены в таблицах виде медианы и квартилей (Me (LQ; UQ)). Для установления внутригрупповых различий между исходными и окончательными результатами использовали критерий Вилкоксона. Статистически значимыми считались значения р< 0,05. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Средний возраст добровольцев, включенных в исследование (n = 12), составил (25,8 ± 2,6) лет, средний индекс массы тела (22,1 ± 2,2) кг/м2. В результате мониторирования концентраций иваб-радина и N-деметиливабрадина в моче и плазме добровольцев исходно и после приема ингибитора CYP3A4 (грейпфрутового сока) были получены следующие результаты (табл. 1 и 2). Таблица 1 AUC ивабрадина и N-деметиливабрадина в плазме крови добровольцев исходно и на фоне приема ингибитора CYP3A4 Таблица 2 Кумулятивная экскреция ивабрадина и N-деметиливабрадина с мочой добровольцев исходно и на фоне приема ингибитора CYP3A4 Показатели Исход 1 Ингибитор CYP3A4 Ивабрадин, мкг 121,9 (57,2; 360,8) 282,2 (161,9; 471,3) N-деметиливабрадин, мкг 48,3 (23,9; 86,8) ,5; 8 с» ^ Е 8 5 При расчете метаболических коэффициентов было найдено достоверное уменьшение этого показателя на фоне приема грейпфрутового сока как в плазме, так и в моче добровольцев (табл. 3). Таблица 3 Метаболический коэффициент (К„ * . * ), рассчитанный ' М-деметиливабрадин/ивабрадин7’ " по плазме и моче добровольцев исходно и на фоне приема ингибитора CYP3A4 Показатели Исход 1 Ингибитор CYP3A4 р* Плазма 1,49 (1,34; 1,66) 0,71 (0,41; 1) 0,002 Моча 0,38 (0,35; 0,47) 0, 2 ,2 5; 0,002 *р - критерий Вилкоксона. Обратная ситуация была выявлена на фоне приема индуктора метаболизма CYP3A4 (зверобоя продырявленного), результаты представлены в табл. 4 и 5. Таблица 4 AUC ивабрадина и N-деметиливабрадина в плазме крови добровольцев исходно и на фоне приема индуктора CYP3A4 Показатели Исход 2 Индуктор CYP 3A4 AUCивабрадин, нг*ч/мл 93,14 (66,39; 140,65) 79,84 (65,23; 115,68) AUCN-деметиливабрадин, нг*ч/мл 92,78 (50,34; 143,10) 117,84 (96,4; 134,32) Таблица 5 Кумулятивная экскреция ивабрадина и N-деметиливабрадина с мочой добровольцев исходно и на фоне приема индуктора CYP3A4 Показатели Исход 2 Индуктор CYP3A4 Ивабрадин, мкг 319,2 (209,4; 435,0) 279,8 (213,9; 324,0) N-деметиливабрадин, мкг 106,9 (63,5; 143,7) 158,4 (102,6; 209,5) Показатели Исход 1 Ингибитор CYP 3A4 AUCивабрадин, нг*ч/мл 66,72 (53,31; 101,52) 144,22 (94,88; 188,55) AUC N-деметиливабрадин, нг*ч/мл 98,92 (88,17; 151,24) 105,78 (75,74; 117,42) Выпуск 3 (47). 2013 31 При этом метаболический коэффициент, рассчитанный и по плазме, и по моче добровольцев, достоверно увеличился по сравнению с исходом (табл. 6). Таблица 6 Метаболический коэффициент (К„ к к ), рассчитанный по плазме ' М-деметиливабрадин/ивабрадин7’ " и моче добровольцев исходно и на фоне приема индуктора CYP3A4 Показатели Исход 1 Индуктор CYP3A4 р* Плазма 1,06 (0,51; 1,45) 1,5 (1; 1,8) 0,004 Моча 0,32 (0,29; 0,35) 0,54 (0,52; 0,65) 0,002 *р - критерий Вилкоксона. Множественные сравнения между результатами, полученными по моче добровольцев (рис.), также установили достоверные различия между величинами метаболического коэффициента на фоне ингибирования и индукции CYP3A4. 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 исход 1 ингибитор CYP3A4 исход 2 индуктор CYP 3A4 * - р<0,05 критерии Фридмана и Ньюмена-Кейлса Рис. Метаболические коэффициенты, определенные в моче добровольцев исходно и на фоне приема ингибитора/индуктора CYP 3A4 Безопасность перорального приема ивабради-на в дозе 10 мг с целью оценки активности CYP3A4 была подтверждена отсутствием каких-либо нежелательных лекарственных реакций. Чрезмерного уре-жения ЧСС (<55 уд./мин) не было выявлено ни у одного добровольца. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, метаболическое отношение N-де-метиливабрадин/ивабрадин, рассчитанное после мо-ниторирования концентраций ивабрадина и его метаболита в моче и плазме добровольцев, статистически значимо уменьшается на фоне приема ингибитора CYP3A4 (грейпфрутовый сок) и достоверно увеличивается на фоне приема индуктора CYP3A4 (зверобой продырявленный). Полученные результаты позволяют использовать указанный метод для оценки активности CYP3A4 и открывают перспективу для дальнейших исследований.

作者简介

V. Petrov

O. Magnitskaya

Email: magol73@yandex.ru

B. Tolkachev

L. Smirnova

A. Ryabucha

K. Kuznetsov

E. Suchkov

参考

补充文件