ISOLATION, DETECTION AND QUANTIFICATION OF ALIMEMAZINE IN MODEL MIXTURES OF URINE, SALIVE AND BLOOD PLASMA

Full Text

Alimemazine, model mix. Отравление психотропными препаратами возможно вследствие ошибочного приема более высокой дозы, повышенной чувствительности к ним отдельных лиц, а также при намеренном приеме токсической дозы с суицидальной целью. Потенциальную опасность в последнем случае представляет определенный контингент психически больных с тяжелыми депрессиями, императивными галлюцинациями, бредом [1]. Для диагностики отравлений чаще всего используют такие биологические жидкости, как кровь, моча и слюна [2]. Ранее мы изучили влияние различных факторов (природа органического растворителя, pH среды, наличие электролита, время и кратность экстракции) на изолирование алимемазина из растворов [3]. Полученные результаты были использованы нами при разработке методики изолирования алимемазина из модельных смесей биологических жидкостей. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Разработать методики изолирования, обнаружения и количественного определения алимемазина в модельных смесях мочи, слюны и плазмы. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Объекты исследования: слюна в количестве 5 мл, моча в количестве 100 мл отбирались у здоровых добровольцев, не принимавших лекарственные средства в течение 7 дней. Для приготовления модельных смесей использовали плазму (10 мл), предоставленную станцией переливания крови. Для приготовления модельных смесей биологических жидкостей использовали следующую методику: к 100 мл мочи, или 10 мл плазмы, или 5 мл слюны добавляли спиртовой раствор алимемазина в терапевтической, токсической и летальной дозах в пересчете на объем биологической жидкости [4]. Полученную смесь оставляли на 24 часа при комнатной температуре. Изолирование алимемазина из модельных смесей биологических жидкостей проводили следующим образом: к модельной смеси мочи добавляли аммиака раствор 25%-й до pH = 12 и 30 мл хлороформа [3], к модельной смеси слюны добавляли 1 мл раствора трих-лоруксусной кислоты 50%-й. Модельную смесь слюны и плазмы крови центрифугировали при 5000 оборотах в минуту в течение 5 минут. Водную фазу отделяли, добавляли аммиака раствор 25%-й до pH = 12 и экстрагировали хлороформом. Содержимое колб взбалтывали и помещали в делительную воронку. После разделения фаз отделяли слой органического растворителя. Растворители удаляли при комнатной температуре. Сухие остатки, полученные после испарения экстрагентов, растворяли в 5 мл спирта 96%-го. Обнаружение алимемазина в извлечениях проводили методом ТСХ и ВЭЖХ. ТСХ проводили в наиболее оптимальной системе растворителей -аммиака раствор 25%-й-этанол (1: 1) - этилацетат - ацетон (4: 90: 45) [3]. Во всех случаях наблюдали соответствие R f пятен на хроматограммах извлечений R f пятну стандарта алимемазина. При использовании метода ВЭЖХ использовали следующие условия хроматографирования: хроматографическая колонка размером 2?75 мм, заполненная об-ращено-фазовым сорбентом «ProntoSil 120-5-C18 AQ»; подвижная фаза: элюент А - 0,1%-й раствор трифтор- Выпуск 1 (61). 2017 59 ІШторСз уксусной кислоты, элюент Б - ацетонитрил, скорость потока - 100 мкл/мин; время - 19 мин; температура - 35 оС; объем пробы - 5 мкл. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Получены хроматограммы извлечений, представленные на рисунках 1-3. Рис. 1. Хроматограмма модельной смеси мочи (1-6 - неидентифицированные пики, 7 - пик алимемазина) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 1» 1»чш Рис. 2. Хроматограмма модельной смеси слюны Полученные данные свидетельствуют о том, что в извлечениях из мочи, слюны и плазмы наблюдали основной пик алимемазина, время удерживания которого соответствовало (15 ± 0,5) мин. Отклонения во временах удерживания связаны с влиянием биологической матрицы на результаты анализа. Расчет количественного содержания алимемазина в извлечениях (г/мл) проводили по стандартному образцу, используя формулу: S х сст V _ ст ~ S„ X V ' где Sct-площадь пика стандартного раствора; S - площадь пика испытуемого раствора; сст-концентрация стандартного раствора, г/мл; V - объем биологической жидкости, мл. Результаты количественного определения алимемазина в извлечениях из биологических жидкостей представлены в табл. Результаты количественного определения алимемазина в извлечениях из биологических жидкостей Рис. 3. Хроматограмма модельной смеси плазмы Внесено, г/мл Обнаружено, г/мл Метрологические характеристики Моча 0,015 0,0106 X = 0,0103 SD = 0,0003 RSD = ±2,91 % є = ±6,64 % 0,0105 0,0098 0,025 0,0179 Х= 0,0176 SD = 0,000348 RSD = ±1,98 % є = ±4,9 % 0,0180 0,0170 0,2 0,145 X = 0,150 SD = 0,002608 RSD = ±1,74 % є = ±4,32 % 0,147 0,158 Слюна 0,0035 0,0023 X = 0,0022 SD = 7,3*10-5 RSD = ±3,31 % є = ±8,12 % 0,0021 0,0023 0,005 0,0032 X = 0,0032 SD = 9,66*10-5 RSD = ±3,01 % є = ±7,57 % 0,0030 0,0033 0,04 0,027 X =0,027 SD = 0,00096 RSD= ±3,58% є =±8,77% 0,026 0,029 Плазма 0,0007 0,00045 X = 0,00042 SD = 1,9*10-5 RSD = ±4,52% є = ±11,37% 0,00039 0,00041 60 Выпуск 1 (61). 2017 Окончание таблицы Внесено, г/мл Обнаружено, г/мл Метрологические характеристики 0,001 0,00060 Х = 0,00063 SD = 1,61*10-5 RSD = ±2,55% є = ±6,35% 0,00065 0,00064 0,008 0,0050 Х= 0,0053 SD = 0,000158 RSD = ±2,98% 8 = ±7,47% 0,0055 0,0053 Предложенные условия позволяют обнаружить 68,7-75,0 % алимемазина из модельной смеси мочи, 62,86-67,5 % алимемазина из модельной смеси слюны, 60-66 % алимемазина из модельной смеси плазмы. Наибольшая степень извлечения и наименьшее значение ошибки определения наблюдается в извлечениях из мочи. Степень извлечения изучаемого вещества из слюны и плазмы меньше, ошибка определения больше. Это связано с проведением дополнительной подготовки проб слюны и плазмы при изолировании. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, разработанные методики могут быть использованы в химико-токсикологическом анализе алимемазина в моче, слюне и плазм. ЛИТЕРАТУРА

About the authors

A. S Rybasova

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute, Affiliate of the Federal State-Funded Educational Establishment of Higher Education «Volgograd State Medical University»

Email: anna.rybasova@yandex.ru

I. P Remezova

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute, Affiliate of the Federal State-Funded Educational Establishment of Higher Education «Volgograd State Medical University»

D. S Lazaryan

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute, Affiliate of the Federal State-Funded Educational Establishment of Higher Education «Volgograd State Medical University»

T. I Maksimenko

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute, Affiliate of the Federal State-Funded Educational Establishment of Higher Education «Volgograd State Medical University»

References

Supplementary files