ИЗОЛИРОВАНИЕ, ОБНАРУЖЕНИЕ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЛИМЕМАЗИНА В МОДЕЛЬНЫХ СМЕСЯХ МОЧИ, СЛЮНЫ И ПЛАЗМЫ КРОВИ

Полный текст

Alimemazine, model mix. Отравление психотропными препаратами возможно вследствие ошибочного приема более высокой дозы, повышенной чувствительности к ним отдельных лиц, а также при намеренном приеме токсической дозы с суицидальной целью. Потенциальную опасность в последнем случае представляет определенный контингент психически больных с тяжелыми депрессиями, императивными галлюцинациями, бредом [1]. Для диагностики отравлений чаще всего используют такие биологические жидкости, как кровь, моча и слюна [2]. Ранее мы изучили влияние различных факторов (природа органического растворителя, pH среды, наличие электролита, время и кратность экстракции) на изолирование алимемазина из растворов [3]. Полученные результаты были использованы нами при разработке методики изолирования алимемазина из модельных смесей биологических жидкостей. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Разработать методики изолирования, обнаружения и количественного определения алимемазина в модельных смесях мочи, слюны и плазмы. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Объекты исследования: слюна в количестве 5 мл, моча в количестве 100 мл отбирались у здоровых добровольцев, не принимавших лекарственные средства в течение 7 дней. Для приготовления модельных смесей использовали плазму (10 мл), предоставленную станцией переливания крови. Для приготовления модельных смесей биологических жидкостей использовали следующую методику: к 100 мл мочи, или 10 мл плазмы, или 5 мл слюны добавляли спиртовой раствор алимемазина в терапевтической, токсической и летальной дозах в пересчете на объем биологической жидкости [4]. Полученную смесь оставляли на 24 часа при комнатной температуре. Изолирование алимемазина из модельных смесей биологических жидкостей проводили следующим образом: к модельной смеси мочи добавляли аммиака раствор 25%-й до pH = 12 и 30 мл хлороформа [3], к модельной смеси слюны добавляли 1 мл раствора трих-лоруксусной кислоты 50%-й. Модельную смесь слюны и плазмы крови центрифугировали при 5000 оборотах в минуту в течение 5 минут. Водную фазу отделяли, добавляли аммиака раствор 25%-й до pH = 12 и экстрагировали хлороформом. Содержимое колб взбалтывали и помещали в делительную воронку. После разделения фаз отделяли слой органического растворителя. Растворители удаляли при комнатной температуре. Сухие остатки, полученные после испарения экстрагентов, растворяли в 5 мл спирта 96%-го. Обнаружение алимемазина в извлечениях проводили методом ТСХ и ВЭЖХ. ТСХ проводили в наиболее оптимальной системе растворителей -аммиака раствор 25%-й-этанол (1: 1) - этилацетат - ацетон (4: 90: 45) [3]. Во всех случаях наблюдали соответствие R f пятен на хроматограммах извлечений R f пятну стандарта алимемазина. При использовании метода ВЭЖХ использовали следующие условия хроматографирования: хроматографическая колонка размером 2?75 мм, заполненная об-ращено-фазовым сорбентом «ProntoSil 120-5-C18 AQ»; подвижная фаза: элюент А - 0,1%-й раствор трифтор- Выпуск 1 (61). 2017 59 ІШторСз уксусной кислоты, элюент Б - ацетонитрил, скорость потока - 100 мкл/мин; время - 19 мин; температура - 35 оС; объем пробы - 5 мкл. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Получены хроматограммы извлечений, представленные на рисунках 1-3. Рис. 1. Хроматограмма модельной смеси мочи (1-6 - неидентифицированные пики, 7 - пик алимемазина) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 1» 1»чш Рис. 2. Хроматограмма модельной смеси слюны Полученные данные свидетельствуют о том, что в извлечениях из мочи, слюны и плазмы наблюдали основной пик алимемазина, время удерживания которого соответствовало (15 ± 0,5) мин. Отклонения во временах удерживания связаны с влиянием биологической матрицы на результаты анализа. Расчет количественного содержания алимемазина в извлечениях (г/мл) проводили по стандартному образцу, используя формулу: S х сст V _ ст ~ S„ X V ' где Sct-площадь пика стандартного раствора; S - площадь пика испытуемого раствора; сст-концентрация стандартного раствора, г/мл; V - объем биологической жидкости, мл. Результаты количественного определения алимемазина в извлечениях из биологических жидкостей представлены в табл. Результаты количественного определения алимемазина в извлечениях из биологических жидкостей Рис. 3. Хроматограмма модельной смеси плазмы Внесено, г/мл Обнаружено, г/мл Метрологические характеристики Моча 0,015 0,0106 X = 0,0103 SD = 0,0003 RSD = ±2,91 % є = ±6,64 % 0,0105 0,0098 0,025 0,0179 Х= 0,0176 SD = 0,000348 RSD = ±1,98 % є = ±4,9 % 0,0180 0,0170 0,2 0,145 X = 0,150 SD = 0,002608 RSD = ±1,74 % є = ±4,32 % 0,147 0,158 Слюна 0,0035 0,0023 X = 0,0022 SD = 7,3*10-5 RSD = ±3,31 % є = ±8,12 % 0,0021 0,0023 0,005 0,0032 X = 0,0032 SD = 9,66*10-5 RSD = ±3,01 % є = ±7,57 % 0,0030 0,0033 0,04 0,027 X =0,027 SD = 0,00096 RSD= ±3,58% є =±8,77% 0,026 0,029 Плазма 0,0007 0,00045 X = 0,00042 SD = 1,9*10-5 RSD = ±4,52% є = ±11,37% 0,00039 0,00041 60 Выпуск 1 (61). 2017 Окончание таблицы Внесено, г/мл Обнаружено, г/мл Метрологические характеристики 0,001 0,00060 Х = 0,00063 SD = 1,61*10-5 RSD = ±2,55% є = ±6,35% 0,00065 0,00064 0,008 0,0050 Х= 0,0053 SD = 0,000158 RSD = ±2,98% 8 = ±7,47% 0,0055 0,0053 Предложенные условия позволяют обнаружить 68,7-75,0 % алимемазина из модельной смеси мочи, 62,86-67,5 % алимемазина из модельной смеси слюны, 60-66 % алимемазина из модельной смеси плазмы. Наибольшая степень извлечения и наименьшее значение ошибки определения наблюдается в извлечениях из мочи. Степень извлечения изучаемого вещества из слюны и плазмы меньше, ошибка определения больше. Это связано с проведением дополнительной подготовки проб слюны и плазмы при изолировании. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, разработанные методики могут быть использованы в химико-токсикологическом анализе алимемазина в моче, слюне и плазм. ЛИТЕРАТУРА

Об авторах

Анна Сергеевна Рыбасова

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России

Email: anna.rybasova@yandex.ru
аспирант кафедры фармацевтической и токсикологической химии г. Пятигорск

И. П Ремезова

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России

г. Пятигорск

Д. С Лазарян

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России

г. Пятигорск

Т. И Максименко

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России

г. Пятигорск

Список литературы

Дополнительные файлы