Targeted regulation of pathogenic properties in streptococci

  • Authors: Dmitriev AV1, Rozhdestvenskaya AS1, Zutkis AA1, Totolian AA1
  • Affiliations:
    1. Institute of Experimental Medicine of the NorthWest Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint-Petersburg
  • Issue: Vol 9, No 4 (2009)
  • Pages: 50-58
  • Section: Articles
  • URL: https://journals.eco-vector.com/MAJ/article/view/9396
  • Cite item

Abstract


For the study of targeted regulation of pathogenic properties in streptococci, the following biological models were selected: DNA-binding regulatory protein Sak189ofS. agalactiae, and DNA-binding regulatory proteins MutR and Rgg of S. pyogenes. The mutR, rgg, andsak189 isogenic mutants were generated. It was shown that inact ivation of transcriptional regulatory genes resulted in the changes in growth kinetics, an ability of the strains to utilize substrates and to grow in the rich and chemically defined media. The Rgg-regulons were identified in three 5. pyogenes strains. The certain differences in the expression of surface and secreted virulence proteins were found in mutant strains compared to the parental strains. Finally, it was demonstrated that inactivation of sakl89, mutR, and rgg genes affected pathogenic properties of streptococci in vitro and in vivo.

Streptococcus pyogenes и Streptococcus agalactiae являются возбудителями широкого спектра местных, генерализованных и системных заболеваний человека и обладают тропностью к большинству его органов и тканей [7, 10]. Кроме того, 5. agalactiae является актуальным патогеном в ветеринарии, приводя к маститу крупного рогатого скота [16]. Большое количество заболеваний, вызываемых этими микроорганизмами, подразумевает их быструю способность адаптироваться к изменяющимся условиям окружающей среды. В частности, в ответ на изменения условий окружающей среды стрептококки изменяют уровни транскрипции генов, что отражается на изменении фенотипических свойств. К настоящему времени у S. pyogenes обнаружено 13 двухкомпонентных регуляторных систем и 40 белков-регуляторов транскрипции, в том числе глобальные регуляторы транскрипции (Mga, Rgg, белки семейства RALP) [17]. У 5. agalactiae выявлено более 20 двухкомпонентных регуляторных систем и несколько глобальных белков-регуляторов транскрипции [12, 27,28]. У обоих видов совместное действие регуляторных молекул приводит к образованию и функционированию регуляторной «сети». ДНК-связывающие белки MutR и Rgg S. pyogenes, согласно базе данных www.tigr.org, относятся к семейству TIGR01716 регуляторов транскрипции, обнаруженных у ряда грамположительных микроорганизмов. По данным компьютерного моделирования, эти белки содержат участок «спираль-поворот-спираль», за счет которого они взаимодействуют с промоторными областями генов, в том числе генов вирулентности, расположенных в различных участках генома, влияя на уровни их транскрипции. Некоторые белки данного семейства, такие, как Rgg МЕДИЦИНСКИЙ АКАДЕМИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. ТОМЯ. № 4. 200Я _ ^ии Э09 J :тв гай ые то- ые ям я в дд. со то- из, ; in :he ed: ies. ies ally ace :ed ce, бел- аено :тем >анс- (ейс- нию руо- ятся ции, кро- ■ иро- ш ово- % :ТВу- исле ных ции. Rgg S. gordonii, MutR S. mutans, GadR L. Lactis, были частично охарактеризованы [20, 22, 26], тогда как белок MutR 5. pyogenes по-прежнему остается за пределами внимания исследователей. Что касается белка Rgg 5. pyogenes, то ранее был опубликован ряд данных о его влиянии на экспрессию эритрогенного токсина В (SpeB), являющегося фактором патогенности S. pyogenes, адаптацию к условиям стресса и способность утилизировать аминокислоты [3,4, 5]. ДНК-связывающий белок Sakl89 S. agalactiae входит в состав двухкомпонентной регуляторной системы Sakl88/Sakl89 [9, 28]. Гены этой двухкомпонентной системы, кодирующие гистидинкина-зу (sakl88) и ДНК-связывающий белок-регулятор (sakJ89), находятся в пределах обнаруженного нами «островка» патогенности размером 8992 п.н. Кроме генов sakl88 и sakl89 данный «островок» патогенности содержит ген Ъас и ряд генов гипотетических белков. Ранее было показано, что ген Ъас кодирует белок Вас, связывающий IgA человека, фактор Н системы комплемента [2, 13] и играющий существенную роль в вирулентности S. agalactiae [18]. Учитывая, что, кроме генов, расположенных в различных участках генома, двухкомпонентные системы часто регулируют смежно расположенные гены [3, 6, 21, 23-25], логично было предположить, что двухком-понентная система Sakl88/189 будет регулировать транскрипцию гена вирулентности Ъас и, возможно, ряда других генов. Таким образом, целью данной работы явилось изучение роли ДНК-связывающих белков MutR и Rgg 5. pyogenes и ДНК-связывающего белка Sakl89 S. agalactiae в регуляции транскрипции генов, экспрессии факторов патогенности и проявлении стрептококками патогенных свойств. МЕТОДИКА В работе были использованы штаммы S. pyogenes NZ131 (серотип М49), CS101 (М49), SF370 (Ml), 5005 (Ml) и штамм S. agalactiae 168/00. Штаммы выращивали в течение ночи при 37 °С в бульоне Todd-Hewitt Broth (HiMedia Laboratories, Индия) или на агаризованных средах, содержащих 5% бараньих эритроцитов. Большинство рутинных генно-инженерных процедур (выделение хромосомной и плазмидных ДНК, рестрикция, электрофорез ДНК, клонирование и др.) осуществляли в соответствии с руководством [1]. Секвенирование ДНК проводили на секвенаторе ABI Prism 377 Perkin-Elmer Sequencer (Applied Bio-systems, США) согласно протоколу производителя. В работе инактивировали гены sakl89 (S. agalactiae), mutR (S. pyogenes; штаммы SF370, NZ131) и rgg (S. pyogenes; штаммы SF370, 5005, CS101). Для инактивации генов белков-регуляторов применяли метод инсерционного мутагенеза. С этой целью фрагменты соответствующих генов клонировали в вектор pVA891-2, содержащий ген устойчивости к эритромицину и неспособный к репликации в грамположительных кокках. Последующая электропора-ция стрептококков рекомбинантными плазмидами приводила к их интеграции в гены белков-регуляторов и к нарушению их функциональных активностей. Селекцию и культивирование мутантных штаммов осуществляли на питательных средах, содержащих эритромицин (2,5 мкг/мл). Нарушения открытых рамок считывания rgg, mutR, sakl89 контролировали методами ПЦР и секвенирования ДНК. Динамику роста штаммов оценивали по изменению оптической плотности при длине волны 600 нм в обогащенной среде Todd-Hewitt Broth и в «минимальных» средах определенного состава [8], содержащих в качестве источников углерода глюкозу, фруктозу или сахарозу. Экспрессию SpeB определяли по наличию зоны протеолиза вокруг колонии, посеянной уколом на агаризованную среду с добавлением 10% обезжиренного молока и выращенной в течение ночи согласно [15]. Для определения ДНКазной активности штаммы пересевали уколом на агаризованную среду, содержащую метиленовый зеленый, и выращивали в течение ночи. Зона просветления вокруг колонии свидетельствовала о наличии у штамма секретируемых ДНКаз, об уровне экспрессии которых можно было судить по диаметру зоны просветления. Анализ клеточных и секретируемых белков осуществляли с помощью электрофореза в полиакри-ламидном геле (SDS-PAGE) и Western-блоттинга. Для приготовления лизатов осадки клеток суспендировали в физиологическом растворе, смешивали с равным объемом буферного раствора, содержащего 10% (З-меркаптоэтанола, и кипятили в течение 10 мин. Секретируемые белки предварительно осаждали из культуральной жидкости добавлением 2-кратного объема охлажденного ацетона с последующим диализом осадка против физиологического раствора в течение ночи. Полногеномные транскрипционные профили определяли для штаммов S. pyogenes дикого типа SF370, CS101, 5005 и их мутантов по гену rgg посредством микрочиповой технологии. С этой целью из 40 мл культур, выращенных до постлогарифмической фазы, выделяли тотальную РНК согласно протоколу RNeasy Mini Kit (QIAGEN, США). Для микрочипового анализа использовали препараты фирмы «Af-fymetrix», созданные на основе полноразмерной последовательности штамма SF370 [11]. Синтез кДНК и гибридизацию кДНК с микрочипами проводили согласно протоколу фирмы «Invitrogen». Различия в уровнях транскрипции генов у разных штаммов рассчитывали по программе ArrayStar (Nimblegen, США) как отношение интенсивностей сопоставимых ячеек микрочипов и двукратную (и более) разницу в экспрессии генов (Р < 0,05) принимали в качестве достоверно значимой. Количественную ПЦР (ПЦР в режиме реального времени) с обратной транскриптазой проводили на оборудовании ABI Prism 7500 Real-Time PCR System (Applied Biosystems) с использованием набора Power SYBR® Green RNA-to-CT™ 1-Step Kit (Applied Biosystems) согласно протоколу производителя. Уровни транскрипции каждого из анализированных генов нормализовали по отношению к уровням транскрипции гена gyrA. Для оценки вирулентности изучаемых штаммов применяли внутрибрюшинное заражение лабораторных мышей и метод прямого бактерицидного теста. В качестве лабораторных животных использовали беспородных мышей (самцы, 10-12 нед, масса 14- 16 г). Для моделирования стрептококковой инфекции штаммы выращивали при 37 °С в 40 мл бульона Todd-Hewitt Broth в течение ночи, клетки центрифугировали и отмывали физиологическим раствором. Отмытые клетки ресуспендировали в физиологическом растворе и готовили ряд 10-кратных разведений. Животным вводили внутрибрюшинно по 0,5 мл микробной суспензии с различными концентрациями возбудителя (в диапазоне от 106 до 5x108 КОЕ/животное), в зависимости от использованного штамма. Для каждой конкретной дозы заражения использовали по 15 мышей. Наблюдение вели в течение 10 дней. Для подтверждения гибели животных от стрептококковой инфекции делали счетные высевы из селезенок. Достоверность результатов определяли с использованием критерия распределения Стьюдента. Для проведения прямого бактерицидного теста ночную культуру S. pyogenes с концентрацией микроорганизмов 3x102 КОЕ в 100 мкл физиологического раствора смешивали с 300 мкл цельной человеческой крови и инкубировали при 37 °С, встряхивая каждые 20 мин. Пробы отбирали каждый час в течение 6 ч. Количество жизнеспособных стрептококковых КОЕ определяли с помощью счетных высевов. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Ростовые характеристики штаммов дикого типа и их мутантов. В результате анализа кривых роста штаммов было установлено, что инактивация гена sakl89 приводила к незначительным изменениям в динамике роста S. agalactiae во время логарифмической фазы роста, тогда как инактивация гена mutR существенно влияла на ростовые характеристики штаммов S. pyogenes SF370 и NZ131 на всех фазах роста (рис. 1 А, 1Б). Кроме того, инактивация гена rgg у штамма 5. pyogenes SF370 значительно влияла на динамику роста штамма SF370 как в обогащенной среде, так и в минимальных средах, содержащих в качестве единственных источников углерода глюкозу, фруктозу или сахарозу (рис. 1В, 1Г), но не оказала какого-либо влияния на рост штаммов 5005 и CS101 (данные не приведены). Влияние инактивации генов sakl89, mutR, rgg на экспрессию поверхностных и секретируемых белков. Сравнительный анализ штаммов дикого типа и мутантных штаммов выявил значительные различия в экспрессии ряда секретируемых и поверхностных белков, участвующих в формировании вирулентного фенотипа стрептококков. Так, например, экспрессия секретируемых нуклеаз оказалась значительно выше у штамма NZ131, мутантного по гену mutR, по сравнению с исходным штаммом (рис. 2). Инактивация гена rgg приводила к инактивации экспрессии эритрогенного токсина В (SpeB) у всех анализируемых штаммов S. pyogenes (данные не приведены). Анализ штамма S. pyogenes SF370 и штамма, мутантного по гену mutR, с помощью SDS-PAGE показал различия в составе/количестве секретируемых белков. В частности, как видно из электрофо-реграммы (рис. ЗА), только у мутантного штамма присутствует фрагмент размером 74 кДа. Кроме того, фрагмент размером 34 кДа присутствует у mutR мутантного штамма в гораздо большем количестве, чем у штамма SF370. Анализ фрагментов размерами 34 кДа у обоих штаммов методом масс-спектромет-рии показал, что эти белковые бенды соответствуют белку Sic, причем количество его существенно выше у мутантного штамма, что подтверждает данные SDS-PAGE. Анализ клеточных лизатов штамма S. agalactiae 168/00 и штамма, мутантного по гену sakl89, с помощью SDS-PAGE и Western-блоттинга показал, что мутантный штамм не способен экспрессировать IgA-связывающий белок, белок Вас, и, соответственно, связывать IgA человека (рис. ЗБ, ЗВ). Влияние ДНК-связывающих белков на транскрипцию генов. Полногеномные транскрипционные профили были изучены для штаммов 5005, CS101, SF370 и их г££--мутантов на постлогарифмической фазе роста. Сравнительный анализ показал, что инактивация гена rgg привела к изменению уровней транскрипции 3, 13 и 45 генов, соответственно (таблица). Сравнительный анализ транскрипционных ариф- Таблица А о о SF370 mutR профилей обнаружил, что транскрипция лишь двух генов (гена вирулентности speB и смежного с ним гена spy2040) регулировалась в одинаковой мере, а именно: репрессировалась, вследствие инактивации гена rgg, доказывая существование у S. pyogenes "core" Rgg-регулона. Большинство остальных генов регулировалось белком Rgg штаммоспецифическим образом и представляли собой «ub» Rgg-регулоны. Результаты микрочиповой технологии были подтверждены результатами ПЦР в режиме реального времени с коэффициентом корреляции R2 = 0,94. Анализ экспрессии гена вирулентности Ъас S. agalactiae методом ПЦР в режиме реального времени выявил, что инактивация гена белка-регулятора sakl89 приводила к 16-кратному уменьшению транскрипции гена Ъас (данные не приведены), доказывая регуляцию экспрессии белка Вас на уровне транскрипции. Изменение вирулентных свойств штаммов вследствие инактивации генов белков-регуляторов. Инактивация гена sakl89 у штамма S. agalactiae Подпись: 4 е ИрвШ, CVTKI 5) м, двух ним ре, а ации \enes енов 14* и ■ э 3 <50 т I 49 - iD - 16&Ш (9-10т) ч ад - ш SB - SF37D w^-C1-10B;5-10°) SF37U (1 -Юв) SF37D (5-10*1. Подпись: и SF37D mutR-Подпись: n SF370Подпись: Подпись: >анс-шов НПО' ctiae ским 5-5 " оны. 1 пол- 35 ного □ э ■ i. | 25 " ас S. LU g g - 1еме- UP тора 15 эанс- 1 ывая Q5 J a 4. Оценка вирулентных свойств стрептококков при моделировании внутрибрюшинной инфекции на лабораторных мышах (А - S. agalactiae, Б - 5. pyogenes) и с помощью прямого бактерицидного теста (В - S. pyogenes). В скобках указана инфекционная доза (число колониеобразующих единиц, вводимых животному) 168/00 и гена rgg у штамма S. pyogenes NZ131 приводила к повышению вирулентности при моделировании внутрибрюшинной инфекции на лабораторных мышах. В частности, динамики гибели животных, зараженных штаммом S. agalactiae 168/00 и мутант-ным по гену sakl89 штаммом (рис. 4А), существенно различались (Р = 0,0195). В то же время инактивация гена mutR у штамма S. pyogenes SF370 приводила к снижению вирулентных свойств при внутрибрюшинном заражении мышей при двух разных дозах заражения, а именно: 1х108КОЕ (Р = 0,0159) и 5х108 КОЕ (Р = 0,0003). При этом штамм, мутантный по гену mutR, оказался ави-рулентным, не привел к гибели ни одного животного (рис. 4Б). Дополнительно в прямом бактерицидного тесте показано, что штамм SF370 в цельной человеческой крови не погибает и через 6 ч количество его КОЕ увеличивается в 170 раз по сравнению с инокулятом. В отличие от штамма SF370, у штамма, мутантного по гену mutR, значение числа КОЕ при инкубировании в цельной человеческой крови неуклонно снижалось (рис. 4В). ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Взаимодействие стрептококков с организмом хозяина является сложным и многофакторным процессом. Способность стрептококков вызывать инфекционные процессы и поражать многие органы и ткани человека во многом определяется наличием факторов патогенности, способствующих адгезии микроба, его колонизации, проникновению в организм хозяина и уклонению от иммунного ответа. Не менее важна способность патогенных микроорганизмов быстро адаптироваться к изменяющимся условиям окружающей среды и регулировать экспрессию генов, в том числе генов вирулентности. Вот почему изучение известных, а также обнаружение новых путей регуляции генов, участвующих в проявлении микроорганизмами патогенных свойств, а также поиски возможностей влияния на них является актуальной проблемой современной науки. В настоящей работе были охарактеризованы белки-регуляторы MutR и Rgg 5. pyogenes и белок Sakl89 S. agalactiae с целью выявить общие закономерности влияния белков-регуляторов транскрипции на метаболизм и вирулентные свойства патогенных стрептококков. Как продемонстрировано в настоящей работе, инактивация лишь одного гена (mutR, rgg или sakl89) из почти 2000 генов, кодируемых геномом стрептококка [11, 19, 28], способна оказать существенное влияние на самые разные аспекты жизнедеятельности микроорганизма. Так, инактивация этих генов в той или иной мере влияет на ростовые характеристики штаммов (продолжительность лаг-фазы, скорость размножения и роста во время логарифмической фазы, оптическая плотность культуры, при которой достигается стационарная фаза и др.) в обогащенных и «минимальных» средах. Несомненно, что такие изменения обусловлены нарушением экспрессии ряда ферментов гликолиза и/или других метаболитических путей. Тем не менее далее сравнительный анализ полногеномных транскрипционных профилей штамма SF370 и его мутанта по гену rgg, с использованием 2-кратной разницы в транскрипции генов в качестве пороговой, не позволил предположить, какие конкретно гены приводят к нарушениям в показателях кинетики. Однако эти данные позволяют заключить, что порой незначительные нарушения в транскрипции отдельных генов (отличающиеся менее, чем в 2 раза) могут оказывать существенное влияние на поведение стрептококков. С использованием микрочиповой технологии и ПЦР в режиме реального времени показано, что регуляция экспрессии генов белками-регуляторами происходит в первую очередь на уровне транскрипции и находит свое отражение в экспрессии белков, в частности факторов патогенности. Действительно, \ инактивация каждого из трех проанализированных генов регуляторов транскрипции (mutR, rgg, sakl89) влияет на экспрессию факторов патогенности стреп- I тококков. Например, регулятор Rgg является активатором цистеиновой протеиназы SpeB; регулятор Sakl89 является активатором белка Вас; регулятор MutR влияет на экспрессию белка Sic и секретиру- ; емых ДНКаз. Исходя из того, что перечисленные белки (SpeB, Вас, Sic, ДНКазы) являются факторами патогенности [7, 18], логично предположить, что I инактивация белков-регуляторов MutR, Rgg, Sakl89 может приводить к тем или иным изменениям виру- | лентных свойств штаммов. Эта гипотеза была подтверждена результатами экспериментов по моделированию стрептококковой инфекции на лабораторных мышах: в той или иной мере вирулентные свойства штаммов были затронуты вследствие инактивации генов rgg, mutR и sakl89. Наибольшие нарушения вирулентности были обнаружены в результате инактивации гена mutR. Штамм, мутантный по этому гену, оказался авирулентным как в опытах стрептококко- I вой инфекции на лабораторных животных in vivo, так и в прямом бактерицидном тесте по выживанию в цельной человеческой крови in vitro. Следует отметить, что ряд фенотипических | признаков стрептококков может контролироваться В белками-регуляторами штаммоспецифическим образом, что находит свое подтверждение и в других :ристи-юрость ческой оторой юнных эвлены иколи-Тем не омных О и его ратной юрого-кретно с кине-1ТЬ, что шпции 2 раза) шдение ологии но, что торами [скрип-белков, гельно, ванных sakl89) [ стреп-я акти-улятор улятор эетиру-ленные актора-ТГЬ, что Sakl89 м виру-ла под-целиро-торньгх войства ивации ;ния ви-инакти-*гу гену, ококко-т vivo, иванию ческих оваться ким об-других работах [6, 14, 21]. Например, ДНКазная активность S pyogenes зависит от MutR в штамме NZ131, но не в штамме SF370, а кинетика роста зависит от Rgg в штамме SF370, но не в штаммах CS101 и 5005. Данные обстоятельства доказывают, что метаболити-ческие функции и проявление вирулентных свойств микроорганизмом контролируются сложной регуля-торной «сетью», в которую вовлечено большое количество межмолекулярных взаимодействий, нередко штаммоспецифического характера. Таким образом, на примере ДНК-связывающих белков MutR S. pyogenes, Rgg S. pyogenes и Sakl89 S. agalactiae нами продемонстрирована возможность изменения патогенных свойств стрептококков путем воздействия на молекулярные механизмы регуляции транскрипции генов. В качестве дальнейших экспериментов в этой области представляется перспективным изучение каждого из генов белков-регуляторов с целью понимания их межмолекулярного взаимодействия в микробной клетке и в конечном счете с целью расшифровки «тонких» механизмов экспрессии патогенных свойств.

A V Dmitriev

Institute of Experimental Medicine of the NorthWest Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint-Petersburg

A S Rozhdestvenskaya

Institute of Experimental Medicine of the NorthWest Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint-Petersburg

A A Zutkis

Institute of Experimental Medicine of the NorthWest Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint-Petersburg

A A Totolian

Institute of Experimental Medicine of the NorthWest Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Saint-Petersburg

  1. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М., 1984.
  2. Areschoug Т., Stalhammar-Carlemalm М., Karlsson I. et al. Streptococcal (3 protein has separate binding sites for human factor H and IgA-Fc // J. Biol. Chem. 2002. Vol. 277. № 15. P. 12642-12648.
  3. Chaussee M.S., Ajdic D., Ferretti J.J. The rgg gene of Stieptococcus pyogenes positively influences extracellular SPE В production // Infect. Immunol. 1999. Vol. 67. №4. P. 1715-1722.
  4. Chaussee M.A., Callegari E.A., Chaussee M.S. Rgg regulates growth phase-dependent expression of proteins associated with secondary metabolism and stress in Streptococcus pyogenes II J. Bacteriol. 2004. Vol. 186. №21. P. 7091-7099.
  5. Chaussee M.S., Somerville G.A., Reitzer L. et al. Rgg coordinates virulence factor synthesis and metabolism in Streptococcus pyogenes //J. Bacteriol. 2003. Vol. 185. №20. P. 6016-6024.
  6. Cummings C.A., Bootsma H.J., Relman D.A. et al. Species- and strain-specific control of a complex, flexible regulon by Bordetella BvgAS // J. Bacteriol. 2006. Vol. 188. №5. P. 1775-1785.
  7. Cunningham M.W. Pathogenesis of group A streptococcal infections // Clin. Microbiol. Rev. 2000. Vol. 13. №3. P. 470-511.
  8. Dmitriev A.V., McDowell E.J., Kappeler K.V et al. The Rgg regulator of Streptococcus pyogenes influences the utilization of nonglucose carbohydrates, prophage induction, and expression of the NAD-glycohydrolase virulence operon // J. Bacteriol. 2006. Vol. 188. № 20. P. 7230-7241. 9. Dmitriev A., Yang Y.N., Shen A.D. et al. Adjacent location of ьас gene and two-component regulatory system genes within the putative Streptococcus agalactiae pathogenicity island // Folia Microbiol. 2006. Vol. 51. №3. P. 229-235.
  9. Facklam R.R., Washington J.A. Streptococcus and related catalase-negative gram-positive cocci // Manual of Clinical Microbiology / edited by A. Balows [et al.]. American Society for Microbiology. 1991. P. 238239.
  10. Ferretti J.J., McShan W.M., Ajdic D. Complete genome sequence of an M1 strain of Streptococcus pyogenes II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. Vol. 98. № 8. P. 4658-1663.
  11. Glaser P., Rusniok C, Buchrieser C. et al. Genome sequence of Streptococcus agalactiae, a pathogen causing invasive neonatal disease // Mol. Microbiol. 2002. Vol. 45. №6. P. 1499-1513.
  12. Heden, L.-O., Frithz E., Lindahl G. Molecular characterization of an IgA receptor from group В streptococci: sequence of the gene, identification of a prolinerich region with unique structure and isolation of N-terminal fragments with IgA-binding capacity // Eur. J. Immunol. 1991. Vol. 21. № 6. P. 1481-1490.
  13. Hendriksen W.T., SilvaN., Bootsma H.J. Regulation of gene expression in Streptococcus pneumoniae by response regulator 09 is strain dependent // J. Bacteriol. 2007. Vol. 189. № 4. P. 1382-1389.
  14. Hynes W.L., Tagg J.R. A simple plate assay for detection of group A streptococcus proteinase // J. Microbiol. Methods. 1985. Vol. 4. P. 25-31.
  15. Keefe G.P. Streptococcus agalactiae mastitis: a review // Can. Vet. J. 1997. Vol. 38. P. 429-437.
  16. Kreikemeyer В., Mclver K.S., Podbielski A. Virulence factor regulation and regulatory networks in Streptococcus pyogenes and their impact on pathogen-host interactions // Trends Microbiol. 2003. Vol. 11. № 5. P. 224-232.
  17. Lindahl G., Stalhammar-Carlemalm M., Areschoug T. Surface proteins of Streptococcus agalactiae and related proteins in other bacterial pathogens // Clin. Microbiol. Rev. 2005. Vol. 18. № 1. P. 102-127.
  18. McShan W.M., Ferretti J.J., Karasawa T. Genome sequence of a nephritogenic and highly transformable M49 strain of Streptococcus pyogenes II J. Bacteriol. 2008. Vol. 190. № 23. P. 7773-7785.
  19. Qi E, Chen P., Caufield P. W. Purification and biochemical characterization of mutacin I from the group I strain of Streptococcus mutans, CH43, and genetic analysis of mutacin I biosynthesis genes //Appl. Environ. Microbiol. 2000. Vol. 66. № 8. P. 3221-3229.
  20. Ribardo D.A., Mclver K.S. Defining the Mga regulon: comparative transcriptome analysis reveals both direct and indirect regulation by Mga in the group A streptococcus // Mol. Microbiol. 2006. Vol. 62. № 2. P. 491-508.
  21. Sanders J.W., Leenhouts K., Burghoorn J. et al. A chloride-inducible acid resistance mechanism in Lactococcus lactis and its regulation // Mol. Microbiol. 1998. Vol. 27. №2. P. 299-310.
  22. Sitkiewicz I., Musser J.M. Expression microarray and mouse virulence analysis of four conserved two-component gene regulatory systems in group A streptococcus // Infect. Immunol. 2006. Vol. 74. № 2. P. 13391351.
  23. Skaugen M., Andersen E.L., Christie V.H. et al. Identification, characterization, and expression of a second, bicistronic, operon involved in the production of lactocin S in Lactobacillus sakei L45 // Appl. Environ. Microbiol. 2002. Vol. 68. № 2. P. 720-727.
  24. Standish A.J., Stroeher U.H., Paton J.C. The pneumococcal two-component signal transduction system RR/ HK06 regulates CbpA and PspA by two distinct mechanisms // J. Bacteriol. 2007. Vol. 189. № 15. P. 55915600.
  25. Sulavik M.C., Tardif G., Clewell D.B. Identification of a gene, rgg, which regulates expression of glucosyltransferase and influences the Spp phenotype of Streptococcus gordonii Challis // J. Bacteriol. 1992. Vol. 174. № 11. P. 3577-3586.
  26. Tettelin H., Masignani V, Cieslewicz M.J. et al. Complete genome sequence and comparative genomic analysis of an emerging human pathogen, serotype V Streptococcus agalactiae II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. Vol. 99. № 19. P. 12391-12396.
  27. Tettelin H., Masignani V, Cieslewicz M.J. et al. Genome analysis of multiple pathogenic isolates of Streptococcus agalactiae: implications for the microbial «pan-genome» // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. Vol. 102. № 39. P. 13950-13955.

Views

Abstract - 16

Cited-By


Refbacks

  • There are currently no refbacks.

Copyright (c) 2009 Dmitriev A.V., Rozhdestvenskaya A.S., Zutkis A.A., Totolian A.A.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies