Email this article 
Microflora of hatching eggs and ways of its formation
- Authors: Gorfunkel E.P.1, Ilina L.A.1
-
Affiliations:
- BIOTROPH Ltd
- Issue: Vol 5, No 2 (2023)
- Pages: 65-69
- Section: Actual problems: discussion tribune
- URL: https://journals.eco-vector.com/PharmForm/article/view/352544
- DOI: https://doi.org/10.17816/phf352544
- ID: 352544
Cite item
Full Text
Abstract
In this study, the results were obtained reflecting the content of the genetic material of bacteria in incubation eggs. Given the widespread use of chicken embryos in medicine, veterinary medicine and pharmacology, the identification and identification of microorganisms is an important task. In the course of the study, a quantitative and qualitative analysis of the composition of bacteria in various tissues of incubation eggs was carried out. Three average mixed samples of each typical category were selected: chorion-allantois shell (HAO) on the 8th day of incubation, yolk sacs on the 13th, 18th and 20th days of incubation. The study was conducted using real-time PCR (real-time PCR). The collection of samples and sample preparation were carried out in accordance with established standards, ensuring the reliability and accuracy of the obtained data.
Full Text
СОКРАЩЕНИЯ
КЭ – куриные эмбрионы
ХАО – хорион-аллантоисная оболочка
ПЦР – полимеразная цепная реакция.
ВВЕДЕНИЕ
Куриные эмбрионы – уникальная биологическая модель, широко применяемая в медицине, фармакологии и ветеринарии. Куриные эмбрионы (КЭ) являются хорошо изученной системой часто применяемой для получения биопрепаратов, в т. ч. вакцин [1, 2]. В частности, использование этого объекта происходит для оценки механизмов действия, выявления свойств препаратов нового поколения, что связано с невероятно высокой чувствительность зародыша к внешним воздействиям любого генеза [3–6]. Так же КЭ это основа для экспериментального изучения физиологии и патологии сердечно-сосудистой системы. Именно на КЭ изучались роль клеток эндокарда в закладке коронарных сосудов во время трабекуляции миокарда и механизм образования аорты, а так же формирование проэпикарда и эпикарда [7].
Такое широкое использование куриных эмбрионов в различных областях медицины и ветеринарии обусловлено рядом преимуществ, таких как: высокая чувствительность к широкому спектру вирусов; надежные защитные оболочки объекта – скорлупа и подскорлупная оболочки; КЭ легкодоступны и экономичны. К отрицательным сторонам относится нестерильность этого объекта и возможность присутствия в содержимом яиц патогенных агентов (вирусы инфекционного бронхита кур, ньюкаслской болезни, гриппа, лейкоза), в том числе и микроорганизмов, что может явиться причиной искажения результатов исследования. Для определения наличия генетического материала бактерий в структурах инкубационных яиц и тканях зародыша в компании ООО «БИОТРОФ» были проведены молекулярно-генетические исследования куриных эмбрионов. В опыте были исследованы эмбрионы 8-, 13-, 18-, 20-суточного возраста.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В исследовании был проведен количественный и качественный состав бактерий в различных тканях инкубационных яиц. В опыте были отобраны по 3 среднесмешанные пробы: хорион-аллантоисной оболочки (ХАО) от эмбрионов на 8 сутки инкубации, желточных мешков на 13, 18 и 20 сутки инкубации. Исследование проводили методом ПЦР в реальном времени (real-time PCR). Отбор проб и подготовку образцов осуществляли в соответствии с установленными правилами [8].
РЕЗУЛЬТАТЫ
Вне зависимости от срока инкубации во всех образцах были выявлены бактерии, характерные для микробного сообщества желудочно-кишечного тракта в количестве от 5,00 × 104 до 1,13 × 105 геном/г. На 8, 13, 20 сутки в образцах выявлены микроорганизмы, относящиеся к сем. Veillonellaccea до 2,5 × 104 геном/г, выполняющих трансформацию органических кислот. На всех сроках инкубации в исследуемых образцах был выделен генетический материал бактерий относящихся к сем. Enterobacteriaceae от 4,0 × 104 до 1,55 × 105 геном/г, Bacteroides от 6,3 × 104 до 3,52 × 105 геном/г, Eubacteriaceae от 4,0 × 104 до 1,5 × 105 геном/г и дрожжи Candida spp от 2,5 × 104 до 7 × 104 геном/г. Семейство энтеробактерий включает большое число представителей нормофлоры организма и, в то же время, значительное количество патогенных бактерий. Бактероиды вовлечены в процессы сбраживания углеводов, утилизации белков и биотрансформации желчных кислот.
В образцах желточного мешка на всех сроках инкубации, помимо представителей нормофлоры, были выявлены условно-патогенные микроорганизмы Staphylococcus spp. от 1,0 × 104 до 1,09 × 105 геном/г.
ВЫВОДЫ
Полученные данные свидетельствуют о наличие генетического материала микроорганизмов в глубинных структурах инкубационных яиц. Предположительно, попадание микроорганизмов в желточные фолликулы возможно еще в организме несушки благодаря механизму бактериальной транслокации. Проникновение бактерий в толщу скорлупы и на поверхность подскорлупной оболочки возможно в первые часы после снесения, в результате остывания яйца и образования воздушной камеры. Выбирая инкубационные яйца как биологическую модель для экспериментов необходимо принимать во внимание возможное наличие не только представителей облигатной микрофлоры ЖКТ, но и условно-патогенной и патогенной микробиоты внутри инкубационных яиц. Так же при выборе поставщика инкубационных яиц следует учитывать зоосанитарный статус птицеводческого предприятия.
About the authors
Elena P. Gorfunkel
BIOTROPH Ltd
Author for correspondence.
Email: elena@biotrof.ru
SPIN-code: 2958-6204
Quality Specialist
Russian Federation, Saint Petersburg, PushkinLarisa A. Ilina
BIOTROPH Ltd
Email: biotrof@biotrof.ru
Doctor of Biological Sciences, Head of the Molecular Genetic Laboratory
Russian Federation, Saint Petersburg, PushkinReferences
- Shmarov M. M., Logunov D. Yu., Cherenova L. V., Picker E. G. Technology for producing recombinant CELO adenoviruses in chicken embryos in preparative quantities // Biomedicine. – 200. – No. 1. – P. 112–113. (In Russ).
- Stroganova I. Ya. Chicken embryos and their use in virology: method. instructions for laboratory classes / I. Ya. Stroganov; Krasnoyarsk State Agrarian University. – Krasnoyarsk, 2013. – 19 p. (In Russ).
- Monstakova T. V., Azarnova T. O., Kochish I. I. Prospects and advantages of using chicken embryos as model systems for pharmaceutical research using the example of cobalt glycine // Veterinary Pharmacological Bulletin. – 2021. – No. 2. – P. 84–91. (In Russ).
- Development of optimal conditions for cultivating the Newcastle disease virus strain in developing chicken embryos / R. Z. Nurgaziev, A. R. Nurgazieva, E. D. Krutskaya [etc.] // Bulletin of NSAU (Novosibirsk State Agrarian University). – 2019. – No. 1(50). – pp. 148–152. – doi: 10.31677/2072-6724-2019-50-1-148-152. (In Russ).
- Knyazeva V. A. Study of the influence of a magnetic field and laser radiation on the development of the musculoskeletal system of a chicken embryo / V. A. Knyazeva, A. G. Shutenkov; scientific hands F. I. Suleymanov // Youth-science and practice of the agro-industrial complex: materials of the 102nd International Scientific and Practical Conference of Students and Postgraduate Students, Vitebsk, May 29–30, 2017 / Vitebsk State Academy of Veterinary Medicine. – Vitebsk: VGAVM, 2017. – Part 1: Veterinary medicine and biological sciences. – P. 179 (In Russ).
- Pyatkina A. A. Limit doses of penicillin, streptomycin and amphotericin-B for SPF chicken embryos, recommended for virological work / A. A. Pyatkina, N. V. Moroz, T. N. Zybina [et al.] // Veterinary pathology. – 2020. – No. 4(74). – P. 5–12. – doi: 10.25690/VETPAT.2020.51.32.005. (In Russ).
- Kade A. Kh. Chicken embryo as an experimental object for studying the development of the cardiovascular system / A. Kh. Kade, A. I. Trofimenko, A. Yu. Turovaya [etc.] // Russian Medical and Biological Bulletin named after Academician I. P. Pavlova. – 2018. – T. 26, No. 4. – P. 538-546. – doi: 10.23888/PAVLOVJ2018264538-546. (In Russ).
- Pyatkina A. A. Limit doses of penicillin, streptomycin and amphotericin-B for SPF chicken embryos, recommended for virological work / A. A. Pyatkina, N. V. Moroz, T. N. Zybina [et al.] // Veterinary pathology. – 2020. – No. 4(74). – P. 5–12. – doi: 10.25690/VETPAT.2020.51.32.005. (In Russ).
Supplementary files
