Proliferative activity of the epithelium in squamous epithelial lesions of the cervix

Full Text

В течение последнего десяти­летия, когда однозначно признана связь вируса папилломы человека (ВПЧ) с предшественниками цер­викального рака, стало ясно, что основной принцип, лежащий в ос­нове их классификации, некоррек­тен. Патология эпителия, отне­сенная к цервикальной интраэпи­телиальной неоплазии (ЦИН), не имеет единой сущности и содер­жит поражения двух типов. По­ражения, которые цитологически и гистологически относятся к высокой степени, имеют монокло­нальную пролиферацию плоскоэпи­телиальных клеток, которая обыч­но анеуплоидная и связана почти всегда с «канцер-ассоциированными» ВПЧ-типами, такими как 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51 и 58 [5, 14]. Проспективные исследования про­демонстрировали, что плоскокле­точные интраэпителиальные по­ражения высокой степени (В-ПИП) являются истинной неопла­зией и ведут к персистенции или прогрессии, если их ни лечить [9, 11].

Гистологически и цитологичес­ки низкая степень плоскоклеточ­ного интраэпителиального пораже­ния (Н-ПИП) характеризуется значительным цитопатическим эффектом, проявляющимся в про­дуктивной ВПЧ-инфекции, и обыч­но содержит большое количество вирионов. В противоположность В-ПИП, Н-ПИП совершенно гетерогенны. Они могут быть как мо­ноклональными, так и поликлональ­ными, обычно они диплоидные или полиплоидные и могут быть свя­заны с любым из более чем 25 типов ВПЧ, которые инфицируют аногенитальный тракт. Н-ПИП имеют гетерогенное биологическое поведение: хотя более половины спонтанно регрессирует в отсут­ствие терапии, приблизительно 16% имеют вероятность прогрес­сировать в В-ПИП или инвазив­ный рак, если остаются непролеченными [6, 11].

В то время как ВПЧ играет критическую роль в процессе цер­викального канцерогенеза, взаимо­действие с другими онкогенами может быть важным для финаль­ного превращения в рак. В насто­ящее время внимание исследова­телей привлечено к изучению цер­викального канцерогенеза путем наблюдения за взаимосвязью раз­личных биомаркеров с цервикаль­ными поражениями во время их прогрессии в цервикальный рак. Изучаются количественные гис­топатологические маркеры, проли­феративные, регуляторные марке­ры, основные маркеры стабильно­сти генома и др. Особое место принадлежит белку р53. Исследо­ванием его структуры занимаются ведущие биологи мира, считая, что он является узловой точкой гено­ма, изменения в которой запуска­ют развитие опухоли [2, 4, 13, 15]. В 1990 г. были определены функ­ции р53 в нормальных клетках как гена-супрессор а опухолевого роста [1, 10], особенностью которого яв­ляется одновременное функциони­рование обоих аллелей в нормаль­ных клетках. Нарушение функции р53 может происходить в резуль­тате потери одного аллеля и/или мутации в другом. Итогом явля­ется повышенная сверхэкспрессия гена и, как следствие, появление в клетке мутантной формы белка р53, утрата его сдерживающего влияния на пролиферацию клеток, что может приводить к их не­контролируемому делению [ 1, 7, 8]. На тканевом уровне нарушения в геноме проявляются в неконтро­лируемой пролиферации опухоле­вых клеток.

Исследованию пролифератив­ной активности (ПА) как пока­зателю биологической агрессии опухоли в последнее десятилетие придается большое значение, чему особенно способствовало появле­ние моноклональных антител к белкам пролиферации и внедрение в лабораторную практику проточ­ных цитофотометров и анализа­торов изображения, что позволи­ло стандартизировать подходы к определению ПА [12].

Широкое распространение в настоящее время получили анти­тела PC-10, которые реагируют с формалин-резистентным эпито­пом ядра, где содержится антиген пролиферирующих клеток (PCNA), накапливающийся во время кле­точного цикла. Использование моноклональных антител к PCNA дает возможность предположить, что PCNA является существен­ным компонентом при синтезе ДНК. Полупериод существования белка PCNA составляет около 20 часов и, таким образом, его мож­но обнаружить иммуногистохими­чески в клетках, которые завер­шили клеточный цикл.

Пролиферативная активность многослойного плоского эпителия (МПЭ) изучена нами с помощью моноклональных антител PC-10 к антигену ядер пролиферирующих клеток (PCNA) в биоптатах 144 пациенток с гистологически под­твержденным плоскоклеточным интраэпителиальным поражением (ПИП). Оценка интенсивности реакции проводилась полуколичественным методом путем подсче­та количества окрашенных ядер в процентах по отношению к их общему числу. Использованы сле­дующие критерии: количество ок­рашенных клеток; интенсивность окраски (изменение окраски ядер от светло-коричневой до темно-коричневой); распределение окра­шенных клеток в ткани (в плас­те многослойного плоского эпите­лия).

Поскольку у большей части больных (71%) атипичный эпите­лий находился в пределах зоны трансформации, в качестве конт­роля исследованы 3 биоптата ори­гинального МПЭ и 7 биоптатов, соответствующих морфологическому диагнозу эндоцервикоза. Ус­тановлено, что ни в одном случае контроля (как при нормальном МПЭ, так и эндоцервикозе) эксп­рессия PCNA иммуногистохими­ческим методом не выявляется.

Среди 144 биоптатов с нали­чием ПИП в 120 (84%) случаев была выявлена пролиферативная активность. Слабая реакция (+), когда было окрашено до 25% ядер, наблюдалась в 54 (38%) биопта­тах, подавляющая часть которых (89%) приходилась на гистологи­ческую группу с Н-ПИП. Имму­ногистохимический анализ показал наличие окрашенных ядер только в базальном слое МПЭ. Специфи­ческое окрашивание изменялось от светло-коричневого до коричнево­го цветов. При этом отмечено преобладание слаб о окрашенных ядер и только отдельные клетки были окрашены умеренно. Число окрашенных ядер варьировало от 6,2% до 24,6%.

Умеренная экспрессия PCNA (++) была выявлена в 40 (28%) биоптатов, большей частью пред­ставленных В-ПИП (65%). От­мечалось сходство иммуногисто­химических картин в препаратах, относящихся к различным гисто­логическим группам. В поверхнос­тных слоях МПЭ ядер с продук­тами реакции не выявлено. В ос­новном пролиферирующие ядра располагались в базальном и парабазальном слоях эпителиально­го пласта ткани шейки матки. Количество клеток с меткой в ядрах при данном уровне ПА уве­личилось по сравнению со слабым, окрашенные составили от 38,8% до 49,0% всех клеток МПЭ.

Высокий уровень экспрессии PCNA (+++) присутствовал в 26 (18%) биоптатах и также чаще встречался у больных с В-ПИП (62%). Окрашенные в темно-ко­ричневый цвет ядра пролифериру­ющих клеток располагались по всему эпителиальному пласту, включая поверхностные слои. В некоторых случаях отмечалась зональность реакции, что прояв­лялось в наличии очагов клеток с окрашенными ядрами в пределах покровного эпителия. Какой-либо закономерности расположения клеток не наблюдалось. Количе­ство клеток с мечеными ядрами составило больше 50% от всех клеток МПЭ.

И наконец, в 24 (16%) случаях ПИП выявлена отрицательная им­муногистохимическая реакция, чаще наблюдаемая в группе Н-ПИП (63%).

Таким образом, результаты исследований показали, что 84% ПИП сопровождаются экспресси­ей PCNA. При этом 55% Н-ПИП характеризуются наличием слабой пролиферативной активности и только 11%-высокой. Для боль­шинства же больных с В-ПИП (74%) характерна умеренная и выраженная ПА, являющаяся, не­видимому, критерием предраковых изменений МПЭ.

Как известно, продукты вирус­ных онкогенов Е6 и Е7 инактиви­руют продукты генов опухолевой супрессии р53 и Rb. Белок р53 контролирует начальную фазу цикла клеточного деления. Про­должительная экспрессия онкоге­нов ВПЧ ведет к деградации р53, геномной нестабильности церви­кальных клеток и их неконтроли­руемому делению [1, 7]. В то же время некоторые авторы [12] об­наружили наиболее высокую ПА в базальных слоях цервикальных кондилом, содержащих ДНК ВПЧ типов «низкого риска» (6/11). Возможно, этот факт свидетель­ствует о пролиферативной фазе развития поражения, подобно на­личию таковой при остроконеч­ных кондиломах [3], и плоские кон­диломы, как и остроконечные, мо­гут быть разделены на три груп­пы: пролиферативные, с наличием вирусной репликации и регрессив­ные. Следовательно, повышение ПА является если и не критерием неопластического процесса, то, по крайней мере, фактором прогноза, определяющим длительную перси­стенцию и вероятную прогрессию ПИП, что чрезвычайно важно для определения лечебной тактики. Выжидательная тактика и на­дежда на самопроизвольную регрессию оправданы только при по­ражениях низкой степени со сла­бой пролиферативной активнос­тью. Все поражения высокой сте­пени и Н-ПИП с умеренной и вы­раженной ПА должны подвергать­ся локальной деструкции.

About the authors

I. B. Manukhin

Moscow State University of Medicine and Dentistry

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow

G. .N. Minkina

Moscow State University of Medicine and Dentistry

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Moscow

References

Supplementary files