Determination of papilloma-virus infection reproductive phase in algorithm of monitoring patients with cervical displasia

Full Text

Введение

Известно, что папилломавирусы человека (ПВЧ) 16 и 18 типов являются основной причиной развития цервикальных дисплазий и рака шейки матки (РШМ). ДНК ПВЧ обнаруживается в 95% случаев РШМ [1, 8].

Однако эпидемиологические исследования показывают, что не у всех ВПЧ-инфицированных женщин развивается дисплазия, и далеко не у всех женщин дисплазия прогрессирует в РШМ [4, 7]. У большинства вирус самопроизвольно элиминируется из организма, и только у 10-15% женщин он персистирует достаточно долгое время, приводя к формированию дисплазии [2, 3]. Аналогичная тенденция наблюдается и в динамике развития дисплазий: лишь около 10-15% из них прогрессируют в более тяжелые степени вплоть до развития РШМ [5, 6].

В настоящее время представляют интерес факторы, помогающие прогнозировать течение ПВЧ-инфекции и, соответственно, развитие дисплазии. Немаловажно определить не только присутствие самого вируса, но и подтвердитъ, находится он в активной (репликативной) или латентной стадии. Доказательство активной фазы инфекции, сопровождающейся размножением ПВЧ, является важным фактором в прогнозировании течения заболевания, выборе метода лечения и контроле его качества, а также получении эпидемиологических данных.

Целью данной работы явилось определение активности ПВЧ-инфекции у женщин с различной степеньюх дисплазии с помощью иммуноцитохимического (ИЦХ) исследования цервикальных мазков и обратно-транскриптазной ПЦР (ОТ ПЦР), а также сравнение эффективности 2-х вышеупомянутых методов.

Методика

Была обследована 181 женщина с различной патологией шейки матки. Средний возраст обследованных женщин составил 32,6 года. Все женщины прошли кольпоскопическое и онкоцитологическое обследование по Папаниколау. Присутствие ДНК ПВЧ подтверждали методом ПЦР с помощью скрининговых тест-систем для определения общих генов ПВЧ и отдельно для определения генов ПВЧ высокой степени онкогенности 16 и 18 типов «ДНК-технология», Москва). Одновременно активную фазу ПВЧ-инфекции подтверждали у ПВЧ-инфицированных женщин с помощью (ИЦХ) цервикальных мазков ( Viroactiv®, Virofem Diagnostica GmbH, Germany) и ОТ ПЦР.

ИЦХ исследование основывается на определении капсидных белков ПВЧ с помощью моноклональных антител S33 и Т16. Капсидопротеин L1 синтезируется в различных видах эпителиальных клеток исключительно в поздней фазе продуктивной инфекции и является необходимым для образования вирусных частиц. Таким образом, его выявление является важным признаком активного вирусного процесса.

Распознаваемый моноклональным скрининговым антителом S33 эпитоп консервативен и дает возможность подтверждения наличия почти всех субтипов ПВЧ. Исключение составляют сцбтипы 1, 40 и 63, эпитопы которых подвержены сильным изменениям.

Эпитоп, распознаваемый моноклональным антителом Т16, напротив, консервативен для генитальных субтипов 16 и 18, имеющих склонность к злокачественной трансформации эпителия.

Результаты

Данные онкоцитологического исследования женщин, а также уровень инфицирования женщин ПВЧ в зависимости от степени выявленной патологии представлены в табл. 1.

 

Таблица 1. Частота выявления ДНК ПВЧ в цервикальном эпителии по данным ПЦР в зависимости от степени CIN

Группы пациентов	Данные онко- цитологии (N/%)	Частота выявления ДНК ПВЧ
		Screen (N/%)	HPV 16/18 (N/%)
Без атипии	35 (19,3%)	15(42,9%)	10(28,6%)
CINI	78(43,1%)	40(51,3%)	35(44,9%)
CIN II	36(19,9%)	26 (72,2%)	16(44,4%)
CIN III	20(11,0%)	10(50,0%)	14 (70,0%)
Сa in situ	12 (6,6% )	10(83,3%)	9(75,0%)
Всего:	181 (100%)	101(55,8%)	84 (46,4%)

 

По данным онкоцитологического исследования у 35 (19,3% ) женщин мазки были без атипии, у 78 (43,1%) - СІИ I, у 36(19,9%)- CIN II, у 20(11,0%) - CIN III, у 12 (6,6%) — Са in situ.

Частота инфицирования ПВЧ, обнаруженная при использовании скрининговых праймеров, составила в среднем 55,8%. Однако внутри различных групп пациентов уровень выявления ДНК ВПЧ значительно различался: от 42,9% при нормальных мазках до 83,3% при Са in situ.

Аналогичный уровень распределения частоты наблюдался при инфицировании ВПЧ 16 и/или 18 типов. ДНК ПВЧ 16 и/или 18 типов была обнаружена в среднем У 46,4% женщин. Минимальный уровень частоты выявления ДНК ВПЧ составил 28,6% среди женщин без атипии и оказался максимальным (75,0%) при Сa in situ.

У 101 ПВЧ-инфицированной женщины было проведено ИЦХ обследование с целью выявления репродуктивной фазы ПВЧ-инфекции в цервикальных соскобах. Исследование проводилось как с помощью скрининговых антител, позволяющих определять всю группу ПВЧ, так и с помощью антител, позволяющих определять ПВЧ 16 и 18 типов. Данные по результатам ИЦХ исследования представлены в табл. 2.

 

Таблица 2. Частота выявления репродуктивной фазы ПВЧ-инфекции в цервикальных соскобах с помощью иммуноцитохимического (ИЦХ) исследования

Группы пациентов	Screen		HPV 16/18
	ПЦР (+) (N/%)	ИЦХ (+) (N/%)	ПЦР (+) (N/%)	ИЦХ (+) (N/%)
Без атипии	15(14,9%)	1 (6,7%)	10(11,9%)	1 (10,0%)
CINI	40(39,6%)	11(27,5%)	35(41,7%)	8(22,9%)
СIN II	26(25,7%)	4(15,4%)	16(19,0%)	1(6,25%)
CIN III	10(9,9%)	1(10%)	14 (16,7%)	1(7,1%)
Сa in situ	10(9,9%)	—	9(10,7%)	—
Всего:	101 (100%)	17(16,8%)	84(100%)	11(13,1%)

 

Результаты ИЦХ исследования оказались положительными у 17 (16,8%) из 101 ПВЧ-инфицированной женщины. Наиболее высокая частота выявления активной ПВЧ-инфекции оказалась при СІИ I и составила 27,5%. По мере нарастания степени тяжести дисплазии активность ПВЧ- инфекции уменьшалась и уже не наблюдалась при Са in situ, что свидетельствует о переходе продуктивной фазы инфекции в интегративную, характерную для неопластических процессов.

Те же пробы оказались положительными и при исследовании на ПВЧ 16/18 типов. При Са in situ также не было получено положительных результатов ИЦХ исследования.

Кроме того, были проведены исследования для сравнения двух различных методов определения активности ПВЧ-инфекции - ИЦХ и ОТ ПЦР. Данные по сравнению эффективности 2-х вышеперечисленных методов представлены в табл. 3.

 

Таблица 3. Оценка эффективности ИЦХ и ОТ ПЦР при определении репродуктивной фазы ПВЧ-инфекции

Группы пациентов	Screen (N/%)			HPV 16/18 (N/%)
	ПЦР (+)	ИЦХ (+)	ОТ ПЦР (+)	ПЦР (+)	ИЦХ (+)	ОТ ПЦР (+)
Без amunuu	3(7,5%)	1(33,3%)	2(66,7%)	2(28,6%)	1(50,0%)	1(50,0%)
CIN I	17(42,5%)	5(29,4%)	9(53,0%)	15(45,5%)	5(33,3%)	6(40,0%)
CIN II	8(20,0%)	—	—	5(45,5%)	—	—
CIN III	4(10,0%)	—	—	3(37,5%)	—	—
Ca in situ	8(20,0%)	—	—	7(70,0%)	—	—
Всего:	40(100,0%)	6(15,0%)	11(27,5%)	32(46,4%)	6(18,75%)	7(21,9%)

 

Активная фаза инфекции с помощью ИЦХ была подтверждена у 6 (15,0% ) женщин, а с помощью ОТ ПЦР — еще у 5, что говорит о ее более высокой чувствительности.

Репродуктивная фаза ПВЧ 16 или 18 типов была подтверждена у 6 (18,75%) человек с помощью ИЦХ, а с помощью ОТ ПЦР — у 7 (21,9%). Однако здесь необходимо отметить, что данные ИЦХ не всегда совпадали с данными ОТ ПЦР. В 4-х случаях результаты ИЦХ и ОТ ПЦР подтвердили друг друга, в 2-х — были положительными только ИЦХ, в 3-х - только ОТ ПЦР.

Обсуждение результатов

Активная фаза ПВЧ-инфекции была подтверждена у 27,5% ПВЧ-инфицированных женщин, преимущественно со слабо выраженной дисплазией. Доказательство репродуктивной фазы для рода ПВЧ в целом оказалось более информативным с помощью ОТ ПЦР, в то время как для ПВЧ 16 и 18 типов данные ИЦХ и ОТ ПЦР дополняли друг друга.

Для таких больных прогрессия CIN более вероятна, чем элиминация ПВЧ и регрессия дисплазии. Определение активной фазы ПВЧ- инфекции может служитъ дополнительным критерием обследования женщин с дисплазиями, а ее положительные результаты — поводом для более тщательного наблюдения и интенсивного лечения, что, в свою очередь, приведет к снижению заболеваемости и смертности от рака шейки матки. Определение репликативной фазы инфекции с помощью использованных методов может иметь и определенное эпидемиологическое значение, делая желательным обследование партнеров и проведение соответствующей разъяснительной работы.

About the authors

S. A. Selkov

Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS; 22 city women's consultation

Author for correspondence.
Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg; Saint Petersburg

G. N. Vedeneeva

Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS; 22 city women's consultation

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg; Saint Petersburg

I. A. Baskakova

Research Institute of Obstetrics and Gynecology named after D.O. Otta RAMS; 22nd city women's consultation

Email: info@eco-vector.com
Russian Federation, Saint Petersburg; Saint Petersburg

S. R. Baur

Virofem Diagnostica GmbH

Email: info@eco-vector.com
Germany, Wiesbaden, Hessen

References

Supplementary files