Определение репродуктивной фазы папилломавирусной инфекции в алгоритме наблюдения пациентов с цервикальной дисплазией
- Авторы: Сельков С.А.1,2, Веденеева Г.Н.3,2, Баскакова И.А.1,2, Баур С.Р.4
-
Учреждения:
- НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта РАМН
- 22-я городская женская консультация
- НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН
- Virofem Diagnostica GmbH
- Выпуск: Том 51, № 4 (2002)
- Страницы: 61-63
- Раздел: Актуальные проблемы здравоохранения
- URL: https://journals.eco-vector.com/jowd/article/view/91125
- DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD91125
- ID: 91125
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Папилломавирусы человека (ПВЧ) 16 и 18 типов — основная причина развития цервикальных дисплазий и рака шейки матки.
При этом степень активности вируса в значительной степени определяет длительность его персистенции в организме и, соответственно, риск развития и прогрессирования дисплазии. Целью данной работы явилось не только подтверждение присутствия ДНК ПВЧ в эпителии цервикального канала, но и определение степени его активности с помощью иммуноцитохимического (ИЦХ) анализа и обратнотранскриптазной ПЦР (ОТ ПЦР). При обследовании 181 женщины с различной патологией шейки матки было определено, что уровень инфицирования ПВЧ, включая онкогенные и неонкогенные типы, составил в среднем 55,8%. Активная фаза ПВЧ-инфекции была подтверждена у 27,5% ПВЧ-инфицированных женщин, преимущественно со слабо выраженной дисплазией.
Доказательство репродуктивной фазы для рода ПВЧ в целом оказалось более информативным с помощью ОТ ПЦР, в то время как для ПВЧ 16 и 18 типов данные ИЦХ и ОТ ПЦР дополняли друг друга.
Полный текст
Введение
Известно, что папилломавирусы человека (ПВЧ) 16 и 18 типов являются основной причиной развития цервикальных дисплазий и рака шейки матки (РШМ). ДНК ПВЧ обнаруживается в 95% случаев РШМ [1, 8].
Однако эпидемиологические исследования показывают, что не у всех ВПЧ-инфицированных женщин развивается дисплазия, и далеко не у всех женщин дисплазия прогрессирует в РШМ [4, 7]. У большинства вирус самопроизвольно элиминируется из организма, и только у 10-15% женщин он персистирует достаточно долгое время, приводя к формированию дисплазии [2, 3]. Аналогичная тенденция наблюдается и в динамике развития дисплазий: лишь около 10-15% из них прогрессируют в более тяжелые степени вплоть до развития РШМ [5, 6].
В настоящее время представляют интерес факторы, помогающие прогнозировать течение ПВЧ-инфекции и, соответственно, развитие дисплазии. Немаловажно определить не только присутствие самого вируса, но и подтвердитъ, находится он в активной (репликативной) или латентной стадии. Доказательство активной фазы инфекции, сопровождающейся размножением ПВЧ, является важным фактором в прогнозировании течения заболевания, выборе метода лечения и контроле его качества, а также получении эпидемиологических данных.
Целью данной работы явилось определение активности ПВЧ-инфекции у женщин с различной степеньюх дисплазии с помощью иммуноцитохимического (ИЦХ) исследования цервикальных мазков и обратно-транскриптазной ПЦР (ОТ ПЦР), а также сравнение эффективности 2-х вышеупомянутых методов.
Методика
Была обследована 181 женщина с различной патологией шейки матки. Средний возраст обследованных женщин составил 32,6 года. Все женщины прошли кольпоскопическое и онкоцитологическое обследование по Папаниколау. Присутствие ДНК ПВЧ подтверждали методом ПЦР с помощью скрининговых тест-систем для определения общих генов ПВЧ и отдельно для определения генов ПВЧ высокой степени онкогенности 16 и 18 типов «ДНК-технология», Москва). Одновременно активную фазу ПВЧ-инфекции подтверждали у ПВЧ-инфицированных женщин с помощью (ИЦХ) цервикальных мазков ( Viroactiv®, Virofem Diagnostica GmbH, Germany) и ОТ ПЦР.
ИЦХ исследование основывается на определении капсидных белков ПВЧ с помощью моноклональных антител S33 и Т16. Капсидопротеин L1 синтезируется в различных видах эпителиальных клеток исключительно в поздней фазе продуктивной инфекции и является необходимым для образования вирусных частиц. Таким образом, его выявление является важным признаком активного вирусного процесса.
Распознаваемый моноклональным скрининговым антителом S33 эпитоп консервативен и дает возможность подтверждения наличия почти всех субтипов ПВЧ. Исключение составляют сцбтипы 1, 40 и 63, эпитопы которых подвержены сильным изменениям.
Эпитоп, распознаваемый моноклональным антителом Т16, напротив, консервативен для генитальных субтипов 16 и 18, имеющих склонность к злокачественной трансформации эпителия.
Результаты
Данные онкоцитологического исследования женщин, а также уровень инфицирования женщин ПВЧ в зависимости от степени выявленной патологии представлены в табл. 1.
Таблица 1. Частота выявления ДНК ПВЧ в цервикальном эпителии по данным ПЦР в зависимости от степени CIN
Группы пациентов | Данные онко- цитологии (N/%) | Частота выявления ДНК ПВЧ | |
Screen (N/%) | HPV 16/18 (N/%) | ||
Без атипии | 35 (19,3%) | 15(42,9%) | 10(28,6%) |
CINI | 78(43,1%) | 40(51,3%) | 35(44,9%) |
CIN II | 36(19,9%) | 26 (72,2%) | 16(44,4%) |
CIN III | 20(11,0%) | 10(50,0%) | 14 (70,0%) |
Сa in situ | 12 (6,6% ) | 10(83,3%) | 9(75,0%) |
Всего: | 181 (100%) | 101(55,8%) | 84 (46,4%) |
По данным онкоцитологического исследования у 35 (19,3% ) женщин мазки были без атипии, у 78 (43,1%) - СІИ I, у 36(19,9%)- CIN II, у 20(11,0%) - CIN III, у 12 (6,6%) — Са in situ.
Частота инфицирования ПВЧ, обнаруженная при использовании скрининговых праймеров, составила в среднем 55,8%. Однако внутри различных групп пациентов уровень выявления ДНК ВПЧ значительно различался: от 42,9% при нормальных мазках до 83,3% при Са in situ.
Аналогичный уровень распределения частоты наблюдался при инфицировании ВПЧ 16 и/или 18 типов. ДНК ПВЧ 16 и/или 18 типов была обнаружена в среднем У 46,4% женщин. Минимальный уровень частоты выявления ДНК ВПЧ составил 28,6% среди женщин без атипии и оказался максимальным (75,0%) при Сa in situ.
У 101 ПВЧ-инфицированной женщины было проведено ИЦХ обследование с целью выявления репродуктивной фазы ПВЧ-инфекции в цервикальных соскобах. Исследование проводилось как с помощью скрининговых антител, позволяющих определять всю группу ПВЧ, так и с помощью антител, позволяющих определять ПВЧ 16 и 18 типов. Данные по результатам ИЦХ исследования представлены в табл. 2.
Таблица 2. Частота выявления репродуктивной фазы ПВЧ-инфекции в цервикальных соскобах с помощью иммуноцитохимического (ИЦХ) исследования
Группы пациентов | Screen | HPV 16/18 | ||
ПЦР (+) (N/%) | ИЦХ (+) (N/%) | ПЦР (+) (N/%) | ИЦХ (+) (N/%) | |
Без атипии | 15(14,9%) | 1 (6,7%) | 10(11,9%) | 1 (10,0%) |
CINI | 40(39,6%) | 11(27,5%) | 35(41,7%) | 8(22,9%) |
СIN II | 26(25,7%) | 4(15,4%) | 16(19,0%) | 1(6,25%) |
CIN III | 10(9,9%) | 1(10%) | 14 (16,7%) | 1(7,1%) |
Сa in situ | 10(9,9%) | — | 9(10,7%) | — |
Всего: | 101 (100%) | 17(16,8%) | 84(100%) | 11(13,1%) |
Результаты ИЦХ исследования оказались положительными у 17 (16,8%) из 101 ПВЧ-инфицированной женщины. Наиболее высокая частота выявления активной ПВЧ-инфекции оказалась при СІИ I и составила 27,5%. По мере нарастания степени тяжести дисплазии активность ПВЧ- инфекции уменьшалась и уже не наблюдалась при Са in situ, что свидетельствует о переходе продуктивной фазы инфекции в интегративную, характерную для неопластических процессов.
Те же пробы оказались положительными и при исследовании на ПВЧ 16/18 типов. При Са in situ также не было получено положительных результатов ИЦХ исследования.
Кроме того, были проведены исследования для сравнения двух различных методов определения активности ПВЧ-инфекции - ИЦХ и ОТ ПЦР. Данные по сравнению эффективности 2-х вышеперечисленных методов представлены в табл. 3.
Таблица 3. Оценка эффективности ИЦХ и ОТ ПЦР при определении репродуктивной фазы ПВЧ-инфекции
Группы пациентов | Screen (N/%) | HPV 16/18 (N/%) | ||||
ПЦР (+) | ИЦХ (+) | ОТ ПЦР (+) | ПЦР (+) | ИЦХ (+) | ОТ ПЦР (+) | |
Без amunuu | 3(7,5%) | 1(33,3%) | 2(66,7%) | 2(28,6%) | 1(50,0%) | 1(50,0%) |
CIN I | 17(42,5%) | 5(29,4%) | 9(53,0%) | 15(45,5%) | 5(33,3%) | 6(40,0%) |
CIN II | 8(20,0%) | — | — | 5(45,5%) | — | — |
CIN III | 4(10,0%) | — | — | 3(37,5%) | — | — |
Ca in situ | 8(20,0%) | — | — | 7(70,0%) | — | — |
Всего: | 40(100,0%) | 6(15,0%) | 11(27,5%) | 32(46,4%) | 6(18,75%) | 7(21,9%) |
Активная фаза инфекции с помощью ИЦХ была подтверждена у 6 (15,0% ) женщин, а с помощью ОТ ПЦР — еще у 5, что говорит о ее более высокой чувствительности.
Репродуктивная фаза ПВЧ 16 или 18 типов была подтверждена у 6 (18,75%) человек с помощью ИЦХ, а с помощью ОТ ПЦР — у 7 (21,9%). Однако здесь необходимо отметить, что данные ИЦХ не всегда совпадали с данными ОТ ПЦР. В 4-х случаях результаты ИЦХ и ОТ ПЦР подтвердили друг друга, в 2-х — были положительными только ИЦХ, в 3-х - только ОТ ПЦР.
Обсуждение результатов
Активная фаза ПВЧ-инфекции была подтверждена у 27,5% ПВЧ-инфицированных женщин, преимущественно со слабо выраженной дисплазией. Доказательство репродуктивной фазы для рода ПВЧ в целом оказалось более информативным с помощью ОТ ПЦР, в то время как для ПВЧ 16 и 18 типов данные ИЦХ и ОТ ПЦР дополняли друг друга.
Для таких больных прогрессия CIN более вероятна, чем элиминация ПВЧ и регрессия дисплазии. Определение активной фазы ПВЧ- инфекции может служитъ дополнительным критерием обследования женщин с дисплазиями, а ее положительные результаты — поводом для более тщательного наблюдения и интенсивного лечения, что, в свою очередь, приведет к снижению заболеваемости и смертности от рака шейки матки. Определение репликативной фазы инфекции с помощью использованных методов может иметь и определенное эпидемиологическое значение, делая желательным обследование партнеров и проведение соответствующей разъяснительной работы.
Об авторах
С. А. Сельков
НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта РАМН; 22-я городская женская консультация
Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург
Г. Н. Веденеева
НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН; 22-я городская женская консультация
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург
И. А. Баскакова
НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта РАМН; 22-я городская женская консультация
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург
С. Р. Баур
Virofem Diagnostica GmbH
Email: info@eco-vector.com
Германия, Висбаден
Список литературы
- Киселёв Ф. Л., Мазуренко Н. Н., Киселева Н. П. и др. // Вести. Росс. Акад. Мед. Наук. — 2002. — № 1. - С. 8-14.
- Duggan М. A., McGregor S. Е., Stuart G. С. // Eur. J. of Gynaec. Oncol. - 1998. - Vol. 19(4). - P. 338-344.
- Ferenczy A., Mitao M., Nagai N.et. al. // N. Engl. J. Med. — 1985. — Vol. 313. - P. 784.
- Hildesheim A, Schiff man M. H., Gravitt P. E. et al. // J. Infectious Dis. — 1994. - Vol. 169. - P. 235-240.
- Moscicki A. B., Shiboski S., Broering J. et. al. //J. of Pedatrics. — 1998. - Vol. 132 (2). - P. 277-284.
- Nuovo G. J., Pedemonte В. M. // Am. Me. Assoc. — 1990. — Vol.263. - P. 1223-1226.
- Velasco J., Blanco C. F., Carrascosa I. L. et. al. // Eur. J. Gynaec. Oncol. - 1996. - Vol. XVII, N 5. - P. 372-377.
- Zur Hausen H. //European J. Cancer. — 1999. — Vol. 35.—P. 1878-1885.