Система гемостаза и иммуноморфологическое состояние плаценты при наличии в плазме крови антифосфолипидных антител с учетом их класса и исхода беременности
- Авторы: Кошелева Н.Г.1, Зубжицкая Л.Б.1, Аржанова О.Н.1, Тышкевич О.В.1, Громыко Ю.Л.1, Шляхтенко Т.Н.1, Плужникова Т.А.1, Шаповалова Е.А.1
-
Учреждения:
- Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
- Выпуск: Том 53, № 1 (2004)
- Страницы: 22-26
- Раздел: Оригинальные исследования
- Статья получена: 14.01.2004
- Статья одобрена: 05.11.2021
- Статья опубликована: 14.01.2004
- URL: https://journals.eco-vector.com/jowd/article/view/86971
- DOI: https://doi.org/10.17816/JOWD86971
- ID: 86971
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Проведено комплексное исследование системы гемостаза у 197 женщин с привычным невынашиванием беременности. Из них изучение состояния плаценты иммуноморфологическим методом проведено у 41 женщины и у 52 женщин определено наличие аутоантител к β2-ГП-1 в плаценте.
Независимо от класса АФА выявлена гиперактивация тромбоцитарного компонента, которая значительно усиливается с началом беременности и прогрессирует с ростом гестации. Установлена достоверная связь между исходом беременности и степенью активности кровяных пластинок. Обнаружено отсутствие влияния аКЛ на плазменно-коагуляционное звено гемостаза. Циркуляция ВА сопровождалась признаками гиперкоагуляции. Во всех исследованных группах установлено угнетение фибринолиза.
При иммуноморфологическом исследовании плацент выявлено большее отложение ПИК при ВА и β2-ГП-1, связанном с аКЛ.
Ключевые слова
Полный текст
В последнее время все большее внимание ученых привлекает антифосфолипидный синдром (АФС), который в значительной степени увеличивает как материнскую, так и перинатальную смертность [2—4]. Однако исследованию гемостаза при циркуляции антифосфолипидных антител (АФА) у беременных женщин уделяется недостаточное внимание. Вместе с тем изучение тромбоцитарного звена гемостаза при беременности представляет особый интерес, так как тромбоциты осуществляют регуляцию кровотока в микроциркуляторном русле [1, 5].
Для прогнозирования осложнений беременности и ее возможных исходов должно быть четкое представление о функционировании системы гемостаза при наличии АФА разных классов в сопоставлении с морфологическими изменениями в плаценте.
Целью работы явилось изучение системы гемостаза и иммуноморфологического состояния плаценты при наличии в плазме крови АФА с учетом их класса и исхода беременности.
Материалы и методы исследования: были обследованы 197 женщин с привычным невынашиванием беременности. Иммуноморфологическое исследование биоптатов плаценты проведено у 20 здоровых беременных женщин и у 41 женщины с учетом класса АФА (аКЛ/BA). У 52 женщин изучалось наличие аутоантител к β2-ГП-1. Возраст обследуемых женщин находился в пределах от 20 до 42 лет.
Анализ соматической патологии показал, что у женщин с наличием АФА детские инфекции встречались в 3 раза чаще и в 10 раз чаще наблюдались аллергические реакции по сравнению с женщинами без аутоантител. У женщин с наличием волчаночного антикоагулянта (ВА) в 1,5 раза чаще, чем при антикардиолипиновых антителах (аКЛ) диагностировалась тиреоидная патология, в 3 раза чаще ожирение и ВСД по гипертоническому типу. Варикозная болезнь при циркуляции ВА встречалась в 7 раз чаще по сравнению с аналогичным показателем при аКЛ (18,5±7,5 и 2,4±2,3 % соответственно).
У 2/з женщин с АФА выявлена высокая частота хронических воспалительных заболеваний половых органов. При циркуляции ВА они встречались в 74,1 ±8,4% случаев, что в 1,3 раза чаще, чем при наличии аКЛ (59,5±7,6%).
Процент самопроизвольных абортов в анамнезе у женщин с АФА достоверно превышал в 1,6 раза аналогичный показатель у женщин без АФА и составил 23,6±3,3%. При этом частота спонтанных абортов при аКЛ была 28,9±4,9%, при ВА — 18,3±4,9%. Отмечен также значительный процент неразвивающейся беременности, составляющий 40,0±6,3% при наличии ВА, что в 2 раза чаще по сравнению с аналогичным показателем при аКЛ (20,5±4,4%).
Выявление аКЛ осуществляли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием Anti-Phospholipid Screen with human В2-Glycoprotein I as cofactor (OR GenTec Diagnostica GmbH — Германия).
Биохимическая активность BA определялась по фосфолипидзависимым тестам коагуляции (АПТВ 1:20 и ПВ 1:500).
Для иммуноморфологического и гистологического исследования последов брали образцы тканей центральной и периферической частей плаценты. Криостатные срезы плаценты обрабатывались специфическими иммунными сыворотками с использованием методов прямой и непрямой иммунофлюоресценции. Параллельно проводили гистологическое исследование плаценты по общепринятой методике.
β2-ГП-1 определяли методом флюоресцирующих антител в непрямой модификации с использованием сывороток крови обследуемых женщин, тестированных на наличие антител к кардиолипину на бычьем сердце.
Комплексное изучение свертывающей системы крови включало: исследование сосудистотромбоцитарного и плазменно-коагуляционного звена системы гемостаза. Кроме того, исследовалась активность фактора VIII и общая фибринолитическая активность плазмы, а также ингибиторов фибринолиза.
Статистическая обработка данных проводилась по программе Excel 5,0.
Результаты исследования
Для оценки степени риска тромботических осложнений при беременности было проведено комплексное исследование системы гемостаза у небеременных женщин. Выявлено достоверное увеличение в крови числа активных форм тромбоцитов от 16,9±0,4 (р< 0,001) при аКЛ до 19,6±0,4% (р<0,001) при ВА. Факт инициации тромбоцитарного звена подтверждался достоверным увеличением числа тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты до 7,9±0,1 (р<0,01) при аКЛ и до 8,4±0,2 % (р< 0,01) при ВА. Изучение плазменно-коагуляционного звена у этих женщин выявило отсутствие достоверных изменений показателей общих скрининговых тестов при аКЛ. Циркуляция ВА сопровождалась достоверным удлинением времени свертывания крови до 9,6±0,6 мин (р< 0,05) и индекса АПТВ до 1,05±0,03 % (р< 0,01). Одновременно отмечалось и укорочение ПТИ до 91,5±0,5 % (р< 0,05). При этом концентрация фибриногена в плазме достоверно превышала нормальные показатели в 1,2 раза.
Исследование фибринолитической активности крови выявило достоверное угнетение фибринолиза у всех женщин с АФА.
Изучение сосудисто-тромбоцитарного звена во время гестации обнаружило у всех женщин с АФА и неблагоприятным исходом беременности уже в 1 триместре значительное повышение адгезивно-агрегационных свойств тромбоцитов в 2 и более раз при аКЛ и почти в 3 раза при ВА на фоне достоверного снижения их числа в венозной крови (табл.1, 2).
Таблица 1. Показатели гемостаза в I триместре при различных исходах беременности у женщин с аКЛ
Показатели | Здоровые беременные | Неразвивающаяся беременность | Самопроизвольный аборт | Преждевременные роды | Срочные роды |
Тr в венозной крови, 109/л | 244,0±13,2 | 198,3±4,5** | 197,5±12,6** | 203,2±9,1* | 220,0±7,1 |
Сумма активных форм тромбоцитов, % | 12,8±0,5 | 28,6±2,5*** | 27,1 ±1,4** | 23,3±1,О*** | 17,2±0,8*** |
Число тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты, % | 6,8±0,4 | 11,04±1,1** | 11,2±0,5*** | 10,3±0,1*** | 8,1±0,4** |
Агрегация тромбоцитов с ристомицином, % | 94,1±2,6 | 137,3±5,9*** | 134,7±1,9*** | 126,4±6,0*** | 119,5±1,7 |
Время свертывания крови, мин | 7,4±0,4 | 6,93±0,07 | 6,97±0,5 | 7,0±0,1 | 6,9±0,1 |
ПТИ, % | 102,5±1,6 | 106,7±0,9* | 105,3±0,04 | 104,3±1,3 | 102,6±0,6 |
АПТВ-индекс, % | 1,0±0,01 | 0,95±0,02* | 0,93±0,04 | 0,96±0,03 | 0,97±0,05 |
Фибриноген, г/л | 3,4±0,1 | 3,8±0,2* | 3,6±О,3 | 3,9±0,2* | 3,5±0,1 |
Фибринолитическая активность, % | 7,0±0,5 | 5,1±0,5** | 5,9±0,1 | 5,8±0,3* | 5,9±0,4 |
* — р<0,05, ** - р< 0,01, *** -р<0,001 между контрольной и каждой из сравниваемых групп. |
Исследование индуцированной агрегационной активности кровяных пластинок подтвердило гиперактивацию тромбоцитарного компонента гемостаза у всех женщин с наличием АФА. При этом степень агрегационной активности была максимальной при циркуляции ВА и неразвивающейся беременности. Значимое увеличение ристомицин-агрегации еще раз подтверждает наличие выраженных нарушений в микроциркуляторном русле при наличии в кровотоке АФА, с большей степенью нарушений при циркуляции ВА (табл. 2).
Таблица 2. Показатели системы гемостаза в I триместре различных исходов беременности при наличии ВА
Показатели | Здоровые беременные | Неразвивающаяся беременность | Самопроизвольный аборт | Преждевременные роды | Срочные роды |
Тr в венозной крови, 109/л | 244,0±13,2 | 186,7±6,8** | 185,0±8,9** | 181,0±12,3*** | 193,8±10,8** |
Сумма активных форм тромбоцитов, % | 12,8±0,5 | 36,1±0,2*** | 29,8±2,5*** | 24,7±0,5*** | 18,1±О,5** |
Число тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты, % | 6,8±0,4 | 14,7±0,3*** | 12,1±0,7*** | 1О,8±О,3*** | 8,7±0,1*** |
Агрегация тромбоцитов с ристомицином, % | 94,1±2,6 | 155,3±5,8*** | 143,3±8,2*** | 121,2±0,7*** | 125,2±3,4*** |
Время свертывания крови, мин | 7,4±0,4 | 9,3±О,3** | 9,1±0,6* | 8,8±0,5* | 8,9±0,2** |
ПТИ, % | 102,5±1,6 | 96,5±0,6* | 98,7±0,9 | 100,5±1,3 | 101,8±0,8 |
АПТВ-индекс, % | 1,0±0,01 | 1,15±0,07* | 1,2±0,01*** | 1,1±0,01*** | 1,14±0,01* |
Фибриноген, г/л | 3,4±0,1 | 4,1±0,3* | 3,9±0,2* | 3,8±0,Г* | 3,6±0,1 |
Фибринолитическая активность, % | 7,0±0,5 | 4,4±0,7** | 4,6±0,5** | 5,6±0,4* | 6,2±0,2 |
* - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р< 0,001 между контрольной и каждой из сравниваемых групп. |
Повышение гемостатической активности тромбоцитов приводит к запуску коагуляционного каскада и, как следствие, развитию гиперкоагуляционного синдрома.
Циркуляция аКЛ при неразвивающейся беременности сопровождалась достоверным увеличением — ПТИ и укорочением индекса АПТВ, что свидетельствует о повышении активности прокоагулянтного звена системы гемостаза. О склонности к гиперкоагуляции в этой группе беременных свидетельствовало и достоверное нарастание фибриногена в плазме (р<0,05), которое имело место и при преждевременных родах (табл. 1).
При анализе коагулометрических показателей у беременных с наличием ВА отмечалось достоверное удлинение времени свертывания венозной крови в среднем на 24,0% и индекса АПТВ в среднем на 20% во всех исследуемых группах. Достоверным было увеличение концентрации фибриногена, достигая 4,5±0,1 г/л при неразвивающейся беременности.
Исследование общей фибринолитической активности крови установило статистически значимое угнетение фибринолиза во всех исследованных группах. При исходе беременности в срочные роды и наличии АФА независимо от их класса достоверных отличий от здоровых беременных не было.
Сравнительная оценка состояния сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза в I и последующих триместрах беременности показала, что выявленные нарушения во всех звеньях системы гемостаза в I триместре беременности прогрессировали с ростом гестации, усиливая тем самым тромботическую тенденцию. При этом более выраженные нарушения были отмечены при циркуляции ВА и исходе беременности в преждевременные роды.
Иммуноморфологическое исследование плаценты показало, что при наличии в плазме крови АФА фиксированные иммунные комплексы, включающие СЗ-фракцию комплемента, указывающего на патогенность иммунного комплекса (ПИК), выявлялись в большом проценте наблюдений как в центральной, так и в периферической областях плаценты, особенно при исходе беременности в преждевременные роды и достигало 100% при самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности (табл. 3). и IgA при срочных и преждевременных родах существенно не различался.
При циркуляции ВА максимальные цифры IgM в плаценте имели место при преждевременных родах в центральной ее части (80%), а IgA — в периферической части плаценты (40%).
Среди классов иммуноглобулинов при наличии аКЛ и исходе беременности в срочные роды IgM выявлялся в наименьшем числе наблюдений (14,3%) в периферической части плаценты. Частота обнаружения IgM при преждевременных родах составила 37,5% в обеих частях плаценты. Процент обнаружения IgG
IgG при преждевременных родах обнаруживался в большей половине случаев как в центральной, так и в периферической части плаценты (77,8 и 66,7% соответственно). При исходе беременности в срочные роды процент выявления данного компонента иммунного комплекса в обеих частях плаценты составил 60%.
Таблица 3. Состав ПИК при разных классах антифосфолипидных антител с учетом исхода беременности
Класс аутоантител | Содержание ПИК | |||||
Фибриноген | СЗ-фракция | IgA | IgM | IgG | ||
норма | 6,06±4,15 | 13,04±7,02 | 5,0±4,87 | 15,0±7,98 | 75,0±9,68 | |
Срочные роды | ||||||
АКЛ | Ц | 64,3±12,8 | 57,1±13,2 | 42,9±13,2 | 28,6±12,1 | 35,7±12,8 |
П | 64,3±12,8 | 50,0± 13,4 | 35,7±12,8 | 14,3±9,4 | 42,9±13,2 | |
ВА | Ц | 88,9±10,5 | 77,8±13,9 | 22,2±13,9 | 55,6±16,6 | 60,0±21,9 |
П | 88,9±10,5 | 77,8±13,9 | 22,2±13,9 | 33,3±15,7 | 60,0±21,9 | |
Преждевременные роды | ||||||
АКЛ | Ц | 87,5±11,7 | 100 | 37,5±17,1 | 37,5±17,1 | 50,0±17,7 |
П | 87,5±11,7 | 87,5±11,7 | 37,5±17,1 | 37,5±17,1 | 37,5±17,1 | |
ВА | Ц | 80,0±17,9 | 80,0± 17,9 | 20,0± 17,9 | 80,0±17,9 | 77,8±13,9 |
П | 100 | 80,0±17,9 | 40,0±21,9 | 60,0±21,9 | 66,7±15,7 | |
Самопроизвольный аборт + неразвиваюшаяся беременность | ||||||
АКЛ | Ц | 100 | 100 | 80,0±17,9 | 60,0±21,9 | 100 |
П | 100 | 100 | 60,0±21,9 | 80,0±17,9 | 100 | |
Ц — центральная часть плаценты; П — периферическая часть плаценты. |
При исходе беременности в самопроизвольный аборт и неразвивающуюся беременность процент выявления иммунологических депозитов был максимальным во всех областях плаценты по сравнению со срочными и преждевременными родами.
Процент обнаружения фибриногена в плаценте был наибольшим при самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности и наличии аКЛ (100%), минимальное его количество отмечалось в плацентах женщин с аКЛ и исходом беременности в срочные роды (64,3%).
Кроме того, в последах женщин с АФА при неблагоприятных исходах беременности наблюдалась наибольшая интенсивность специфического свечения в области отложения патогенных ИК, что указывало на большую степень повреждения тканей.
Специальное изучение наличия кофактора β2-ГП-1 в плацентах 72 женщин обнаружило его в составе ИК в 78% случаев. Кроме того, выявлена прямая зависимость между интенсивностью специфического свечения аКЛ в плаценте и титром β2-ГП-1, связанного с аКЛ (β2-ГП-1 с аКЛ) в плазме крови беременных.
Таким образом, проведенное комплексное исследование состояния системы гемостаза у небеременных женщин с наличием АФА позволило установить выраженные изменения в сосудисто-тромбоцитарном звене гемостаза, особенно при ВА, характеризующиеся несвойственной сроку беременности гиперагрегацией кровяных пластинок, ведущей к блокаде микроциркуляторного русла. С наступлением беременности активность тромбоцитарного компонента гемостаза значительно усиливается, достигая максимальных значений при циркуляции ВА и исходе настоящей беременности в неразвивающуюся. Указанные изменения в тромбоцитарном звене при циркуляции АФА были статистически достоверны и объясняются активирующим действием АФА на кровяные пластинки [1—3]. Приведенные результаты подтверждают прямой проагрегантный эффект АФА. Повышение морфофункциональной активности тромбоцитов с ранних сроков беременности можно рассматривать как маркер возможных осложнений беременности и/или неблагоприятного ее исхода и требует их профилактики до беременности.
Анализ коагулометрических показателей у небеременных женщин обнаружил отсутствие влияния аКЛ на плазменно-коагуляционное звено гемостаза, в то время как циркуляция ВА сопровождалась признаками гиперкоагуляции. В результате полученных данных у небеременных женщин изменение показателей общих скрининговых тестов (ПТИ, индекс-АПТВ) у беременных при аКЛ следует рассматривать как следствие повышения гемостатической активности тромбоцитов. Гиперкоагуляция при ВА обусловлена не только прямым проагрегантным эффектом аутоантител, но и функциональным нарушением эндотелия сосудов.
Высокая частота обнаружения β2-ГП-1 с аКЛ на мембранах трофобласта и эндотелия сосудов плаценты у женщин с неблагоприятными исходами беременности в местах локализации иммунных комплексов свидетельствует о роли этого белка в развитии патологических процессов в плацентарной ткани, способствующих развитию плацентарной недостаточности [6—8].
Длительная гиперактивация иммунной системы у женщин с АФА приводит к дисфункции составляющих ее компонентов, образованию ПИК с нарушением их клиренса и активации системы комплемента на ограниченном участке кровяного русла. Кроме того, активные иммунные комплексы способствуют активации тромбоцитарного звена гемостаза и секреции кровяными пластинками мощного вазоконстриктора тромбоксана. Начавшиеся патологические процессы, в свою очередь, потенциируют повреждения сосудистой стенки и снижение ее тромборезистентности.
Об авторах
Н. Г. Кошелева
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Автор, ответственный за переписку.
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
Л. Б. Зубжицкая
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
О. Н. Аржанова
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
О. В. Тышкевич
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
Ю. Л, Громыко
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
Т. Н. Шляхтенко
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
Т. А. Плужникова
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
Е. А. Шаповалова
Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта
Email: info@eco-vector.com
Россия, Санкт-Петербург
Список литературы
- Громыко Г.Л. Роль антифосфолипидного синдрома в развитии акушерских осложнений//Журн. акуш. и женских болезней. — 1997. — № 1.— С. 49-54.
- Макацария А.Д., Бицадзе В.О., Гениевская М.Г., Долгушина Н.В. и др. Антифосфолипидный синдром в акушерской практике.— М., 2000.
- Макацария А.Д., Мищенко А.Л., Бицадзе В.О., Маров С.В. Синдром дисеминированного внутрисосудистого свертывания крови в акушерской практике.— Триада-Х, 2002. - 496 с.
- Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности.— М.: Триада-Х, 2000.— 304 с.
- Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз//СПб., 2000. - 227 с.
- Kaike Т., Mastunta Е. β2-glycoprotein 1 as cofactor and antiphospholipid syndrome//J. Med. Sci. — 1997. — N 33. - P. 225-238.
- Salafia C.M., Parke A.L. Placental pathology in systemic lupus erythematosus and phospholipid antibody syndrome//Rheum. Dis. Clin. North. Am.— 1997, Feb.— N 21 (1).- P. 85-97.
- Salafia C.M., Cowchock F.S. Placental pathology and antiphospholipid antibodies a descriptive study//Am. J. Perinatol. — 1997, Sep. — N 14(8). — P. 435-441.