Разработка и валидация методики количественного определения полисахаридов в цветках липы

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Введение. Цветки липы – фармакопейное лекарственное растительное сырье (ЛРС), содержащее полисахариды. В настоящее время, согласно действующей нормативной документации, оценка содержания биологически активных веществ (БАС) проводится только по флавоноидам. Для совершенствования стандартизации цветков липы, предлагается актуальными разработка и валидация методики спектрофотометрического определения полисахаридов с антроновым реактивом.

Цель работы – разработать и валидировать методику количественного определения полисахаридов в цветках липы.

Материал и методы. При разработке и валидации методики нами использован метод дифференциальной спектрофотомерии, основанный на реакции комплексообразования сахаров гидролизата липы с антроновым реактивом. Полученный в результате реакции комплекс имеет максимум поглощения 625±2 нм, в качестве сравнения использовался раствор стандартного образца (СО) глюкозы. В работе изучали влияние условий экстракции на выход полисахаридов из сырья: размер частиц сырья, соотношение сырья и экстрагента, продолжительность экстракции, а также подбирали оптимальные условия для проведения реакции комплексообразования. Валидацию методики проводили по показателям: специфичность, линейность и репрезентативность, правильность, повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость).

Результаты. Определены оптимальные параметры экстракции полисахаридов из сырья (трехкратная экстракция водой дистиллированной на водяной бане, соотношение «сырье – экстрагент» – 1:30 в течение 30 мин, размер частиц сырья – 2,0 мм). Подобраны условия проведения реакции комплексообразования (соотношение «экстракт-комплексообразователь» – 1:2, комплексообразователь – антроновый реактив, появление устойчивой окраски раствора через 25 мин). При проведении валидации разработанной методики установлено, что валидационные характеристики находятся в пределах критериев приемлемости. При анализе цветков липы установлено, что содержание восстанавливающих сахаров в составе полисахаридов составило 1,9–3,1%.

Заключение. Определены оптимальные параметры экстракции полисахаридов из сырья, подобраны условия проведения реакции комплексообразования, проведена валидация методики. Установлено суммарное содержание восстанавливающих сахаров в составе полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье в цветках липы с использованием дифференциальной спектрофотометрии.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Михаил Николаевич Родин

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет)

Email: rodin_m_n@staff.sechenov.ru
ORCID iD: 0000-0001-9532-6879

аспирант, ассистент Института фармации им. А.П. Нелюбина

Россия, Москва

Дмитрий Олегович Боков

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет); ФИЦ питания и биотехнологии

Email: bokov_d_o@staff.sechenov.ru
ORCID iD: 0000-0003-2968-2466

кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтического естествознания Института фармации им. А.П. Нелюбина; научный сотрудник лаборатории химии пищевых продуктов

Россия, Москва; Москва

Сабина Джейхуновна Кахраманова

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет); Научный центр экспертизы средств медицинского применения

Email: ksd113@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-8160-7829

эксперт 1 категории лаборатории фитопрепаратов и гомеопатических средств Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств

Россия, Москва; Москва

Ирина Александровна Самылина

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский университет)

Автор, ответственный за переписку.
Email: samylina_i_a@staff.sechenov.ru
ORCID iD: 0000-0002-4895-0203

доктор фармацевтических наук, член-корреспондент РАН, профессор кафедры фармацевтического естествознания

Россия, Москва

Список литературы

  1. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том II, ФС.2.5.0024. «Липы цветки». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/2/2-3/lipy-tsvetki/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume II, PM.2.5.0024. «Linden flowers». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/2/2-3/lipy-tsvetki/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  2. Родин М.Н., Боков Д.О., Лазарева Н.Б. Исследование профиля флавоноидов цветков липы. Фармация. 2024; 73 (3): 10–4. doi: 10.29296/25419218-2024-03-02. [Rodin M.N., Bokov D.O., Lazareva N.B. Study of flavonoids profile of linden flowers. Farmatsiya. 2024; 73 (3): 10–4. doi: 10.29296/25419218-2024-03-02 (in Russian)].
  3. State Register of Medicinal Remedies Retrieved from: https://grls.minzdrav.gov.ru/Default.aspx
  4. Дьякова Н.А., Сливкин А.И., Гапонов С.П. и др. Особенности накопления восстанавливающих сахаров цветками липы сердцевидной (Tilia cordata Miller, 1768) в Воронежской области. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021; 10 (4): 147–53. doi: 10.33380/2305-2066-2021-10-4-147-153. [Dyakova N.A., Slivkin A.I., Gaponov S.P., Bobina E.A., Shishorina L.A. Accumulation of Reducing Sugars by Small-leaved Linden Flowers (Tilia cordata Miller, 1768) in the Voronezh Region of Russia. Drug development & registration. 2021; 10 (4): 147–53. doi: 10.33380/2305-2066-2021-10-4-147-153 (in Russian)].
  5. Kosakowska O.K., Baczek K., Przybył J.L. et al. Intraspecific variability in the content of phenolic compounds, essential oil and mucilage of small-leaved lime (Tilia cordata Mill.) from Poland. Industrial Crops and Products. 2015; 78: 58–65. doi: 10.1016/j.indcrop.2015.10.002.
  6. Попов Д.М., Зарубина Н.В. Сравнительное качественное и количественное определение углеводов в цветках и листьях липы сердцевидной. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2013; 2: 50–3. [Popov D.M., Zarubina N.V. Comparative qualitative and quantitative determination of carbohydrates in flowers and leaves of small-leaved lime. Drug development & registration. 2013; 2: 50–3 (in Russian)].
  7. Chinou I. Assessment report on Tilia cordata Miller, Tilia platyphyllos Scop., Tilia x vulgaris Heyne or their mixtures, flos. European Medicines Agency/Science Medicines Health. 2012.
  8. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XIV изд., том IV. [Электронное издание]. Режим доступа: https://femb.ru/record/pharmacopea14 [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XIV ed., volume IV. [Electronic edition]. Access mode: https://femb.ru/record/pharmacopea14 [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)]
  9. Боровикова Н.А., Попов Д.М., Селезенев Н.Г. Исследование водных извлечений из корневищ с корнями девясила, цветков липы и листьев подорожника. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2013; 3: 62–8. [Borovikova N.A., Popov D.M., Selezenev N.G. Study of aqueous extracts of elecampane rhizomes with roots, linden flowers and plantain leaves. Drug development & registration. 2013; 3: 62–8 (in Russian)].
  10. Попов Д.М., Боровикова Н.А., Селезенев Н.Г. Метод ВЭЖХ и определение углеводов в лекарственном растительном сырье. Фармация. 2014; 1: 3–5. [Popov D.M., Borovikova N.A., Selezenev N.G. HPLC method and determination of carbohydrates in medicinal plant raw materials. Farmatsiya. 2014; 1: 3–5 (in Russian)].
  11. Жаркова Т.А., Ляшенко А.О. Фармакогностичское исследование листьев липы сердцевидной, произрастающей в Московской области. Природные соединения и здоровье человека. 2023; 41–6. [Zharkova T.A., Lyashenko A.O. Pharmacognostic study of small-leaved lime leaves growing in the Moscow region. Natural compounds and human health. 2023; 41–6 (in Russian)].
  12. Кахраманова С.Д., Боков Д.О., Самылина И.А. Количественное определение полисахаридов в лекарственном растительном сырье. Фармация. 2020; 69 (8): 5–12. doi: 10.29296/25419218-2020-08-01. [Kakhramanova S.D., Bokov D.O., Samylina I.A. Quantification of polysaccharides in medicinal plant raw materials. Farmatsiya. 2020; 69 (8): 5–12. doi: 10.29296/25419218-2020-08-01 (in Russian)].
  13. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том I, ОФС.1.2.3.0019. «Определение сахаров спектрофотометрическим методом». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-2/1-2-3-metody-kolichestvennogo-opredeleniya/opredelenie-sakharov-spektrofotometricheskim-metodom/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume I, GPM.1.2.3.0019. «Determination of sugars by spectrophotometric method». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-2/1-2-3-metody-kolichestvennogo-opredeleniya/opredelenie-sakharov-spektrofotometricheskim-metodom/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  14. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том I, ОФС.1.1.0013. «Статистическая обработка результатов физических, физико-химических и химических испытаний». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/statisticheskaya-obrabotka-rezultatov-fizicheskikh-fiziko-khimicheskikh-i-khimicheskikh-ispytaniy/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume I, GPM.1.1.0013. «Statistical processing of the results of physical, physicochemical and chemical tests». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/statisticheskaya-obrabotka-rezultatov-fizicheskikh-fiziko-khimicheskikh-i-khimicheskikh-ispytaniy/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  15. Государственная Фармакопея Российской Федерации, XV изд., том I, ОФС.1.1.0012. «Валидация аналитических методик». [Электронное издание]. Режим доступа: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/validatsiya-analiticheskikh-metodik/ [Дата обращения 2 августа, 2024]. [The State Pharmacopoeia of The Russian Federation, XV ed., volume I, GPM.1.1.0012. «Validation of analytical procedures». [Electronic edition]. Access mode: https://pharmacopoeia.regmed.ru/pharmacopoeia/izdanie-15/1/1-1/validatsiya-analiticheskikh-metodik/ [Accessed 2 August, 2024] (in Russian)].
  16. Тринеева О.В., Сливкин А.И., Воропаева С.С. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях крапивы двудомной. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2014; 1: 138–44. [Trineeva O.V., Slivkin A.I., Voropayeva S.S. Development and validation of the method of quantitative determination of flavonoids in stinging nettle leaves. Vestnik Voronezhskogo Gosudarstvennogo Universiteta. Seriya: Khimiya. Biologiya. Farmatsiya. 2014; 1: 138–44 (in Russian)].
  17. Тринеева О.В., Сливкин А.И. Определение суммы полисахаридов и простых сахаров в листьях крапивы двудомной. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2017; 1: 164–9. [Trineeva O.V., Slivkin A.I. Determination of the sum of polysaccharides and simple sugars in the leaves of stinging nettle. Vestnik Voronezhskogo Gosudarstvennogo Universiteta. Seriya: Khimiya. Biologiya. Farmatsiya. 2017; 1: 164–9 (in Russian)].
  18. Барсукова Ю.Н., Мельникова О.А., Мельников М.Ю. Разработка и валидация методики спектрофотометрического определения кислоты аминокапроновой в многокомпонентном гемостатическом средстве. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018; 1: 76–83. [Barsukova Yu.N., Melnikova O.A., Melnikov M.Yu. Development and validation of spectrophotometric techniques of determination of aminocaproic acid in a multi-component hemostatic agent. Drug development & registration. 2018; 1: 76–83 (in Russian)].
  19. Джавахян М.А., Токарева М.Г., Прожогина Ю.Э., Каленикова Е.И. Разработка капсул «Седофлав», стандартизация и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2020; 9 (3): 118–27. doi: 10.33380/2305-2066-2020-9-3-118-127. [Dzhavakhyan M.A., Tokareva M.G., Prozhogina Yu.E., Kalenikova E.I. Pharmaceutical Development of «Sedoflav» Capsules, Standardization and Validation of Flavonoids Assay Methods. Drug development & registration. 2020; 9 (3): 118–27. doi: 10.33380/2305-2066-2020-9-3-118-127 (in Russian)].
  20. Кутателадзе Г.Р., Федосеева Л.М. Исследования по разработке и валидации методики количественного определения флавоноидов в щавеля кислого траве, заготовленной на территории Алтайского края. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019; 8 (2): 80–6. doi: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-80-86. [Kutateladze G.R., Fedoseeva L.M. Research in the Development and Validation of the Method of Quantitative Determination of Flavonoids in the Common Sorrel Herba, Gathered in the Altai Territory. Drug development & registration. 2019; 8 (2): 80–6. doi: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-80-86 (in Russian)].
  21. Тринеева О.В., Казьмина М.А., Сливкин А.И. Разработка и валидация методики определения суммы свободных и связанных простых сахаров в плодах облепихи крушиновидной. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2017; 1: 138–43. [Trineeva O.V., Kazmina M.A., Slivkin A.I. Development and validation of methods for determining the amount of free and related simple sugars in the fruit of sea buckthorn. Drug development & registration. 2017; 1: 138–43 (in Russian)].

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Спектры поглощения (1 – водного извлечения из цветков липы; 2 – СО глюкозы)

Скачать (198KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Влияние концентрации комплексообразователя на результаты определения восстанавливающих сахаров в извлечении

Скачать (171KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Влияние степени измельченности ЛРС на выход полисахаридов в извлечении

Скачать (137KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Влияние времени экстракции на содержание восстанавливающих сахаров в извлечении

Скачать (158KB)
Метаданные
6. Рис. 5. График зависимости оптической плотности от концентрации глюкозы

Скачать (219KB)
Метаданные

© ИД "Русский врач", 2024