Том 23, № 12 (2020)

Актуальность. В связи с продолжающейся пандемией COVID-19, вызванной коронавирусом SARS-CoV2, существует острая потребность в диагностических тестах для выявления РНК вируса SARS-CoV2. Наиболее широко используемый метод ОТ-ПЦР позволяет получить результаты тестирования в течение 1,5-2 часов. Вместе с тем в связи с нехваткой пропускной способности диагностических лабораторий представляется необходимой разработка более быстрых методов тестирования. Цель исследования. Создание метода выявления РНК коронавируса SARS-CoV2 с помощью мультиплексной изотермической петлевой амплификации (LAMP) с обратной транскрипцией посредством анализа кривых плавления. Материал и методы. В качестве стандартных образцов использовали сконструированную плазмиду с фрагментом генома SARS-CoV2 и фага MS2, фрагменты геномной РНК SARS-CoV2 и фага MS2. Клинические образцы (назофарингеальные мазки), получали от пациентов ЦНМТ ИХБФМ СО РАН; РНК выделяли с помощью набора «РИБО-преп» ЦНИИ Эпидемиологии (Москва, Россия). LAMP проводили в амплификаторе CFX96 (Bio-Rad; США). Аналитические характеристики LAMP определяли с помощью разведений стандартных образцов. Клиническую чувствительность и специфичность мультиплексной LAMP оценивали, проводя тестирование клинических образцов одновременно LAMP и ОТ-ПЦР. Результаты. Подобраны праймеры и оптимизированы условия для проводения детекции с помощью LAMP участков РНК SARS-CoV2 и фага MS2, который служил внутренним контролем выделения РНК и амплификации. Мультиплексирование было основано на анализе кривых плавления продуктов амплификации. Предел чувствительности мультиплескной LAMP составил 20 молекул РНК SARS-CoV2 на реакцию. Конкордантность результатов тестирования 40 клинических образцов сравнительно с ОТ-ПЦР в реальном времени составила 92%. Выводы. Разработан метод для выявления РНК коронавируса SARS-CoV2 на основе мультиплексной изотермической петлевой амплификации. Метод, основанный на мультиплексной LAMP, может быть использован как альтернатива ПЦР в диагностической практике для экономии машинного времени и времени персонала.

Цель работы. Получение сорбента, представляющего собой молекулярно импринтированный полимер на основе производных акриловой кислоты, селективного к соединениям класса пирролидинофенонов. Материал и методы. Сорбенты получали методом радикальной полимеризации метакриловой кислоты, акриламида, N,N'-метилен-бис-акриламида, диаллиламина в присутствии темплата (молекулы-шаблона) - фенилпирацетама. При получении варьировали количеством используемого акриламида и N,N'-метилен-бис-акриламида. Для полученных сорбентов определяли степень набухания в воде и изопропиловом спирте, импринтинг-фактор, коэффициент перекрестного реагирования и степень извлечения фенилпирацетама из водных растворов. Результаты. Исследование степени набухания полученных сорбентов показало, что объемное набухание в воде и органических растворителях повышается при увеличении содержания акриламида и уменьшении N,N'-метилен-бис-акриламида. Объемное набухание в воде всех полученных сорбентов ниже, чем в изопропиловом спирте, что позволяет использовать их для сорбции анализируемых веществ из водной среды и последующей десорбции. Величина импринтинг-фактора пофенилпирацетаму для образца сорбента, содержащего 56% акриламида, была на 47% выше, чем для образца, содержащего 44% акриламида. Низкая величина импринтинг-факгора всех образцов сорбентов при исследовании циннаризина и амитриптилина свидетельствует о том, что полученные сорбенты содержат «молекулярные отпечатки» темплата - фенилпирацетама. Вышеуказанные образцы сорбента способны распознавать фенилпирацетам в бинарных смесях, что подтверждает наличие центров селективного связывания. Степень извлечения фенилпирацетама из водных растворов с использованием образца сорбента, содержащего 56% акриламида, составила 89± 17%. Исследование структуры вышеуказанного образца сорбента методом ИК-спектрометрии с Фурье-преобразованием выявило наличие выраженных пиков при 1451, 1660, 2934, 3198, 3343 см1, что свидетельствует о наличии карбоксимодифицированной полиакриламидной матрицы сорбента. Выводы. Получен молекулярно импринтированный полимер на основе производных акриловой кислоты, который является стабильным в водной среде и изопропиловом спирте. Данный полимерный сорбент проявляет высокий уровень селективности к производным пирролидинофенона, что доказано в эксперименте с модельным соединением фенилпирацетамом. Данный полимерный сорбент может быть использован для пробоподготовки биологических жидкостей при исследовании на производные пирролидинофенона.

Актуальность. Одной из наиболее распространенных форм сахарного диабета (СД) является СД 2-го типа. Персонифицированный подход к терапии СД предполагает адекватный гликемический контроль и также наличие оригинальных лекарственных препаратов с различными фармакокинетическими показателями, в том числе биодоступностью. Одной из таких лекарственных форм является суспензия, отвечающая ряду требований надлежащей производственной практики (GMP) и имеющая ряд преимуществ перед другими лекарственными формами. Цель работы. Изучение биодоступности гликлазида из суспензии в сравнении с таблетированной лекарственной формой. Материал и методы. Изучение биологической доступности гликлазида из суспензии и таблеток проводили на крысах самцах Wistar, массой 190-200 г. Животным вводили разработанную суспензию гликлазида и препарат сравнения - таблетки «Диабетон МВ» («Сервье Рус», Россия, действующее вещество - гликлазид). Форма введения препаратов - внутрижелудочно из расчета 60 мг/кг массы тела животных. Отбор крови проводили с интервалом от 2 до 24 ч после введения препаратов. Экстракцию гликлазида из плазмы крови проводили дихлорметаном при pH среды 9,5, экстракт высушивали, растворяли в 100 мкл метанола, раствор подвергали исследованию методом жидкостной хроматографии. Содержание гликлазида рассчитывали методом внутреннего стандарта. Предварительно строили калибровочный график, где применялась «холостая» (не содержащая гликлазид и анекаин - внутренний стандарт) плазма крови. Исследование проводили на жидкостном микроколоночном хроматографе «Милихром - А02» со спектрофотометрическим детектором УФ-диапазона. Результаты. Установлено, что концентрация гликлазида через 2 и 4 ч, а также его остаточная концентрация в плазме крови крыс через 12 и 24 ч после введения суспензии выше, чем после введения таблеток. Полученные данные свидетельствуют о более высокой биодоступности препарата из суспензии по сравнению с таблетированной лекарственной формой. Выводы. Экспериментально установлена более высокая биологическая доступность гликлазида из суспензии, чем из таблеток, что подтверждает целесообразность медицинского применения суспензии.

Актуальность создания гепатопротективных средств обусловлена широким распространением повреждений печени вирусной этиологии, увеличением частоты токсических медикаментозных и алкогольных повреждений печени, отсутствием достаточно эффективных средств лечения. Цель работы. Определение иммуномодулирующих свойств комплексного растительного средства с условным названием «Гипелив», состоящего из Hypecoum erectum L; Hedysarum alpinum L; Glycyrrhiza uralensis Fisch.; Calendula officinalis L; Scutellaria baicalensis Georgi. при экспериментальном иммунодефиците, вызванном цитостатиком азатиоприном, на основе оценки показателей клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа. Материал и методы. Эксперименты проведены на мышах-самцах Fi (СВАхС57В1/6). Иммунодепрессия вызывалась цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней. Комплексное средство «Гипелив» вводили опытной группе мышей на фоне азатиоприна в дозе 100 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа согласно стандартной методике, макрофагальное звено иммунного ответа определяли в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов, оценку гуморального иммунитета осуществляли по количеству антителообразующих клеток. Результаты. Установлено, что комплексное растительное средство «Гипелив» в дозе 100 мг/кг способно ослаблять супрессивное действие азатиоприна на клеточно-опосредованную иммунную реакцию, антителогенез и фагоцитоз макрофагов.

Актуальность. Salvia viridis L. широко культивируется как декоративное растение, но имеет и лекарственное значение: обладает антиоксидантными, антибактериальными, противогрибковыми свойствами. Наличие флавоноидов, производных кофейной кислоты и фенилэтаноидов может усиливать их потенциальные антиоксидантные свойства. Цель работы. Получение асептических растений Salvia viridis L. и изучение их морфогенного потенциала. Материал и методы. В работе использовали плазменные семена шалфея зеленого S. viridis (ООО «ПЛАЗМАС»), Для получения асептического растительного материала проводили стерилизацию семян 5 %-ным раствором гипохлорита натрия (экспозиция 5, 10 и 15 мин), затем дважды промывали дистиллированной водой. Семена помещали на безгормональную питательную среду Мурасиге и Скуга (MC). Для изучения морфогенного потенциала S. viridis использовали черешковые, листовые и стеблевые экспланты, которые культивировали на питательной среде MC без NH4NO3 с добавлением различных фитогормонов и регуляторов роста: 0,5 мг/л индолил-3-уксусной кислоты (ИУК), 0,5 мг/л а-нафтилуксусной кислоты (НУК), 1 мг/л индолил-3-масляной кислоты (ИМК), 1 мг/л 6-бензиламинопурина (БАП); контроль - безгормональная питательная среда. Результаты. По результатам экспериментов, для поверхностной стерилизации семян S. viridis можно рекомендовать стерилизацию 5 %-ным раствором гипохлорита натрия в течение 5 мин. Данный режим обеспечивает высокий выход асептических растений. Изучение морфогенного потенциала асептических растений S. viridis позволяет увеличить коэффициент размножения данной ценной культуры. Выводы. Показано, что для индукции каллусогенеза S. viridis целесообразно использовать стеблевые или черешковые экспланты, культивируя их на питательной среде MC с добавлением или без добавления фитогормонов и регуляторов роста. Высокую частоту ризогенеза S. viridis можно получить на черешковых и стеблевых эксплантах на питательной среде MC с добавлением 1 мг/л ИУК или НУК.