Features of the hormone-receptor interaction in the endometrium during ovulatory menstrual cycle in women with reproductive failure

Abstract


A comparative analysis of the levels of estradiol and progesterone in the blood, immunohistochemical parameters of estrogen receptors and progesterone in endometrium in women with a history of reproductive disorders is presented. It was found that all women had an ovulatory ovarian cycle, levels of estradiol and progesterone in the blood were within the reference values. In women with reproductive failures in the history (n=107), four types of hormone-receptor response in the endometrium were identified. In 46 (43%) women, the first (normoreceptor) type of endometrial response was detected, without significant differences from the control group (n=15) corresponding to the middle stage of the secretion phase. Hyperreceptor (hyper-estrogen-progesterone-receptor, hyper-estrogen-receptor, hyper-progesterone-receptor) types have been identified in 61 patients (57%) with reproductive dysfunctions. The endometrium corresponded to the mid secretory phase was detected in 47 (44%), inadequate secretory phase of the endometrium - in 60 (56%) women with reproductive failures in the anamnesis. All women in the control group had a full secretory change in the endometrium. In general, more than half (61 (57%)) of women with reproductive failures in the history with the ovulatory menstrual cycle with normal values of the level of progesterone in the blood showed signs of a decreased endometrial receptivity status. This indicates that the ovulatory level of progesterone in the blood is not an unconditional predictor of full secretory transformations of the endometrium.

Full Text

Введение. Значительное число репродуктивных неудач в настоящее время не имеет тенденции к снижению. Существенное внимание уделяется ис- следованию эндометрия в середину периода суще- ствования желтого тела в яичнике в предполагаемый отрезок времени, называемый «окном имплантации» [9]. В лютеиновой фазе овариального цикла под воз- действием половых стероидных гормонов, в первую очередь прогестерона, на фоне достаточного эстро- генного влияния в эндометрии происходят секре- торные преобразования [3]. Физиологическая роль и молекулярно-клеточные механизмы гормон-эстро- ген-прогестерон-рецепторного ответа в эндометрии при овуляторном и ановуляторном менструальных циклах изучены недостаточно. Нарушение функциональной полноценности эстрогеновых и прогестероновых рецепторов как по- казателя рецептивности эндометрия является одним из значимых факторов в патогенезе бесплодия и не- вынашивания беременности. Цель исследования. Провести сравнительный анализ сывороточных уровней эстрадиола (E2) и про- гестерона (P) в крови и иммуногистохимических (ИГХ) показателей рецепторов эстрогенов (ER) и рецепто- ров прогестерона (PR) в эндометрии на 6-8-й день после овуляции у женщин с нарушениями репродук- тивной функции в анамнезе. Материалы и методы. В основную группу были включены 107 женщин от 23 до 40 лет (средний воз- раст - 32,53±0,04 г.) с бесплодием, невынашиванием беременности раннего срока и неудачными попыт- ками экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) (нарушения имплантации морулы/бластоцисты после переноса эмбриона) в анамнезе. Критериями исклю- чения из исследования были тяжелые соматические заболевания, любые онкологические процессы, тром- бофилии, аномалии развития матки, клинически зна- чимая миома матки (субмукозный миоматозный узел, субсерозно-интрамуральный миоматозный узел 3 см в диаметре и более), инфекционно-воспалительный процесс урогенитального тракта в период предпо- лагаемого инвазивного внутриматочного вмеша- тельства, использование гормональных препаратов (женских половых стероидных гормонов) в течение трех месяцев до включения в исследование. Контрольную группу (КГ) составили 15 соматиче- ски здоровых женщин от 20 до 40 лет (средний воз- раст - 27,6±0,4 лет) без нарушений репродуктивной и менструальной функций в анамнезе, проходивших обследование в связи с наличием диагноза «бесплод- ный брак» по причине мужского фактора бесплодия, женщины-добровольцы, а также пациентки из архив- ной базы данных патолого-анатомического отделения Всероссийского центра экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова Министерства по ВЕСТНИК РОССИЙСКОЙ ВОЕННО-МЕДИЦИНСКОЙ АКАДЕМИИ 2 (62) - 2018 63 Клинические исследования чрезвычайным ситуациям России (ВЦЭРМ). Все под- писывали добровольное информированное согласие. Всем женщинам была произведена аспирационная пайпель-биопсия эндометрия на 6-8-й день после овуляции (в среднем - на 20-22-й день менструаль- ного цикла) в гинекологическом отделении Центра планирования семьи и репродукции (Санкт-Петербург) с одномоментным забором венозной крови для опре- деления сывороточных уровней эстрадиола и проге- стерона. Гистологическое и иммуногистохимическое (ИГХ) исследования образцов эндометрия выполняли в патолого-анатомическом отделении ВЦЭРМ. Гистоло- гическую проводку тканевых фрагментов эндометрия осуществляли по стандартному протоколу в автомате «Leica ASP200» (Германия), далее заливали в парафин и приготовленные срезы толщиной 5 мкм окраши- вали гематоксилином и эозином. ИГХ исследование выполняли полимерным методом с применением на- бора системы визуализации «En-Vision» фирмы «Dako Cytomation» (Дания), моноклональных антител к рецеп- торам эстрогенов альфа (ER) (clone 1D5, RTU) фирмы «Dako Cytomation» (Дания), моноклональных антител к рецепторам прогестерона (PR) (clone PgR 636, RTU) фирмы «Dako Cytomation» (Дания). Результаты иммуно- гистохимической реакции проявляли диаминобензиди- ном (DAB-kit, RTU) фирмы «Dako Cytomation» (Дания). Оценку экспрессии ER и PR в железах и строме эндоме- трия проводили путем подсчета методом Histochemical Score, где учитывали процент окрашенных клеток (до 100%) и балл интенсивности (0 - нет окрашивания, 1 - слабое, 2 - умеренное, 3 - сильное окрашивание) (в модификации McCartey, 1986) [5]. Определение значений E2 и P в периферической крови выполняли в день пайпель-биопсии эндометрия (6-8 день после овуляции) в эндокринной лаборатории Научно-исследовательского института акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта. Применяли иммунофер- ментные методы исследования крови для определения уровней E2 с использованием тест-системы фирмы «DRG Diagnostics» (Германия) и P с использованием тестсистемы фирмы «Beckman Coulter» (Соединенные Штаты Америки) в крови. Референтные значения в лютеиновую фазу менструального цикла составили для E2 в крови от 180 до 1070 пмоль/л, P - от 16,1 до 59,1 нмоль/л. Полученные данные были проверены на нормаль- ность распределения с использованием критерия Шапиро - Уилка. Анализ различий значений прово- дили с использованием U-критерия Манна - Уитни непараметрической статистики. Различия считали статистически достоверными при р<0,01. Результаты показаны в виде процентных соотношений среднего и 95% доверительного интервала. Результаты и их обсуждение. Индекс массы тела (ИМТ) у женщин основной группы был 22,54±0,04 кг/ м2, контрольной группы - 22,0 ±0,8 кг/м2. Все женщины указали, что менструальный цикл (м.ц.) регулярный. Характеристики менструальной функции в основной и контрольной группах: возраст менархе (соответственно, 13,04±0,01 и 13±0,01 лет), длительность менструаций (4,7±0,1 и 5,7±0,2 дней) и менструального цикла (29,9±0,4 и 31±0,5 дней) - между группами не раз- личались и соответствовали популяционным значениям. Альгоменорея была отмечена у 22 (21%) и 3 (20%) жен- щин основной и контрольной групп соответственно. В течение последнего года до включения в исследование у 27 (25%) женщин основной группы были единичные эпизоды нарушений менструальной функции по типу опсоменореи, у 14 (13%) - по типу пройоменореи. Воз- раст начала половой жизни в обеих группах в среднем составил 18,14±0,02 и 18,1±0,1 лет. По данным гинекологического анамнеза, в основной группе бесплодие отмечали 84 (78,5%) женщины (у по- ловины из них в анамнезе были неудачные попытки ЭКО), у 23 (21,5%) - невынашивание беременности ранних сро- ков. В анамнезе у 76 (71%) пациенток основной группы были внутриматочные вмешательства (выскабливания полости матки с диагностической/лечебной целью, искусственные аборты, аспирационные биопсии эндо- метрия). Среди этих пациенток (n=76) у 46 (60,5%) было два и более выскабливаний полости матки в прошлом. На основании данных ультразвукового монитори- рования фолликулогенеза, визуализации желтого тела в яичнике и показателей уровня P в периферической крови на 6-8-й день после овуляции (у большинства - 20-22-й день м.ц.) была проведена оценка 279 менструальных циклов (минимум 2 м.ц. у каждой па- циентки): в изучаемую когорту включены все женщины с овуляторным менструальным циклом основной и контрольной групп. При гистологическом исследовании у 47 (44%) жен- щин основной группы эндометрий был с полноценной секреторной трансформацией желез и стромы и со- ответствовал средней стадии фазы секреции, как и у 100% женщин контрольной группы: с хорошо извитыми железами с широким просветом, округлыми светлыми, везикулярными ядрами, расположенными базально, и признаками апокринной секреции в просвете отдельных желез, с фокальным отеком стромы. Неполноценная секреторная трансформация эндометрия в виде слабо извитых желез различной формы, без признаков функ- циональной секреторной активности и отсутствием синхронного преобразования развития эпителиального и стромального компонента и отеком в строме была обнаружена у 60 (56%) женщин основной группы. При ИГХ исследовании эндометрия у женщин кон- трольной группы наблюдалось синхронное снижение ER как в железах, так и в строме в виде слабого фокаль- ного окрашивания менее 50% ядер эпителиоцитов и стромы, что соответствовало их низким количествен- ным показателям (H-score ER в железах - 72,2±13,6 у. е. и ER в строме - 88,9±12,9 у. е.). В то же время экс- прессия рецепторов прогестерона характеризовалась дисинхронным ответом: слабой экспрессией в железах при наличии постоянства высокой их экспрессии в строме (H-score PR в железах - 34,4±11,2 у. е. и PR в строме - 210±17 у. е.). Такая динамика изменений гормон-рецепторов в эндометрии наблюдалась при 64 2 (62) - 2018 ВЕСТНИК РОССИЙСКОЙ ВОЕННО-МЕДИЦИНСКОЙ АКАДЕМИИ Клинические исследования нормальных референтных значениях половых гормо- нов в периферической крови: Е2 - 762,2±148,3 пмоль/л, P - 39,0±5,2 нмоль/л (соотношение E2/P - 18,3±1,7 у.е.). При таком гормон-рецепторном взаимодействии у всех женщин контрольной группы в эндометрии определя- лась полноценная секреторная трансформация желез и стромы, соответствующая средней стадии фазы секреции овуляторного менструального цикла, что позволило нам обозначить его как норморецепторный тип гормонального ответа (1-й тип) (табл. 1, 2). При анализе значений экспресии рецепторов эстрогенов и прогестерона в эндометрии у женщин основной группы было выделено 4 типа гормон-ре- цепторного ответа: норморецепторный (1-й тип), гипер-эстроген-прогестерон-рецепторный (2-й тип), гипер-эстроген-рецепторный (3-й тип) и гипер-про- гестерон-рецепторный (4-й тип). Гормон-рецепторный ответ 1-го типа, без достовер- ных отличий от контрольной группы, был обнаружен у 38 (81%) женщин с полноценной секреторной трансфор- мацией эндометрия и у 8 (13%) женщин с неполноцен- ной секреторной трансформацией слизистой матки. У 8 женщин с неполноценной секреторной транс- формацией эндометрия норморецепторный ответ сочетался с нормальными показателями уровней эстрадиола и прогестерона в крови (E2 -782,6±149 пмоль/л, и P - 55,8±6,4 нмоль/л) при достоверно более низком соотношении E2/P - 13,6±1,7 у. е. (p<0,05) в сравнении с контрольной группой и группой женщин с полноценной секреторной трансформацией. Воз- можно, достоверно более низкое соотношение Е2/Р объясняет несоответствие морфологической картины неполноценной секреторной трансформации желез и стромы и нормального гормон-рецепторного ответа, что позволяет исключить истинную недостаточность лютеиновой фазы менструального цикла. Гормон-рецепторный ответ 2-го типа наблюдался у 36 (60%) женщин с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия и в 10 раз реже (у 3 (6%) женщин) с полноценной его секреторной транс- формацией. Уровни половых гормонов (эстрадиола и прогестерона) в крови не имели достоверных отличий в сравнении с контрольной группой. Гормон-рецепторный ответ 3-го типа встречался с одинаковой частотой как у женщин с полноценной се- креторной трансформацией эндометрия, так и у женщин с неполноценной стадией секреции (у 2 (4,2%) и 3 (5%) женщин соответственно). В сравнении с контрольной группой этот тип гормон-рецепторного ответа характе- ризовался достоверно высокими показателями рецеп- торов эстрогенов в железах (H-score 235±35 и 220±11,5 у.е. соответственно) при нормальных показателях ре- цепторов прогестерона в эндометрии и референтных значениях уровней гормонов (E2 и P) в крови. Уровень P в крови у 2 женщин с полноценной стадией фазы секреции при референтных его значениях был достоверно выше в сравнении с этим показателем у женщин контрольной группой (52,3±4,5 и 39,0±5,2 нмоль/л соответственно). Гормон-рецепторный ответ 4-го типа в 2,5 раза чаще был обнаружен у женщин с неполноценной ста- дией фазы секреции, чем у пациенток с полноценными секреторными изменениями эндометрия (13 (21,7%) и 4 (8,5%) соответственно). В сравнении с контрольной группой при данном гормон-рецепторном типе были обнаружены достоверно высокие показатели рецеп- торов прогестерона в железах (H-score 227,5±21,4 и 231,5±12 у.е.) при нормальных показателях рецеп- торов эстрогенов и достоверно высоких значениях прогестерона в крови (51,4±10,1 и 60,8±6,6 нмоль/л), а также относительно низком соотношении Е2/Р (8,7±1,6 и 11,7±1,5 у.е.). Заметим, что выявленные три варианта гиперре- цепторного ответа в эндометрии у 9 женщин с полно- ценной секреторной трансформацией наблюдались на фоне выраженного фиброза стромы как проявления хронического эндометрита. Уровни E2 и P в крови, рецепторы эстрогенов и прогестерона (H-score) в эндометрии при овуляторном цикле женщин с нарушением репродуктивной функции c полноценной секреторной трансформацией эндометрия, M±m Таблица 1 Показатель Контрольная группа Основная группа Тип гормон-рецепторного ответа р 1-й, n=38 2-й, n=3 3-й, n=2 4-й, n=4 Е2, пмоль/л 762,2±148,3 622,7±50,7 471±64 764±84 520,7±176,3 >0,05 Р, нмоль/л 39,0±5,2 39,6±3.9 30,0±8,6 52,3±4,5 51,4±10,1 КГ-3=0,04* КГ-4=0,03* E2/P, у. е. 18,3±1,7 17,6±1,4 17,0±2,3 14,5±0,3 8,7±1,6 ER в железах, у. е. 72,2±13,6 104,2±7,5 240±17,3 235±35 92,5±17 1-4=0,03* КГ-2=0,014* КГ-3=0,04* 1-2=0,005** ER в строме, у. е. 88,9±12,9 107,9±11,1 190±58,6 220±10 115±37,1 >0,05 КГ-2=0,014* 226,7±21,9 30±3 227,5±21,4 КГ-5=0,006** 1-2=0,004** 1-4=0,001** Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01. 276,7±6,7 285±5 240,0±20,4 КГ-1=0,004** ВЕСТНИК РОССИЙСКОЙ ВОЕННО-МЕДИЦИНСКОЙ АКАДЕМИИ 2 (62) - 2018 65 Клинические исследования Уровни E2 и P в крови, рецепторы эстрогенов и прогестерона в эндометрии (H-score) Таблица 2 при овуляторном цикле у пациенток с нарушением репродуктивной функции c неполноценной секреторной трансформацией эндометрия, M±m Показатель Контрольная группа Основная группа р Показатель Контрольная группа Тип гормон-рецепторного ответа р Показатель Контрольная группа 1-й, n=8 2-й, n=36 3-й, n=3 4-й, n=13 р Е2, пмоль/л 762,2±148,3 782,6±149,1 697,3±51,5 637,5±51,3 727,2±127,5 >0,05 Р, нмоль/л 39±5,2 55,8±6,4 40,5±2,7 48,7±13,4 60,8±6,6 КГ-4=0,02* 1-2=0,03* 2-4=0,01** E2/P, у. е. 18,3±1,7 13,6±1,7 19±1,9 15,7±5,3 11,7±1,5 КГ-1=0,02* КГ-4=0,02* 2-4=0,02* ER в железах, у. е. 72,2±13,6 91,2±15,2 256,1±7,4 220±11,5 108,5±5,9 КГ-2=0,000002** КГ-3=0,014* КГ-4=0,01** 1-2=0,00001** 1-3=0,02* 2-4=0,000000001** 3-4=0,01** ER в строме, у. е. 88,9±12,9 140±21.4 196,7±13,4 213,3±8,8 84,6±14,5 КГ-2=0,003** 2-4=0,0001** 3-4=0,02* PR в железах, у. е. 34,4±11,2 98,7±22,3 276,9±4,8 56,7±17,6 231,5±12 КГ-1=0,02* КГ-2=0,000001** КГ-4=0,0001** 1-2=0,00002** 1-4=0,0003** 2-3=0,005** 2-4=0,001* 3-4=0,01** PR в строме, у. е. 210±17 236,2±22,7 276,1±3,7 276,7±6,7 256,1±10,3 КГ-2=0,001** 1-2=0,03* 2-4=0,04* Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,01. Установлено, что более чем у половины женщин (60 (56%)) с репродуктивными неудачами в анам- незе, с овуляторным менструальным циклом при референтных уровнях эстрадиола и прогестерона в крови определяется неполноценная секреторная трансформация эндометрия, т. е. вариант недоста- точности лютеиновой фазы (НЛФ) менструального цикла. Полученные данные согласуются с результа- тами исследований В.М. Сидельниковой и др. [3], А.Г. Давудовой [1] о частоте НЛФ у женщин с репро- дуктивными дисфункциями, хотя указанные авторы применяли только гистологическое, но не проводили иммуногистохимическое исследование эндометрия. Комплексный клинико-лабораторно-морфоло- гический подход при оценке горомон-рецепторного взаимодействия в эндометрии позволил выделить у 46 (43%) женщин основной группы нормальный (норморецепторный) гормон-рецепторный ответ эндометрия и у 61 (57%) пациентки нарушенный гормон-рецепторный ответ эндометрия трех типов. Гипер-эстроген-прогестерон-рецепторный ответ с синхронно высокими рецепторами обоих гормонов в эндометрии был обнаружен у 39 (36%) женщин, гипер-прогестерон-рецепторный с высокими только PR - у 17 (16%) и гипер-эстроген-рецепторный ответ с высокими рецепторами только эстрогенов был обнаружен у 5 (5%) женщин. У пациенток с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия (n=60) все три типа нарушений гормон-рецепторного ответа (52 (87%)) наблюдались достоверно чаще (р<0,01). Выявлено, что у 9 (19%) пациенток с овуляторным менструальным циклом при полноценной секреторной трансформации эндометрия и референтных уровнях P в крови были определены гипер-гормон-рецепторные типы ответов слизистой матки на фоне перенесенного хронического эндометрита, что, вероятно, явилось причиной изменения гормон-рецепторного ответа на ранней клеточно-молекулярной стадии [6]. Выявленные нарушения рецептивности эндоме- трия независимо от морфологических изменений (фи- броз стромы, неполноценная стадия фазы секреции при НЛФ) характеризуются сходством и проявляются в виде гиперэкспрессии ER и PR как в железах, так и в строме. При этом наиболее значимым показателем гормон-рецепторного ответа являются PR в железах эндометрия, достоверное снижение которых на 6-8-й день после овуляции отражает полноценный гормон- прогестерон-рецепторный ответ. Нами выделены иммуногистохимические критерии нормальной ре- цепторности эндометрия в лютеиновую фазу овари- ального цикла: 1) синхронное достоверное снижение экспрессии PR в железах эндометрия при постоянстве 66 2 (62) - 2018 ВЕСТНИК РОССИЙСКОЙ ВОЕННО-МЕДИЦИНСКОЙ АКАДЕМИИ Клинические исследования их гиперэкспрессии в строме; 2) тенденция к сниже- нию экспрессии эстрогеновых рецепторов как в же- лезах, так и в строме эндометрия. Полученные нами данные соотносятся с физиологическими эффектами P в среднюю секреторную фазу менструального цикла на эндометрий, которые заключаются в торможении экспрессии ER и PR в железах [2, 7, 8]. В целом, по данным гормонального, ультразву- кового исследований, морфологической оценки образцов эндометрия, полученных на 6-8-й день по- сле овуляции, выявлено, что у более чем у половины женщин с репродуктивными неудачами в анамнезе при овуляторном овариальном цикле имели место неполноценные секреторные изменения эндометрия и снижение его рецепторности. При этом у 76 (71%) пациенток основной группы в анамнезе были внутри- маточные вмешательства, из них у 46 (60,5%) было два и более выскабливаний полости матки. В группе из 61 женщины с выявленными патологическими ги- перрецепторными вариантами гормон-рецепторного ответа эндометрия два и более выскабливаний поло- сти матки в анамнезе были у 36 (59%) пациенток. Ве- роятно, травматическое воздействие на эндометрий в анамнезе является одним из факторов снижения рецептивности эндометрия. Следовательно, каждой второй женщине с отя- гощенным репродуктивным анамнезом при наличии овуляторного менструального цикла необходимо проведение терапии гестагенами на предгравидар- ном этапе. Выводы 1. Овуляторный уровень P в периферической крови не является однозначным фактором, обеспечиваю- щим полноценные фазовые секреторные преобра- зования эндометрия. 2. Сочетанный анализ соотношений значений уровня P в крови и показателей морфологического (гистологического и иммуногистохимического) ис- следования эндометрия у женщин с нарушениями репродуктивной функции в анамнезе позволяет более точно определить полноценность секреторных преоб- разований эндометриальной ткани, выявить признаки снижения рецепторности эндометрия, определить контингент пациенток, которым требуется дополни- тельная терапия гестагенами на предгравидарном этапе.

About the authors

S S Aganezov

V N Ellinidi

K Yu Ponomarenko

Email: dr.k.ponomarenko@gmail.com

A V Morotskaya

N V Aganezova

References

  1. Давудова, А.Г. Значение оценки критериев недостаточности лютеиновой фазы у пациенток с эндокринными формами бесплодия / А.Г. Давудова // Акушерство, гинекология и репродукция. - 2015. - № 2. - С. 24-30.
  2. Крылова, Ю.С. Рецептивность эндометрия: Молекулярные механизмы регуляции имплантации / Ю.С. Крылова, И.М. Кветной, Э.К. Айламазян // Журнал акушерства и женских болезней. - 2013. - № 2. - С. 63-74.
  3. Сидельникова, В.М. Неполноценная лютеиновая фаза в кли- нике невынашивания беременности / В.М. Сидельникова // Эффективная фармакотерапия. Акушерство и гинекология. - 2008. - № 14. - C. 16-21.
  4. Сидельникова, В.М. Невынашивание беременности. Руко- водство для практикующих врачей / В.М. Сидельникова, Г.Т. Сухих. - М.: МИА; 2010. - 536 с.
  5. Эллиниди, В.Н. Практическая иммуногистоцитохимия (Ме- тодические рекомендации) / В.Н. Эллиниди, Н.В. Аникеева, Н.А. Максимова. - СПб: ВЦЭРМ МЧС России; 2002. - 36 с.
  6. Mesen, T.B. Progesterone and the Luteal Phase / T.B. Mesen, S.L. Young // Obstet Gynecol Clin North Am. 2015. - Vol. 42 (1). - Р. 135-151.
  7. Patel, B. Role of nuclear progesterone receptor isoforms in uterine pathophysiology / B. Patel [et al.] // Human Reproduction Update. - 2015. - Vol. 21 (2). - P. 155-173.
  8. Sch-ring, A.N. mRNA-Expression of ER-, ER-, and PR in clonal stem cell cultures obtained from human endometrial biopsies / A.N. Sch-ring, J. Braun, S. W-llner // Scientific World J. - 2011. - Vol. 11. - P. 1762-1769.
  9. Whitby, S. The Endometrial Polarity Paradox: Differential Regulation of Polarity Within Secretory-Phase Human Endometrium / S. Whitby, L.A. Salamonsen, J. Evans // Endocrinology. - 2018. - Vol. 159 (1). - P. 506-518.

Statistics

Views

Abstract - 38

PDF (Russian) - 99

Cited-By


PlumX


Copyright (c) 2018 Aganezov S.S., Ellinidi V.N., Ponomarenko K.Y., Morotskaya A.V., Aganezova N.V.

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.

This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies