Сравнение методов выявления повреждений митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и микроядерного теста буккального эпителия для оценки генетического гомеостаза организма человека

Обоснование. В настоящее время активно изучают факторы окружающей среды, способные оказать влияние на стабильность генетического материала человека, с использованием различных цитологических и молекулярно-генетических методов.

Цель — выявить и проанализировать связи между результатами микроядерного теста в буккальном эпителии человека и встречаемостью повреждений митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты, обнаруженных с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Методы. В качестве испытуемых были выбраны 25 юношей и 10 девушек в возрасте от 20 до 24 лет. Исследования проводили в г. Воронеж. В качестве методик исследования использовали микроядерный тест в буккальном эпителии и оценку повреждений митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. На каждом препарате просматривали не менее 2000 клеток, среди которых определяли количество клеток с микроядрами, перинуклеарными вакуолями, насечками, протрузиями, вычисляли индекс репарации и индекс накопления цитогенетических повреждений. Выделение дезоксирибонуклеиновой кислоты для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени осуществляли с использованием CTAB-буфера. Полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени проводили с использованием Encyclo-полимеразы, а также с применением подобранных праймеров амплифицровали два фрагмента (короткий и длинный) в районе D-петли митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты. На основании значений C_t вычисляли по специальной формуле количество повреждений дезоксирибонуклеиновой кислоты.

Результаты. Определена частота повреждений митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты и встречаемость клеток с аномалиями ядра в буккальных эпителиоцитах в обследованных группах. Установлено, что степень варьирования изучаемых показателей у девушек была выше, чем у юношей. Установлены корреляционные связи повреждений митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты с частотой встречаемости клеток с аномалиями ядра. Показано сходство в изменении частот повреждений митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты и ядерных аберраций.

Заключение. Установленные общие закономерности изменения цитогенетических и молекулярно-генетических показателей стабильности генетического материала, выявленные корреляционные связи между частотой встречаемости аномалий клеточного ядра в клетках буккального эпителия и повреждениями митохондриальной дезоксирибонуклеиновой кислоты указывают на общность причин возникновения молекулярных и клеточных повреждений генетического материала, что позволяет говорить о возможности использования указанных показателей для прогноза и уточнения значений друг друга.