Разработка методики идентификации полиморфизма rs6265 в гене нейротрофического фактора мозга человека
- Авторы: Кутелев Г.Г.1, Криворучко А.Б.1, Трандина А.Е.1, Морозова Н.Е.2, Черкашин Д.В.1, Иванов А.М.1, Овчинников Д.В.1, Глушаков Р.И.1
-
Учреждения:
- Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
- Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого
- Выпуск: Том 23, № 4 (2021)
- Страницы: 63-70
- Раздел: Клинические исследования
- Статья получена: 23.09.2021
- Статья одобрена: 06.10.2021
- Статья опубликована: 15.12.2021
- URL: https://journals.eco-vector.com/1682-7392/article/view/80926
- DOI: https://doi.org/10.17816/brmma80926
- ID: 80926
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Проведен анализ и обобщение данных литературных источников, характеризующих структурную организацию, регуляцию экспрессии и функциональную активность нейротрофического фактора мозга человека, который является одним из наиболее распространенных регуляторов биологических процессов в нервной системе. Отмечены результаты многочисленных исследований, демонстрирующих ассоциацию гена нейротрофического фактора головного мозга (BDNF) с патофизиологией аффективных расстройств, подтвержден его вклад в развитие нейропластичности. Представлены результаты разработки дизайна пары праймеров и адаптации реакции амплификации региона BDNF длиной 433 пар нуклеотидов, содержащего полиморфный локус rs6265. Провели отбор эндонуклеазы рестрикции. Последовательность праймеров, их локализация и соотношение с сайтом рестрикции обеспечили разделение альтернативных аллелей, необходимое для успешной идентификации данного маркера. Использование предлагаемой техники позволило однозначно идентифицировать генотип в 38 исследуемых пробах цельной крови и выявить редкие аллельные варианты. Также во всех пробах установлена частота полиморфных вариантов rs6265 гена BDNF. Отмечено увеличение доли генотипов G/A и A/A полиморфизма rs6265 гена BDNF в группе обследованных, систематически подвергавшихся воздействию экстремальных факторов. Выявление людей с редко встречающимся генотипом А/А полиморфного локуса rs6265 гена BDNF имеет большое значение для системы мониторинга процессов долговременной потенциации, ведущих к развитию нейропсихической патологии. Доказана возможность реализации данного способа генотипирования в типовой лаборатории, использующей полимеразную цепную реакцию. Предложенный вариант полимеразной цепной реакции с последующим анализом полиморфизма длин фрагментов рестрикции можно использовать как быструю, недорогую и надежную систему идентификации однонуклеотидных генетических полиморфизмов.
Полный текст
ВВЕДЕНИЕ
Нейротрофический фактор головного мозга (BDNF — от англ. brain-derived neurotrophic factor) играет важную роль в регуляции процессов нейрогенеза, формирования клеток определенной медиаторной специфичности, модификации нейронных сетей с образованием новых синапсов и перестройки синаптической передачи [1–3]. BDNF относится к семейству нейротрофинов, в головном мозге BDNF активен в гиппокампе, коре и базальной части переднего мозга — отделах, важных для обучения, приобретения и консолидации памяти, а также процессов, связанных с вознаграждением и когнитивными функциями [4–7]. Многочисленные ассоциативные исследования указывают на наличие взаимосвязи однонуклеотидных замен в гене BDNF с патогенезом аффективных расстройств [8, 9].
Ген BDNF человека локализован в регионе р14 11-й хромосомы, содержит 12 экзонов, 9 из которых имеют специфические промоторы (I–VIII 5`-экзоны, сплайсирующиеся (соединяющиеся) с общим 3`-экзоном IX; рис. 1).
Рис. 1. Схематичное изображение структурной организации гена BDNF
Альтернативный сплайсинг приводит к 17 вариантам транскриптов с различными 5`- и 3`-нетранслируемыми областями, но все они имеют общую область (включая экзон X), кодирующую предшественника — proBDNF [10–12]. Эпигенетические факторы, включающие промоторные области, насыщенные СрG-островками, приводящие к метилированию гена и деацилированию гистонов (чаще Н3 и Н4 в промоторах I и IV), определяют разнообразие регуляции транскрипционной активности BDNF. Эти особенности могут приводить к изменению функциональной активности и метаболизма BDNF, способствуя развитию нейропсихической патологии [13, 14].
Ген BDNF играет значительную роль в развитии центральной нервной системы. Как было показано в исследовании у мышей с нокаутом этого гена, мутации вызывают потерю значительной части краниальных и спинномозговых периферических сенсорных и симпатических нейронов, вплоть до постнатальной летальности [15].
Одно из наиболее частых и изученных изменений нуклеотидной последовательности во 2-м экзоне гена BDNF — однонуклеотидный полиморфизм G196A, вызывающий аминокислотную замену (валин на метионин) в кодоне 66 (val66met), — rs6265 [16–18]. Генотип Val/Val представляет собой генотип «дикого типа», в то время как Val/Met и Met/Met отражают гетерозиготность и гомозиготность соответственно. Полиморфизм BDNF Val66Met — относительно распространенный вариант, однако оценки его частоты варьируют в зависимости от этнической принадлежности [19]. В полногеномном поиске ассоциаций на выборке более 1 млн человек общая толерантность к риску и рискованному поведению была ассоциирована с однонуклеотидным полиморфизмом (SNP — от англ. single nucleotide polymorphism) rs6265 (р = 3×10–11) [20]. Полиморфизм Val66Met (rs6265) также связывают с множеством эффектов, влияющих на обучение и различные типы памяти [21].
K. Kennedy et al. [22] также изучали влияние BDNF rs6265 на множественные показатели памяти (элементарные, ассоциативные, предполагаемые, субъективные жалобы). Описана роль BDNF в развитии посттравматических стрессовых расстройств [23–25]. При этом не удалось подтвердить ассоциацию данного полиморфизма с развитием депрессии [26].
Несмотря на прогресс в развитии геномных технологий, процедура точечного определения однонуклеотидного полиморфизма последовательностей дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) с регистрацией накопления продуктов амплификации непосредственно в ходе реакции (ПЦР в реальном режиме времени) остается самой востребованной в лабораторной и исследовательской практике.
Вместе с тем данная методика генотипирования имеет ряд ограничений в применении и далеко не всегда позволяет однозначно определить присутствие каждого из аллелей исследуемой геномной вариации. Трудоемкость дизайна ключевых компонентов, длительность процесса оптимизации и необходимость проведения многократного сравнительного контроля эффективности в ряде случаев делают процесс определения генотипа недоступным для практических лабораторий.
В настоящее время методы генотипирования, основанные на ПЦР с детекцией продуктов реакции в режиме реального времени служат одними из наиболее часто используемых в сегменте низко- и среднепропускного скрининга SNP. Однако, несмотря на ряд преимуществ, технология ПЦР в режиме реального времени далеко не всегда способна обеспечить однозначную идентификацию присутствия каждого из аллелей и требует проведения тщательного контроля реальной разрешающей способности. При этом некоторые производители готовых наборов для выявления полиморфизмов в генах человека компенсируют недостатки дизайна олигонуклеотидов и субоптимальных условий проведения реакции применением альтернативных критериев анализа данных, тем самым искусственно занижая специфичность и увеличивая долю ошибочно интерпретированных результатов. Дополнительным фактором, ограничивающим массовое использование ПЦР в реальном времени для генетических исследований, могут быть высокая стоимость и длительность разработки тест-набора, гарантирующего успешную работу в рамках реализации поставленной исследователем задачи.
Данные факты определили необходимость разработки надежной, быстрой, простой в использовании и доступной для любой молекулярно-биологической лаборатории методики детекции полиморфизма BDNF rs6265 (Val66Met).
Цель исследования — разработка и апробация методики выявления полиморфизма rs6265 в гене BDNF, отличающейся простотой использования и эффективностью идентификации.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Проанализированы данные 38 обследуемых (36 мужчин и 2 женщин) в возрасте от 29 до 54 лет (средний возраст 38,9 года), которые были разделены на 2 группы. В основную группу вошли 26 человек в возрасте от 34 до 49 лет (средний возраст 30,4 года), профессиональная деятельность которых была связана с систематическим воздействием экстремальных факторов (таких как перепады барометрического давления, снижение атмосферного давления и парциального давления кислорода, шумы, вибрация и т. д.). В состав контрольной группы, сопоставимой по возрасту с основной, вошли 12 человек, у которых работа исключала столкновение с экстремальными факторами.
Статистический анализ и описание результатов исследования проводили с помощью программы MS Excel.
Для проведения анализа использовали свежую цельную кровь, взятую у испытуемых в вакуумную систему с 6% этилендиаминтетрауксусной кислотой.
Образцы были подвергнуты процедуре селективного лизиса эритроцитов с помощью раствора гемолитика. Гемолитик является селективно гипотоническим только по отношению к эритроцитам, и осмотическое давление приводит к разрыву их клеточной мембраны, при этом интактные лейкоциты формируют осадок на дне пробирки.
Экстракцию ДНК из лейкоцитов периферической крови выполняли путем лизирования клеток и спиртового осаждения согласно общепринятой методике. Концентрация выделенной ДНК в пробах варьировала от 37 до 176 нг/мкл. Оптимальное количество ДНК, необходимое для постановки ПЦР, составляло 10–30 нг.
Исследование вариабельного участка гена BDNF rs6265 (Val66Met) проведено с помощью ПЦР c анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов.
Для дизайна праймеров, фланкирующих (ограничивающих) регион rs6265, использовали последовательность гена BDNF длинной 433 пар нуклеотидов (п. н.). Выбор прямого и обратного праймеров производили, используя комбинацию данных из литературных источников [27, 28] и специализированных веб-приложений. В результате для амплификации интересующего нас фрагмента гена BDNF был выбран прямой праймер F (5’- GTTCCACCAGGTGAGAAGAGTG-3’) и обратный праймер R (5’- ACTACTGAGCATCACCCTGGA-3’), рис. 2. Расчетная температура плавления олигонуклеотидов составляла 65,5 и 65,7 оC соответственно. Праймеры не образуют стабильных вторичных структур. Присутствует 3› GC clamp. Длина амплифицируемого фрагмента 316 п. н.
Рис. 2. Локализация полиморфного участка G > A и сайта рестрикции в целевом фрагменте гена BDNF
Для ферментативного гидролиза полиморфного участка G > A rs6265 (см. рис. 2) можно использовать эндонуклеазу рестрикции Eco72I фирмы ThermoFisher Scientific (Соединенные Штаты Америки — США) или ее изошизомеры (PmII, Acvl, PspCI и др.).
Исходя из принципов экономической целесообразности, нами была выбрана эндонуклеаза рестрикции PspCI фирмы «СибЭнзим» (Россия). Данный фермент специфически взаимодействует с последовательностью нуклеотидов CAC^GTG (см. рис. 2) и катализирует реакцию гидролиза ДНК, расщепляя нуклеотидную цепь внутри участка узнавания. После рестрикции по данному сайту фрагмент ДНК общей длиной 316 п. н. разделится на два по 217 и 99 п. н. (рис. 3).
Рис. 3. Схема детекции полиморфного варианта rs6265, основанная на анализе различий длины рестрикционных фрагментов
При дизайне праймеров старались добиться максимально возможной на данном участке ДНК разницы в длине фрагментов после гидролиза для упрощения визуальной дискриминации аллелей при разделении продуктов реакции в агарозном геле.
В том случае, если произойдет однонуклеотидная замена G/A, сайт узнавания будет модифицирован, гидролиза ДНК не будет, фрагмент длиной 316 п. н. останется целым. Для амплификации целевого фрагмента использовали готовую смесь на основе Taq-полимеразы с «горячим стартом» qPCRmix-HS фирмы «Евроген» (Россия) и следующие условия проведения ПЦР. Предварительная денатурация при 95 °C (5 мин). 30 циклов амплификации: денатурация при 95 °C (30 с), отжиг с градиентом от 62 до 52 °C (30 с), элонгация при 72 °C (30 с). Заключительный синтез при 72 °C (7 мин).
С целью экспериментального определения оптимальной температуры отжига праймеров, зачастую значительно отличающейся от расчетной, провели предварительную ПЦР с температурой отжига 62; 61,2; 60; 58,1; 55,8; 53,9; 52,7 и 52 °C. Амплификацию осуществляли в термоциклере «Т-100» фирмы «Bio-Rad» (США) с функцией температурного градиента.
Смесь для реакции объемом 25 мкл включала: 5 мкл готовой 5 × ПЦР-смеси, 2 мкл ДНК, по 1 мкл прямого и обратного праймеров рабочей концентрации 0,4 и 16 мкл безнуклеазной воды высокой степени очистки.
Для проведения 8 независимых реакций амплификации использовали одинаковые компоненты смеси и условия термоциклирования, за исключением температуры отжига олигонуклентидов. После проведения ПЦР с указанными условиями продукты реакции анализировали с помощью электрофореза в 1,5% агарозном геле с окраской бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом излучении на системе гель-документирования Gel Doc XR+ фирмы «Bio-Rad» (США). В результате эксперимента оптимальной температурой гибридизации олигонуклеотидов можно признать 58,1 °C. Таким образом, окончательные условия амплификации целевого фрагмента были скорректированы.
Для выявления однонуклеотидной замены rs6265 ПЦР-продукт, полученный для каждого обследуемого, подвергали ферментативному гидролизу с 10 ед. эндонуклеазы рестрикции PspCI на протяжении 3 ч. В процессе первоначальной инкубации с этим ферментом был выявлен любопытный факт. Оказалось, что в отличие от Eco72I фирмы ThermoFisher Scientific (США), гидролизующего двухцепочечную ДНК непосредственно в смеси после амплификации, эндонуклеаза PspCI компании «СибЭнзим» полностью ингибируется продуктами ПЦР. Уточнение данного факта потребовало введения в протокол дополнительной очистки реакционной смеси после ПЦР. Очистку выполняли с использованием набора Cleanup Mini фирмы «Евроген» (Россия). После отработки условий рестрикции удалось добиться четкого разделения аллелей полиморфизма rs6265 BDNF G > A (рис. 4).
Рис. 4. Результат определения генотипа G/G путем разделения фрагментов рестрикции в 1,5% агарозном геле
Полученные в результате амплификации с последующей очисткой двухцепочечной ДНК из реакционной смеси и ферментативным гидролизом фрагменты анализировали с помощью микрочипового электрофореза с использованием системы MultiNA фирмы Shimadzu (Япония). Валидацию описанной технологии идентификации SNP проводили с помощью секвенирования ДНК с использованием автоматического генетического анализатора Applied Biosystems 3500 фирмы Thermo Fisher Scientific (США). Расхождений в определении генотипов всех исследованных образцов не выявлено.
Результаты и их обсуждение. Данные полученной системы генотипирования были протестированы на 38 образцах ДНК включенных в обследование. При исследовании генетического полиморфизма rs6265 гена BDNF у 38 участников частоты аллелей распределились следующим образом (рис. 5).
Рис. 5. Частота выявления полиморфных вариантов rs6265 гена BDNF у исследуемых групп
Наличие генотипов G/A и A/A ассоциировано с влиянием на общие когнитивные способности, предрасположенностью к нарушению памяти, расстройствам пищевого поведения (например, нервная анорексия и нервная булимия), биполярным аффективным расстройством, тревожным расстройством, болезнью Альцгеймера, Паркинсона и защитным эффектом при обсессивно-компульсивном расстройстве [8, 9]. Отмечено увеличение доли генотипов G/A и A/A полиморфизма rs6265 гена BDNF в группе обследованных, систематически подвергавшихся воздействию экстремальных факторов.
В результате проведенного исследования нами были отработаны условия модификации «классической» ПЦР-методики, позволяющие проводить однозначную дискриминацию аллелей полиморфного варианта G196A гена BDNF. Использование предлагаемой техники позволило однозначно идентифицировать генотип во всех 38 исследуемых пробах и выявить редкие аллельные варианты. Выявление людей с редко встречающимся генотипом А/А полиморфного локуса rs6265 гена BDNF имеет большое значение для системы мониторинга процессов долговременной потенциации, ведущих к развитию нейропсихической патологии. Данный способ генотипирования может быть практически реализован в типовой ПЦР-лаборатории с минимальными материальными затратами.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Предложенный вариант полимеразной цепной реакции с последующим анализом полиморфизма длин фрагментов рестрикции можно использовать как быструю, недорогую и надежную систему идентификации однонуклеотидных генетических полиморфизмов.
Об авторах
Геннадий Геннадьевич Кутелев
Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
Автор, ответственный за переписку.
Email: gena08@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-6489-9938
SPIN-код: 5139-8511
кандидат медицинских наук
Россия, Санкт-ПетербургАлександр Борисович Криворучко
Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
Email: krab25@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-2035-4888
SPIN-код: 1324-0239
кандидат медицинских наук
Россия, Санкт-ПетербургАлександра Евгеньевна Трандина
Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
Email: sasha-trandina@rambler.ru
ORCID iD: 0000-0003-1875-1059
SPIN-код: 6089-3495
Россия, Санкт-Петербург
Наталия Евгеньевна Морозова
Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого
Email: natusmorozovna@gmail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3001-2593
SPIN-код: 4716-8586
Scopus Author ID: 56454006100
ResearcherId: A-7955-2014
кандидат биологических наук
Россия, Санкт-ПетербургДмитрий Викторович Черкашин
Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
Email: cherkashin_dmitr@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-1363-6860
SPIN-код: 2781-9507
доктор медицинских наук, профессор
Россия, Санкт-ПетербургАндрей Михайлович Иванов
Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
Email: iamvma@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-8899-7524
SPIN-код: 6971-1744
Scopus Author ID: 55867182100
доктор медицинских наук, профессор
Россия, Санкт-ПетербургДмитрий Валерьевич Овчинников
Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
Email: dv.ovchinnikov-vma@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-8408-5301
SPIN-код: 5437-3457
Scopus Author ID: 36185599800
кандидат медицинских наук, доцент
Россия, Санкт-ПетербургРуслан Иванович Глушаков
Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова МО РФ
Email: glushakovruslan@gmail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0161-5977
SPIN-код: 6860-8990
Scopus Author ID: 55263592100
кандидат медицинских наук
Россия, Санкт-ПетербургСписок литературы
- Lledo P., Alonso M., Grubb M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits // Nat Rev Neurosci. 2006. Vol. 7, No. 3. P. 179–193. doi: 10.1038/nrn1867
- Shors T., Miesegaes G., Beylin A., et al. Neurogenesis in the adult is involved in the formation of trace memories // Nature. 2001. Vol. 410, No. 6826. P. 372–376. doi: 10.1038/35066584
- Deng W., Saxe M., Gallina I., Gage F. Adult-born hippocampal dentate granule cells undergoing maturation modulate learning and memory in the brain // J Neurosci. 2009. Vol. 29, No. 43. P. 13532–13542. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3362-09.2009
- Snyder J., Hong N., McDonald R., Wojtowicz J. A role for adult neurogenesis in spatial long-term memory // Neuroscience. 2005. Vol. 130, No. 4. P. 843–852. doi: 10.1016/j.neuroscience.2004.10.009
- Yamada K., Nabeshima T. Brain-derived neurotrophic factor/TrkB signaling in memory processes // J Pharmacol Sci. 2003. Vol. 91, No. 4. P. 267–270. doi: 10.1254/jphs.91.267
- Mizui T., Ishikawa Y., Kumanogoh H., et al. BDNF pro-peptide actions facilitate hippocampal LTD and are altered by the common BDNF polymorphism Val66Met // Proc Natl Acad Sci USA. 2015. Vol. 112, No. 23. P. 3067–3074. doi: 10.1073/pnas.1422336112
- Harrisberger F., Smieskova R., Schmidt A., et al. BDNF Val66Met polymorphism and hippocampal volume in neuropsychiatric disorders: A systematic review and meta-analysis // Neurosci Biobehav Rev. 2015. Vol. 55. P. 107–118. doi: 10.1016/j.neubiorev.2015.04.017
- Thompson R., Weickert C., Wyatt E., Webster M. Decreased BDNF, trkB-TK+ and GAD67 mRNA expression in the hippocampus of individuals with schizophrenia and mood disorders // J Psychiatry Neurosci. 2011. Vol. 36, No. 3. P. 195–203. doi: 10.1503/jpn.100048
- Gonul A., Akdeniz F., Taneli F., et al. Effect of treatment on serum brain-derived neurotrophic factor levels in depressed patients // Eur Arch Psychiatry Clin. Neurosci. 2005. Vol. 255, No. 6. P. 381–386. doi: 10.1007/s00406-005-0578-6
- Boulle F., van den Hove D., Jakob S., et al. Epigenetic regulation of the BDNF gene: implications for psychiatric disorders // Mol Psychiatry. 2012. Vol. 17, No. 6. P. 584–596. doi: 10.1038/mp.2011.107
- Wang M., Xie Y., Qin D. Proteolytic cleavage of proBDNF to mBDNF in neuropsychiatric and neurodegenerative diseases // Brain Res Bull. 2021. Vol. 166. P. 172–184. doi: 10.1016/j.brainresbull.2020.11.005
- Li J.Y., Liu J., Manaph N.P.A., et al. ProBDNF inhibits proliferation, migration and differentiation of mouse neural stem cells // Brain Res. 2017. Vol. 1668. P. 46–55. doi: 10.1016/j.brainres.2017.05.013
- Karpova N. Role of BDNF epigenetics in activity-dependent neuronal plasticity // Neuropharmacology. 2014. Vol. 76. P. 709–718. doi: 10.1016/j.neuropharm.2013.04.002
- Ernfors P., Kucera J., Lee K.F., et al. Studies on the physiological role of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 in knockout mice // Int J Dev Biol. 1995. Vol. 39, No. 5. P. 799–807.
- Ernfors P., Kucera J., Lee K., et al. Studies on the physiological role of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 in knockout mice // Int J Dev Biol. 1995. Vol. 39, No. 5. P. 799–807.
- Sanwald S., Montag C., Kiefer M. Depressive emotionality moderates the influence of the BDNF Val66Met polymorphism on executive functions and on unconscious semantic priming // J Mol Neurosci. 2020. Vol. 70, No. 5. P. 699–712. doi: 10.1007/s12031-020-01479-x
- Zhao Y., Zhu R., Xiao T., Liu X. Genetic variants in migraine: a field synopsis and systematic re-analysis of meta-analyses // J Headache Pain. 2020. Vol. 21, No. 1. P. 13. doi: 10.1186/s10194-020-01087-5
- Middeldorp C.M., Slof-Op’t Landt M.C., Medland S.E., et al. Anxiety and depression in children and adults: influence of serotonergic and neurotrophic genes? // Genes Brain Behav. 2010. Vol. 9, No. 7. P. 808–816. doi: 10.1111/j.1601-183X.2010.00619
- Petryshen T., Sabeti P., Aldinger K., et al. Population genetic study of the brain-derived neurotrophic factor (BDNF) gene // Mol Psychiatry. 2010. Vol. 15, No. 8. P. 810–815. doi: 10.1038/mp.2009.24
- Linnér R., Biroli P., Kong E., et al. Genome-wide association analyses of risk tolerance and risky behaviors in over 1 million individuals identify hundreds of loci and shared genetic influences // Nature Genetics. 2019. Vol. 51, No. 2. P. 245–257. doi: 10.1038/s41588-018-0309-3
- Egan M., Kojima M., Callicott J., et al. The BDNF val66met polymorphism affects activity-dependent secretion of BDNF and human memory and hippocampal function // Cell. 2003. Vol. 112, No. 2. P. 257–269. doi: 10.1016/s0092-8674(03)00035-7
- Kennedy K., Reese E., Horn M., et al. BDNF val66met polymorphism affects aging of multiple types of memory // Brain Res. 2015. Vol. 1612. P. 104–117. doi: 10.1016/j.brainres.2014.09.044
- Notaras M., van den Buuse M. Neurobiology of BDNF in fear memory, sensitivity to stress, and stress-related disorders // Mol Psychiatry. 2020. Vol. 25, No. 10. P. 2251–2274. doi: 10.1038/s41380-019-0639-2
- Carver C., Johnson S., Joormann J., et al. Childhood adversity interacts separately with 5-HTTLPR and BDNF to predict lifetime depression diagnosis // J Affect Disord. 2011. Vol. 132, No. 1–2. P. 89–93. doi: 10.1016/j.jad.2011.02.001
- Chen J., Li X., McGue M. Interacting effect of BDNF Val66Met polymorphism and stressful life events on adolescent depression // Genes Brain Behav. 2012. Vol. 11, No. 8. P. 958–965. doi: 10.1111/j.1601-183X.2012.00843.x
- Gyekis J., Yu W., Dong S., et al. No association of genetic variants in BDNF with major depression: A meta- and gene-based analysis // Am J Med Genet B Neuropsychiatric Genet. 2013. Vol. 162, No. 1. P. 61–70. doi: 10.1002/ajmg.b.32122
- Sheikh H., Hayden E., Kryski K., et al. Genotyping the BDNF rs6265 (val66met) polymorphism by one-step amplified refractory mutation system PCR // Psychiatric Genetics. 2010. Vol. 20, No. 3. P. 109–112. doi: 10.1097/YPG.0b013e32833a2038
- Iqbal M., Yaqoob T., Ali S., Khan A. A functional polymorphism (rs6265, G > A) of brain-derived neurotrophic factor gene and breast cancer: An association study // Breast Cancer: Basic Clin Res. 2019. Vol. 13. P. 1178223419844977. DOI: 1178223419844977
Дополнительные файлы
