CYTOKINE LEVEL IN PERIPHERAL BLOOD OF PREGNANT WOMEN WITH FETAL LOSS SYNDROME IN PAST HISTORY

Abstract

The study is based on determining serum levels of cytokines in women with physiological pregnancy and fetal loss syndrome in past history; a comparative analysis of the cytokine content in somatically healthy controls was performed.

Full Text

Проблема невынашивания беременности в насто- В последние годы внимание исследователей приящее время является не только медицинской, но и со- влекает роль естественных Т-регуляторных клеток в инциальной, что связано со снижением естественного дукции толерантности к аллоантигенам плода, которые прироста населения. Таким образом, возникает необхо- в свою очередь позволяют расценивать их в качестве димость поиска новых путей к изучению и решению основных претендентов на роль клеток, контролируюпроблемы синдрома потери плода. Особое значение щих баланс в системе «мать-плод», а также предполоимеют прогнозирование и доклиническая диагностика жить их участие в патогенезе невынашивания беременнарушений развития беременности, а усилия, направ- ности [7, 9]. Однако сообщения об этом в доступной ленные на ее сохранение и полноценное течение, дол- литературе практически отсутствуют. В этом аспекте жны прилагаться еще до ее наступления [4, 5, 6]. представляет интерес изучение функции Th1 и Th2 в Несмотря на мультифакторную природу невына- плане оценки местного цитокинового статуса, баланса шивания беременности, одними из первостепенных и синтеза цитокинов периферической крови [2, 3]. причин являются иммунные механизмы, которые в свою очередь активируют клеточные и биохимические реак- ЦЕЛЬ РАБОТЫ ции, запускающие каскад патофизиологических процес- Количественное определение сывороточного сов, приводящих к отторжению плода [1, 8]. уровня провоспалительных и противовоспалительных Выпуск 2 (46). 2013 131 цитокинов в периферической крови беременных женщин с физиологической беременностью и с синдромом потери плода в анамнезе во втором триместре беременности, а также сравнение полученных данных с популяционными. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Обследовано 192 пациентки, наблюдающихся в МУЗ «Женская консультация № 5» и МУЗ «Женская консультация № 6» г. Волгограда. Все обследуемые были разделены на три группы. Первую группу составили 39 женщин с физиологическим течением беременности, вторую — 64 беременных с синдромом потери плода в анамнезе. Группы были репрезентативны по возрасту (29 ± 4,05) лет и сроку гестации (18 ± 3,2) недель. Контрольную группу составили 89 небеременных соматически здоровых женщин без репродуктивных потерь в анамнезе [средний возраст (27,8 ± 5,06) лет]. У всех пациенток было получено информированное согласие на использование данных обследования в научных целях и согласие этического комитета на проведение исследования. Материалом для исследования послужила периферическая кровь пациенток, полученная при плановом посещении врача без проведения дополнительных манипуляций. Цитокины определялись с помощью наборов реактивов для иммуноферментного анализа производства ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург): «ИФА-^-4», «ИФА-IL-e», «ИФА-^-17А», «ИФА-IL-W», «ИФА-^-1в», «ИФА-IFN-gamma», «ИФА-TNF-alpha» на фотометре им-муноферментном планшетном «Эфос» 9305 (ОАО «Московский завод Сапфир», Москва). В наборах использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Концентрация интерлейкинов в определяемых образцах рассчитывалась на основании калибровочной кривой, построенной по полученным значениям калибровочных проб. Статистические расчеты производили с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.0 фирмы StatSoft, Inc. (США). Значимость различий при сравнении групп оценивалась непараметрическим U-критерием Манна-Уитни, достоверность различия частот встречаемости оценивали с помощью критерия ч2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Анализ содержания провоспалительных (ИЛ-1 в, ИЛ- 6, ИЛ-17а, IFNn TNF6) и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-10, ИЛ-4) в сыворотке крови обследуемых групп женщин показал значимое увеличение количества TNF6 [(18,7 ± 4,2) пг/мл, р < 0,05] и ИЛ-17а (4,3 ± 1,0) пг/мл во второй группе беременных с синдромом потери плода в анамнезе по сравнению с первой группой женщин с физиологическим течением беременности [(7,4 ± 1,0) и (1,2 ± 0,2) пг/мл соответственно]. Отмечено, что в контрольной группе небеременных соматически здоровых женщин уровень ИЛ-17а практически не отличался от такового в первой группе обследуемых (1,3 ± 0,1) пг/ мл), в то время как средние значения показателя TNF6 были ниже в 1,5 и 4 раза у беременных первой и второй групп [(4,73 ± 0,5) против (7,4 ± 1,0) и (18,7 ± 4,2) пг/мл соответственно, р < 0,05]. В работе установлено, что среднее содержание IFN в сыворотки крови достигает своего максимума у обследуемых первой группы с физиологической гестации [(7,1 ± 1,4) пг/мл, р < 0,05] со снижением уровня интерферона во второй и контрольной группах [(4,2 ± 1,0) и (2,2 ± 1,4) пг/мл соответственно] (табл. ). Периферический уровень цитокинов у обследуемых групп женщин, M ± m, пг/мл Показа тель Группы обследуемых контрольная группа группа 1 (женщины с физиологическим течением беременности) группа 2 (беременные женщины с синдромом потери плода в анамнезе) ИЛ-10 2,2 ± 0,3 4,2 ± 0,1 6,5 ± 1,4* ИЛ-1в 7,4 ± 0,8 8,0 ± 1,0 5,9 ± 0,9 ИЛ-6 5,0 ± 1,5 4,3 ± 1,1 6,4 ± 1,6 ИЛ-17а 1,3 ± 0,1 1,2 ± 0,2 4,3 ± 1,0 * ИЛ-4 2,2 ± 0,6 7,4 ± 1,7* 6,9 ± 1,7* !ПМг 2,2 ± 1,4 7,1 ± 1,4* 4,2 ± 1,0 TNF6 4,7 ± 0,5 7,4 ± 1,0 18,7 ± 4,2* *р < 0,05, сравнение с контрольной группой по U-критерию Манна-Уитни. Согласно литературным данным, определенный уровень TNF6 необходим для нормального развития беременности, так как ограничивает процессы синтеза ДНК клетками трофобласта, которые экспрессируют рецепторы для TNF6. Однако избыточная продукция TNF6 приводит к нарушению микроциркуляции и тканевой гипоксии, что может негативно сказываться на развитии беременности. В результате происходит прогрессивное снижение маточно-плацентарного кровотока и нарушение метаболической, трофической, гормональной функции плаценты. ИЛ-17а стимулирует выработку ИЛ-6, ИЛ-8, Г-КСФ, TNF6, простаглан-дина Е2 клетками эпителия, эндотелия и фиброблас-тами, проявляет выраженную провоспалительную активность. Следовательно, повышенный уровень ИЛ-17а свидетельствует о наличии воспалительного компонента в сыворотке крови беременных женщин с синдромом потери плода в анамнезе. Для анализа баланса периферического уровня цитокинов оценивалось содержание противовоспалительных ИЛ-10 и ИЛ-4. При этом наблюдалось статистически значимое увеличение содержания ИЛ-10 [(6,5 ± 1,4) пг/мл, р < 0,05] и ИЛ-4 [(6,9 ± 1,7) пг/мл, р < 0,05] в группе женщин с синдромом потери плода в анамнезе по отношению к контрольной группе [в среднем (2,2 ± 0,5) пг/мл]. Обращает на себя внимание, что у женщин с физиологическим течением беременности наблюдались более вы 132 Выпуск 2 (46). 2013 сокие значения уровня ИЛ-4 (7,4 ± 1,7) пг/мл по сравнению с таковыми показателями во второй группе обследуемых (6,9 ± 1,7) пг/мл. Сравнительные данные уровня цитокинов в группах обследуемых женщин показали (рис.), что при физиологической беременности наиболее высокие показатели выявлены у ИЛ-1 в (8,0 ± 1,0) и ИЛ-4 (7,4 ± 1,7) пг/мл, при синдроме потери плода — ИЛ-10 (6,5 ± 1,4), ИЛ-6 (6,4 ± 1,6), ИЛ-17а (4,3 ± 1,0) и TNF6 (18,7 ± 4,2) пг/мл, у небеременных соматически здоровых женщин — достоверно высоких показателей цитокинов не выявлено. пг/мл 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 шей □ Контрольная группа ■ 1 группа □ 2 группа ИЛ-10ИЛ-1В ИЛ-6 ИЛ- ИЛ-4 IFN TNFa 17а Рис. Сравнительные данные уровня цитокинов в группах обследуемых женщин (*р < 0,05, при сравнении с группой женщин с физиологической беременностью; #р < 0,05 при сравнении с контрольной группой) ИЛ-4 и ИЛ-10 являются противовоспалительными цитокинами, повышенное содержание которых во время беременности является благоприятным прогностическим признаком, обеспечивая иммуносупрессию по отношению к развивающейся фетоплацентарной единице. Напротив, сохраняющийся высокий уровень про-воспалительных цитокинов TNF6 и ИЛ-17а в группе женщин с синдромом потери плода в анамнезе свидетельствует о неустановившемся ко второму триместру иммунном балансе в системе мать-плод-плацента. Данное состояние может провоцировать угрозу прерывания беременности, наблюдающуюся в данной группе. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, установлено, что в процессе физиологической беременности продукция цитокинов в различной степени повышается, особенно за счет ИЛ-1 в и ИЛ-4. У беременных женщин с синдромом потери плода в анамнезе наблюдаются нарушения баланса про- и противовоспалительных цитокинов, что проявляется повышением уров ня ИЛ-10, ИЛ-6, ИЛ-17а, TNF6. Преобладание провоспали-тельных компонентов (TNF6 и ИЛ-17а) на фоне высокого уровня противовоспалительных цитокинов (ИЛ-10 и ИЛ-4) свидетельствует о несовершенности системы перестройки иммунной системы в сторону преобладания иммуносуп-рессорных механизмов ко второму триместру беременности. При физиологическом течении гестационного процесса иммунный баланс устанавливается к 10—12 неделе. Сохраняющееся состояние угрозы выкидыша во втором триместре у большинства женщин с синдромом потери плода в анамнезе может быть спровоцировано атакой про-воспапительных факторов на трофобласт Следовательно, обнаружение цитокинового дисбаланса наряду с тщательным сбором акушерско-гинекологического анамнеза позволяет своевременно предупредить развитие осложнений во время беременности, в том числе во втором триместре. Особенно важным представляется определение уровня цитокинов на этапе прегравидарной подготовки, что позволит провести своевременную профилактику нарушения течения беременности, в том числе и потерю плода.